目的:对6例9p24区微缺失的胎儿进行产前诊断与遗传学分析。方法:回顾性分析2018年1月至2020年1月因血清学唐氏综合征筛查高风险/临界高风险就诊于河南省人民医院遗传咨询门诊6例孕妇的遗传学检测资料。采用常规G显带和微阵列比较基因组杂交（array comparative genomic hybridization，aCGH）技术检测胎儿羊水及其父母的外周血，对检出的拷贝数变异致病性采用美国医学遗传学与基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）评分标准进行分级。对结果进行描述性分析。结果:6例胎儿孕中期超声检查均未发现异常。G显带分析结果显示，6例胎儿及其父母染色体核型分析均未见异常。aCGH检测结果显示，6例胎儿在9p24区存在1 019~6 001 kb染色体缺失，涉及 DMRT1、 SMARCA2和 DOCK8等疾病相关基因；其中例3胎儿的缺失遗传自无临床表型父亲，其他胎儿染色体缺失为新发突变。参考ACMG分级指南，例1~2、5~6胎儿检出微缺失为致病性/可能致病性，例3和4胎儿检出微缺失为临床意义未明。经遗传咨询后，例1~2、5~6孕妇及家属选择终止妊娠；例3和4选择继续妊娠，出生后半年随访婴儿发育良好。 结论:9p24区微缺失胎儿产前缺乏特异性表型， DMRT1和 SMARCA2可能为该区域关键基因。

目的:通过生物信息学与机器学习识别肌少症患者的特征基因，并探索特征基因在肌少症中的诊断价值。方法:从高通量测序数据库下载与肌少症相关的编号为GSE25941、GSE38718与GSE9103的基因芯片数据，筛选肌少症相关的差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs）。使用基因本体论功能注释与京都基因与基因组百科全书富集分析对DEGs进行相关功能分析，用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络，利用最小绝对值收敛和选择算子回归模型与随机森林分析识别肌少症的生物标志物，并通过受试者工作特征曲线评估特征基因的诊断效能。在GSE28422外部验证数据集中进一步验证肌少症生物标志物的表达水平。最后运用分析工具CIBERSORT进行免疫细胞浸润分析。结果:本研究共识别出124个DEGs，DEGs主要参与生长因子受体结合和细胞因子活性。京都基因与基因组百科全书分析发现，DEGs主要参与的信号通路有过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Janus激酶/信号转导和转录活化因子和腺苷酸活化蛋白激酶信号通路等。基于机器学习并通过受试者工作特征曲线分析与外部数据集验证，发现三个特征基因：双性和Mab-3相关转录因子2、序列相似性家族171成员A1和Rho GTP酶激活蛋白36。免疫细胞浸润分析结果表明，肥大细胞、CD4记忆性T细胞，CD8细胞、γδT细胞和中性粒细胞可能参与肌少症的病理生理过程。结论:双性和Mab-3相关转录因子2、序列相似性家族171成员A1和Rho GTP酶激活蛋白36可作为肌少症的诊断生物标志物，并且与肌少症的病理生理过程密切相关。

目的:分析4例doublesex和mab-3相关转录因子1(doublesex and mab-3 related transcription factor 1, DMRT1)基因变异/单倍剂量不足所致的46，XY性发育异常(46，XY DSD)患儿的临床特征，以提高医生对此病的认识。方法:回顾性收集4例46，XY DSD患儿的病史、体格检查、内分泌功能评估、性腺病理及遗传学资料。结果:例1为DMRT1基因变异c.332G>T(P.Arg111Met)杂合错义新发变异，因"闭经"于15岁就诊，外生殖器男性化得分(external masculinization scores, EMS)为0分。DMRT1基因单倍剂量不足3例：9p末端依次存在1.2 Mb、5.1 Mb和6.0 Mb片段缺失，其中例3合并5p区域33.3 Mb重复。3例就诊年龄均在1岁以内，社会性别2例为女性，1例为男性，均因"外生殖器外观异常"就诊，EMS依次为1分、0分、5分。例1和例3内分泌评估提示原发性性腺功能减退，性腺病理均为完全性性腺发育不良，例2提示Leydig细胞功能良好、Sertoil细胞功能欠佳，性腺病理为混合性性腺发育不良。例3在18个月龄诊断为性腺母细胞瘤。例4患儿内分泌评估示睾丸功能正常，暂未同意活检。4例染色体核型均为46，XY。结论:在DMRT1基因变异/单倍剂量不足的46，XY DSD患者中，前者初诊年龄偏大，后者就诊年龄偏小，性腺功能可表现为从正常到完全性性腺发育不良。此类患者存在性腺母细胞瘤高风险，且发病年龄小，对性腺发育不良者应及早行性腺活检。

