目的:探讨KLF11在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响。方法:收集60例胃癌组织及其对应的癌旁组织，用RT-PCR检测KLF11 mRNA表达，通过小分子RNA干扰抑制胃癌细胞BGC823中KLF11表达水平；MTT法检测细胞的活力；流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率；采用Western blot检测细胞周期、凋亡相关指标蛋白和Wnt/β-catenin的改变；采用酶标仪检测Caspase3酶活性。结果:KLF11 mRNA在胃癌组织相对表达水平较癌旁组织升高（ t=11.38， P<0.05），其表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均有关（均 P<0.05）；沉默KLF11表达后，胃癌BGC823细胞的增殖能力受抑制（ F=19.56， P<0.05）；G 0/G 1期细胞数目增多［（41.40%±0.98%）比（66.53%±1.01%）， F=32.69， P<0.05］，并且凋亡率升高［（41.44%±1.59%）比（15.42%±0.86%）， F=35.35， P<0.05］；Bax、Cleaved Caspase3蛋白表达上升（ F=23.33、33.63，均 P<0.05），β-catenin、Bcl-2、CyclinD1、CyclinE蛋白表达降低（ F=22.21、16.24、26.75、33.42，均 P<0.05），Caspase3酶的活性增加（ F=16.56， P<0.05）。 结论:KLF11在胃癌组织中呈高表达，下调其表达可抑制Wnt/β-catenin信号通路，抑制胃癌细胞增殖，诱导细胞凋亡。

目的:探讨沉默肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2（ARPC2）基因对甲状腺乳头状癌（PTC）TPC-1细胞生物学特性的影响。方法:采用无义短发夹RNA（shRNA）序列慢病毒（shCtrl）感染的TPC-1细胞作为对照组，采用含有ARPC2 shRNA干扰序列慢病毒（shARPC2）感染的TPC-1细胞作为实验组。利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞术、蛋白质印迹法以及克隆形成实验检测抑制ARPC2表达对TPC-1细胞增殖、细胞周期及其相关蛋白表达、克隆形成的影响；利用流式细胞术和蛋白质印迹法检测抑制ARPC2基因对TPC-1细胞凋亡及相关蛋白的影响。结果:shARPC2可以高效感染TPC-1细胞，72 h后感染效率达到85%以上。MTT法检测显示，与对照组相比，实验组TPC-1细胞的增殖被抑制。实验组S期细胞比例较对照组低[（14.79±0.21）%比（21.13±0.33）%， t=27.77， P<0.05]，实验组G 1与G 2/M期细胞比例较对照组增高[G 1期：（67.57±0.08）%比（62.06±0.36）%， t=25.56， P<0.05；G 2/M期：（17.64±0.12）%比（16.91±0.17）%， t=6.154， P<0.05]。实验组细胞周期相关蛋白CDK2、CyclinE和CyclinD的表达均降低。实验组形成克隆数低于对照组，差异有统计学意义[（10±2）个比（161±6）个， t=9.011， P<0.05]。实验组细胞凋亡率高于对照组[（8.60±0.77）%比（4.08±0.40）%， t=9.011， P<0.05]。对照组抗凋亡因子p21与bcl-2蛋白表达降低，促凋亡因子bax蛋白表达上调。 结论:shRNA干扰ARPC2基因的表达可以抑制PTC TPC-1细胞的增殖，并促进细胞凋亡。ARPC2可能是PTC治疗的生物学新靶标。

目的:研究黄芪多糖对白血病细胞(Jurkat)增殖、凋亡、周期的影响,并进一步探讨其作用机制.方法:不同浓度黄芪多糖(0、100、200、400 μg/mL)作用于Jurkat细胞,细胞计数(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(Real Time PCR)法及蛋白印迹法检测细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期素E(CyclinE)、胱天蛋白酶3(Caspase3)、胱天蛋白酶8(Caspase 8)的mRNA及蛋白表达.结果:不同浓度黄芪多糖(100、200、400 μg/mL)均有效抑制Jurkat细胞增殖,呈剂量及时间依赖性(P＜0.05);流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡情况,随黄芪多糖浓度增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);黄芪多糖处理组细胞中CyclinD1、CyclinE mRNA及蛋白表达下降、Caspase3、Caspase8mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:黄芪多糖能有效抑制白血病Jurkat细胞增殖,促进其凋亡,发挥抗白血病作用.其作用机制与调控CyclinD1、CyclinE表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,促进凋亡相关基因Caspase3、Caspase8表达有关.

目的:探究复元胜白方(FYSBF)对急性髓系白血病(AML)的治疗作用与JAK/STAT信号通路的关系及机制.方法:将AML细胞系HL-60细胞分为对照组、FYSBF组、IL-6组(IL-6为JAK/STAT信号通路激活剂)和FYSBF+IL-6组.对照组HL-60细胞采用正常RPMI 1640培养基培养,FYSBF组HL-60细胞的培养基中添加终浓度为200 μg/mL的FYSBF,IL-6组HL-60细胞的培养基中添加终浓度为100 ng/mL的IL-6,FYSBF+IL-6组HL-60细胞的培养基中添加终浓度为200 μg/mL的FYSBF和100 ng/mL的IL-6.采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移水平,Western blot实验分析蛋白表达水平.结果:与对照组比较,FYSBF组HL-60细胞相对活力、克隆数量、迁移和侵袭细胞数量以及S期细胞比例均降低(P＜0.05),CDK2、cyclin E、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量均降低(P＜0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P＜0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P＜0.05),p21和E-cadherin的蛋白表达量均升高(P＜0.05).与对照组比较,IL-6组HL-60细胞相对活力、克隆数量、迁移和侵袭细胞数量以及S期细胞比例均升高(P＜0.05),CDK2、cyclin E、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量均升高(P＜0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均升高(P＜0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均降低(P＜0.05),p21和E-cadherin的蛋白表达量均降低(P＜0.05).与IL-6组比较,FYSBF+IL-6组HL-60细胞相对活力、克隆数量、迁移和侵袭细胞数量以及S期细胞比例均降低(P＜0.05),CDK2、cyclinE、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量均降低(P＜0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P＜0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P＜0.05),p21和E-cadherin的蛋白表达量均升高(P＜0.05).结论:复元胜白方通过抑制JAK2/STAT3通路激活,进而抑制急性髓系白血病细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化,促进细胞凋亡和细胞周期阻滞.

近年来,关于长非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在疾病中的应用研究被广泛关注.LncRNAs被证实在肿瘤治疗中发挥至关重要的作用,通常作为肿瘤因子或抑癌基因参与调控肿瘤的发生发展.课题组前期通过转录组学发现了在结直肠癌中可以作为靶点的新lncRNA 606938,然而关于其在结直肠癌中的功能及作用机制尚不清楚.本研究通过反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验发现,相比正常结肠上皮细胞,lncRNA 606938在结直肠癌细胞株中低表达.过表达DLD-1与SW620细胞株中lncRNA 606938的表达,结直肠癌细胞的克隆形成能力显著下降(分别下降了 97％和54.5％).流式细胞术的结果显示,lncRNA 606938过表达使细胞周期阻滞在G1期(分别延长了 50.5％和63.9％),且促进结直肠癌细胞的凋亡(分别增加了 1.9％和3.3％).Western印迹结果显示,lncRNA 606938过表达之后,结直肠癌细胞中相关癌基因(β-联蛋白、c-Myc、cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3、CDK 4、CDK 6)的表达下调,抑癌基因(TRIM33、caspase 2、ac-tived caspase 3)的表达上调.而在沉默lncRNA 606938之后得到相反的结果.在机制方面,通过核糖核酸交互沉降实验(RNA pulldown)、RNA免疫共沉淀(RIP)和功能挽救实验(Rescue)证实,ln-cRNA 606938可以靶向结合并促进TRIM33的表达,进而促进β-联蛋白的降解,并抑制β-联蛋白及下游的原癌基因c-Myc、cycline D1等的表达,最终抑制结直肠癌的进程.本研究阐明了lncRNA 606938通过靶向TRIM33/β-catenin信号途径抑制结直肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制,揭示了lncRNA 606938作为抑癌基因的潜力,为结直肠癌的临床治疗提供了新靶点和新策略.