为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8.通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50％的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含有生殖细胞的性索结构;qRT-PCR和免疫荧光结果显示雌性特异性基因Foxl2和Cyp19a1表达量显著降低,而调控睾丸发育的Dmrt1、Sox9和Amh基因表达上调.实验结果表明Sox8的过表达诱导ZW胚胎性腺往雄性方向分化,揭示了Sox8在中华鳖睾丸分化过程中的作用.

目的:分析46,XY单纯性腺发育不全合并卵巢无性细胞瘤临床诊疗方法.方法:对我院收治的1例22岁因盆腔包块就诊的患者的临床资料及相关文献进行回顾性分析,对其诊断、治疗进行阐述.结果:该患者表现型为女性,染色体核型为46,XY,染色体微阵列检测结果显示4号染色体4p16.3区域有约1.08 Mb的重复,9号染色体9p24.3p3p24.1区域有约4.49 Mb的缺失,该缺失区域包含9p缺失综合征,该综合征患者主要表现为性反转,部分或全部性腺发育不良.患者左侧性腺恶变,病理结果为无性细胞瘤.结论:对于母亲有胎儿畸形史、染色体异常家族史,血清学异常、B超表现异常的胎儿,可选择染色体检查及基因检测.对于无青春期月经来潮患者,可通过妇科B超、性腺激素、染色体检查的手段排除染色体异常甚至性腺肿瘤.这类患者一经确诊,应尽早切除性腺.

自然界中复杂的性别决定机制令人着迷又畏惧.爬行动物作为变温动物,不同于哺乳类保守的基因决定型(Geneotypic sex determination,GSD),处于环境决定型(Environmental sex determination,ESD)和GSD机制的过渡期.其性别决定对外部环境因素,如温度和污染物比较敏感.中华鳖(Pelodiscus sinensis)是一种珍贵的水生经济动物,在爬行动物生物学领域的性别决定研究中具有重要意义.随着国内外相关研究的深入开展,一些研究表明温度影响中华鳖性别比例,属于温度决定型(Temperature-dependent sex determination,TSD),但研究结果不尽相同,总有20%-30%的个体并未沿温度方向发育;其次,近来研究证实中华鳖存在微小型染色体(ZW/ZZ),确认为GSD机制,然而其分子机制尚不清楚.而且许多研究都集中在脊椎动物性别分化中已知功能的保守基因,如Dmrt1、Sox9、Mis、Amh、Cyp19a1和Foxl2,其它基因很少被细致研究,导致对整个基因表达的理解有限;再次,在中华鳖胚胎发育温度敏感期(Temperature sensitive period,TSP),外源性激素可定向诱导性别分化.总之,这些研究表明,GSD 和ESD机制之间的界限是模糊的,温度和激素到底如何触动性别发育一直是一个未被解决的关键问题.综述前人在爬行动物性别决定机制方面的最新研究成果,目的为攻克中华鳖单性苗种培育技术,为我国中华鳖良种选育提供科学依据.

性反转综合征是染色体性别与性腺性别不一致的病理现象,包括46,XX男性和46,XY女性.性别分化是多基因参与的复杂过程,除SRY(Y染色体性别决定基因)基因外,SOX9、WNT4、DAX1、SF1、WT1、DMRT1、SOX3等基因均参与其过程.儿童性反转综合征患者多因外阴发育异常就诊,成年性反转综合征患者多因闭经、无精子、不育、女性化乳房等就诊.目前,性反转综合征的发病机制仍有些不明确,本文我们对SRY阴性46,XX男性性反转综合征的遗传学研究进展进行了综述.