目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路介导间质上皮转化(EMT)在子宫内膜来源间充质干细胞(eMSCs)抑制子宫内膜纤维化中的作用机制.方法 将 18 只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组和eMSCs组,每组6 只.Sham组的大鼠在剖腹手术后不接受任何形式的子宫介入手术.Model组和eMSCs组建立子宫内粘连大鼠模型.eMSCs组在模型损伤后立即移植eMSCs细胞悬液进行治疗,总量为每子宫0.05 ml(2×107 细胞/ml).3 周后收集单侧损伤子宫进行苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色.通过蛋白质印迹分析子宫内膜纤维化、EMT、Wnt/β-catenin通路蛋白表达.结果 Model组大鼠宫腔结构破坏,腺体数量明显减少并积聚大量蓝色胶原纤维,但在eMSCs治疗后子宫内膜腺体数量显著增加,并且纤维化面积显著降低.与Sham组相比,Model组中I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平显著增加(P<0.05),但在eMSCs组中均显著减少(P<0.05).在Model组中,N-cadherin、Vim-entin和ZEB1 的表达显著增加,而 E-cadherin的表达减少.然而,在eMSCs组中,上述分子蛋白质的变化完全相反.与Sham组相比,Model组 β-连环蛋白(β-catenin)和 C-myc 表达增加(P<0.05).与Model组相比,eMSCs组中周期蛋白E(CyclinE)、β-catenin和C-myc表达增加(P<0.05).结论 eMSCs可以通过抑制EMT和子宫内膜纤维化来促进子宫内粘连大鼠子宫内膜修复,这种作用部分是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来实现.

目的 探究柴胡Bupleuri Radix不同极性部位对人肝癌SMMC-7721细胞的影响及相关机制.方法 不同极性部位的柴胡作用于SMMC-7221细胞后,采用MTT法考察细胞增殖能力;采用划痕实验考察细胞迁移能力;采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;采用qRT-PCR及Western blotting检测柴胡低极性部位(LPB)组和中极性部位(MPB)组干预后肝癌细胞与周期阻滞、凋亡及迁移相关的基因与蛋白表达;采用代谢组学技术检测LPB和MPB干预前后肝癌细胞内源性差异物的变化,采用京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析LPB和MPB调节的代谢通路.结果 与对照组比较,LPB、MPB能够显著抑制SMMC-7721细胞增殖(P＜0.05、0.01、0.001),LPB能够显著抑制细胞迁移(P＜0.05、0.01).LPB阻滞细胞于G1期和G2期,MPB阻滞细胞于G2期.LPB显著下调肝癌细胞中神经元PAS结构域蛋白 2(neuronal pas domain protein 2,NPAS2)、细胞周期蛋白依赖性激酶 1(cyclin dependent kinase 1,CDK1)、CDK2、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、Cyclin E基因表达(P＜0.05),MPB显著下调细胞分裂周期蛋白25B(cell division cycle 25B,CDC25B)、CDK1、Cyclin B1 基因表达(P＜0.05).LPB 显著下调 NPAS2、CDC25A 蛋白表达(P＜0.01),LPB 和 MPB 显著下调 B 淋巴细胞瘤-2(B-celllymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达(P＜0.01、0.001),上调 Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2associated Xprotein,Bax)、细胞色素 C(cytochrome C,Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白表达(P＜0.05、0.01、0.001).代谢组学结果显示肝癌的发生与甘油磷脂代谢、鞘磷脂代谢等7种代谢通路的紊乱密切相关.结论 LPB和MPB能够抑制肝癌细胞的增殖,并促进其凋亡,肝癌细胞阻滞于G1期主要与Npas2-CDC25A-CDK2-CyclinE复合物有关,阻滞于G2期主要与CDC25B-CDK1-CyclinB1复合物有关,凋亡主要与Npas2-CDC25A靶点以及激活线粒体凋亡途径相关.此外,LPB和MPB可干预甘油磷脂代谢、鞘磷脂代谢等代谢途径发挥抗肝癌作用.

目的 研究齐墩果酸对人肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其对肿瘤组织凋亡及相关基因表达的影响.方法 BALB/c裸鼠皮下接种人肝癌细胞株HCCLM3构建肝癌移植瘤模型,随机分为模型组和药物组,分别给予0.01 mL/g玉米油和5 mg/kg齐墩果酸灌胃.给药期间测量并记录各组裸鼠的一般状态、体质量、瘤体质量和体积.通过HE、Ki67、TUNEL染色分别检测移植瘤组织中细胞坏死病理学改变、细胞增殖、细胞凋亡情况;采用qRT-PCR检测移植瘤组织中CyclinD1、CyclinE1、CDK4、Bcl-2和Bax基因的mRNA表达水平.结果 与模型组相比,药物组裸鼠体质量无明显差异,移植瘤体质量和体积均显著下降(均P＜0.05).HE染色结果显示药物组移植瘤组织形态发生明显改变,出现坏死区域.药物组瘤组织Ki67阳性表达强度显著低于模型组(P＜0.01);TUNEL阳性表达强度显著高于模型组(P＜0.05).齐墩果酸给药后移植瘤组织中增殖相关基因CyclinD1、CyclinE1和CDK4的mRNA表达水平均降低,但差异无统计学意义(均P＞0.05);抑凋亡相关基因Bcl-2的mRNA表达水平降低(P＜0.05),而促凋亡相关基因Bax的mRNA表达水平升高(P＜0.01).结论 齐墩果酸能抑制人肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡相关.

目的 探究益肾解毒汤联合硝呋太尔制霉素+多西环素+复方甘草酸苷胶囊对阴道炎患者的雌激素水平、肾功能、肝功能及瘙痒评分的影响.方法 研究为回顾性研究,选取2019年3月-2021年3月医院收治的130例阴道炎合并皮肤瘙痒的患者,根据治疗方式不同分为观察组和对照组,各65例.对照组采用硝呋太尔制霉素阴道软胶囊+多西环素+复方甘草酸苷胶囊治疗,观察组患者在对照组的基础上联用益肾解毒汤,均连续治疗14 d.观察并比较两组性激素[黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡雌激素(follicles estrogen,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)及睾酮(testosterone,T)]、肾功能[肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)水平、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(blood cre-atinine,Scr)、24 h 尿蛋白含量水平(24-hour urine protein content level,24 h pro)]、四项目瘙痒量表(four-item itch ques-tionnaire,FIIQ)评分、不良反应发生情况和生活质量.结果 两组治疗后的LH、FSH、E2、T等性激素表达水平均显著优于治疗前,且观察组显著优于对照组(P＜0.05).治疗后,观察组Scr、BUN、24 h pro和CFR等肾功能指标均优于对照组(P＜0.05).治疗后,观察组IgG、IgM、MDA、SOD等肝功能指标水平均低于对照组(P＜0.05).治疗后,观察组患者的FIIQ评分各项均显著低于对照组,差异对比具有统计学意义(P＜0.05).治疗后,观察组患者的躯体能力、生理状态、心理状态、社会参与情况和一般健康情况5个维度评分均显著高于对照组(P＜0.05).治疗期间两组患者不良反应发生率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益肾解毒汤联合硝呋太尔制霉素+多西环素+复方甘草酸苷胶囊能有效改善阴道炎患者雌激素水平,提升患者肾功能和肝功能,减轻患者皮肤瘙痒症状,提高患者生活质量,且未增加不良反应,值得进一步深入开展相关研究.

目的:比较替加环素和多黏菌素B治疗重症患者耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)肺炎的疗效和安全性.方法:回顾性分析2018年1月1日至2023年6月30日于我院重症医学科(ICU)接受替加环素或多黏菌素B治疗的CRE肺炎患者的临床资料.主要结局包括28 d全因病死率和28 d临床治愈率.次要结局包括ICU病死率、住院病死率、住院时间、ICU住院时间、微生物清除率、机械通气时间.采用Cox回归分析检验影响28 d临床治愈率的独立预测因素.结果:倾向性评分匹配后纳入83名患者,其中替加环素组54例,多黏菌素B组29例.替加环素组28 d全因病死率为31.5％(17/54),多黏菌素 B 组为 37.9％(11/29),差异无统计学意义(P=0.554);替加环素组28 d临床治愈率为63％(34/54),显著高于多黏菌素B组的34.5％(10/29)(P=0.013).两组的次要结局指标均无统计学差异.多因素回归分析发现,使用替加环素是28 d临床治疗有效的独立预测因素(HR:2.083,95％CI 1.018-4.263,P=0.045).但替加环素组用药后活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间较多黏菌素B组显著延长(P=0.047;P=0.027),纤维蛋白原显著下降(P＜0.001).结论:替加环素组和多黏菌素组28d全因病死率无显著差异;与多黏菌素B相比,替加环素可能与更高的28 d临床治愈率相关.同时需注意,替加环素可能增加凝血功能异常的风险.