为明确牙鲆雄性性别相关关键基因dmrt1 (doublesex and mab-3-related transcription factor 1)是否为pol-miR-26a、pol-miR-26b作用的靶基因,本研究利用PCR技术克隆了dmrt13'UTR区,并成功引入了特殊限制性内切酶PemⅠ和NotⅠ的识别位点;将得到的dmrt1 3'UTR区片段和psiCHECK-2载体进行双酶切、连接后得到野生型重组质粒;并且利用定点诱变法对dmrt1 3'UTR区进行体外定点诱变,将pol-miR-26a、pol-miR-26b识别的靶序列ACTGAA突变为TGACTT,形成突变型重组质粒.经琼脂糖凝胶电泳鉴定、双酶切及测序分析,成功获得了可用于pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1验证的野生型psiCHECK-dmrt1-3'UTR和突变型psiCHECK-mutated dmrt1-3'UTR的报告质粒,为进一步研究pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1鉴定和功能奠定了基础.

目的 探讨46,XY性发育异常(disorders of sex development,DSD)的不同表型与单基因变异的关联性. 方法 收集2018年2月至2018年11月间浙江大学医学院附属儿童医院137例临床诊断为46,XY DSD的病例,并提取外周血基因组DNA.采用液相捕获技术靶向捕获2 742个疾病基因,通过高通量测序和生物信息学方法获取基因编码区和临近10 bp区域的变异,参考ACMG分类标准进行分级.将测试病例按临床表型分为“隐睾或小睾丸、尿道下裂、小阴茎或隐匿性阴茎、多种DSD表型、性别模糊、综合征型DSD”六组.计算不同表型与基因变异对46,XY DSD的阳性检出率、辅助诊断率.结果 137例中有62例检出具备临床参考价值的变异,涉及SRD5A2、AR、NRSA1、AMH、FGFR1、PROKR2、DMRT1、MAmLD1、WT1、ZEB2、AKR1 C2、CHD7、CYP17A1、DMRT2、FGD1、FRAS1、GA TA4、MAP3K1、POR、SAMD9、TACR3、VANGLl、WNT5A共23个基因,综合阳性检出率为45.26％.62例中36例检出能解释临床表型的基因变异,涉及SRD5A2、AR、NR5A1、AMH、FGFR1、PROKR2、DMRT1、MAmLD1、WT1、ZEB2共10个基因,辅助诊断率为26.28％.隐睾或小睾丸、尿道下裂、小阴茎或隐匿性阴茎、多种DSD表型、性别模糊、综合征型DSD的阳性检出率分别为8.33％、26.32％、38.71％、57.14％、86.36％、66.67％,其辅助诊断率分别为0.00％、15.79％、16.13％、28.57％、63.64％、50.00％. 结论 单基因变异是46,XY DSD的重要遗传学病因之一,基因变异的阳性检出率和辅助诊断率均与临床表型的多样性及严重程度呈正相关;靶向捕获疾病基因联合高通量测序可作为“性别模糊、综合征型DSD、多种DSD表型”46,XY DSD遗传学测试的首选方法.

为了研究dmrt1(Double sex and mab-3 related transcription factor 1)基因在方格星虫(Sipunculus nudus)的表达特征,首先采用RACE方法克隆了方格星虫dmrt1基因.方格星虫dmrt1的cDNA全长1509 bp,开放阅读框615 bp,共编码204个氨基酸.生物信息学分析表明方格星虫DMRT1的DM结构域具有一定的保守性,与其他物种的同源性能够达到70％以上.成体组织荧光定量PCR分析表明方格星虫dmrt1仅在方格星虫雄性个体的体腔液中表达,通过原位杂交显示dmrt1定位于体腔液精子团周围的滋养细胞.这些结果提示,方格星虫dmrt1可能在调控方格星虫的雄性个体的生殖发育过程中发挥着重要作用.