目的:探讨脓毒症相关性脑病（sepsis-associated encephalopathy, SAE）的相关差异表达基因（differentially expressed gene, DEG）和信号转导途径。方法:基于基因表达数据库（gene expression omnibus, GEO）的脓毒症患者脑组织的基因组数据，采用基因本体（gene ontology, GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG）富集分析，以及蛋白-蛋白相互作用网络（protein-protein interaction, PPI）分析，确定SAE的DEG。结果:DEG在免疫应答、炎症反应、凋亡过程的负调控、蛋白质水解等方面显著富集。通过PPI分析筛选出10个枢纽基因，包括固醇调节元件结合转录因子1（sterol regulatory element binding transcription factor 1, SREBF1）、细胞因子信号转导抑制因子-3（suppressor of cytokine signaling 3, SOCS3）、封闭蛋白5（claudin 5, CLDN5）、免疫球蛋白结构域蛋白4（V-set and immunoglobulin domain containing 4, VSIG4）、DNA损伤诱导蛋白45β（growth arrest and DNA damage inducible protein 45β, GADD45β）、细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule 1, ICAM1）、血管生成素-2基因（angiopoietin 2, ANGPT2）、CD14、CD163、血栓反应蛋白1（thrombospondin 1, THBS1）。结论:通过生物信息学方法挖掘出与SAE相关的10个枢纽基因，这些基因和机体的免疫炎症相关。

目的:探讨DNA损伤激活的非编码RNA (NORAD)诱导细胞自噬对食管胃结合部腺癌(AEG)奥沙利铂耐药的影响及分子机制。方法:收集2023年1月至6月安阳市肿瘤医院诊治的进展期AEG患者AEG及其癌旁正常组织手术标本4对，应用长链非编码RNA微阵列芯片分析AEG及其癌旁组织中NORAD的表达情况。使用新鲜AEG组织标本制备肿瘤组织来源的AEG细胞系(PDC) ，构建PDC和AEG细胞系OE19的奥沙利铂耐药细胞系(PDC-R、OE19-R)，并通过转染shNORAD制备敲减NORAD的PDC-R和OE19细胞系(shNORAD PDC-R、shNORAD OE19-R)。应用生物信息学工具Starbase v3.0和DIANA-lncBase v3.0预测NORAD潜在靶点及其与微RNA-433-3p(miR-433-3p)的相互作用。PDC、PDC-R，OE19、OE19-R细胞分别共转染miR-144-3p和野生型NORAD(NORAD-WT)或突变型NORAD(NORAD-Mut)质粒，应用双萤光素酶报告实验验证NORAD与miR-433-3p的相关性。通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃正常黏膜细胞系GES-1及AEG细胞系PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R、shNORAD OE19-R中NORAD和miR-433-3p表达水平，蛋白质印迹法检测上述细胞p62和微管相关蛋白1轻链3 B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定奥沙利铂对PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的细胞半数抑制浓度(IC 50)。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:微阵列芯片分析发现与癌旁正常组织相比，AEG中NORAD表达显著上调(差异表达倍数≥2.0, P<0.05)。生物信息学研究发现miR-433-3p是NORAD的潜在靶点。双萤光素酶报告实验结果显示，在PDC和PDC-R细胞中，NORAD-WT组的相对萤光素酶活性低于NORAD-Mut组(0.441±0.104比0.928±0.204、0.449±0.112比0.947±0.201)，差异均有统计学意义( t＝－14.74、－14.94,均 P<0.001)；OE19和OE19-R细胞中双萤光素酶报告实验结果与PDC细胞系相同。qRT-PCR检测结果显示，NORAD在GES-1细胞中的相对表达量(1.016±0.213)低于PDC细胞(2.194±0.322)和PDC-R细胞(4.040±0.336)，且在PDC细胞中相对表过量低于PDC-R细胞，差异均有统计学意义( t＝－14.94、－37.21、－19.43，均 P<0.001)；在shNORAD PDC-R细胞中的相对表达量(0.290±0.165)则低于PDC-R细胞，差异有统计学意义( t＝－49.05, P<0.001)。miR-433-3p在GES-1细胞中的相对表达量(1.017±0.248)高于PDC细胞(0.470±0.156)和PDC-R细胞(0.203±0.045)，且PDC细胞中的相对表达量高于PDC-R细胞，差异均有统计学意义( t＝9.15、15.85、8.11,均 P<0.001)，在shNORAD PDC-R细胞中的相对表达量(0.699±0.256)也高于PDC-R细胞，差异有统计学意义( t＝9.37, P<0.001)。蛋白质印迹法检测结果显示，PDC-R中LC3B-Ⅱ相对表达量高于PDC细胞(0.426±0.060比0.212±0.041)，shNORAD PDC-R细胞中LC3B-Ⅱ的相对表达量(0.155±0.029)低于PDC细胞，差异均有统计学意义( t＝8.70、－79.45，均 P<0.001)；而p62在各细胞系中表现呈相反趋势，在PDC-R中相对表达量低于PDC(0.205±0.031比0.311±0.040)，在shNORAD PDC-R中的相对表达量(0.504±0.084)高于PDC，差异均有统计学意义( t＝－31.19、62.80，均 P<0.001)。在OE19细胞系的原始细胞、耐药细胞和NORAD敲减细胞中NORAD和miR-433-3p，以及LC3B-Ⅱ和p62表达变化规律与PDC细胞系相似。CCK-8评估靶细胞活力发现，奥沙利铂对PDC、PDC-R和shNORAD PDC-R细胞的IC 50值分别为14.28、22.27和2.51 μg/mL，对OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的IC 50值分别为3.95、8.12和1.89 μg/mL。 结论:NORAD在AEG组织及细胞中呈高表达；在奥沙利铂耐药的细胞呈过表达，而且增加了细胞的自噬活性。敲减NORAD后AEG细胞自噬活性受到抑制，而且AEG细胞对奥沙利铂的敏感性增加。

在我国食管腺癌的发病率呈逐年上升趋势，约有80%与Barrett’s食管(BE)相关。BE是目前唯一明确的食管腺癌的癌前病变，其中伴有肠化生类型是无肠化生类型癌变风险的3倍。在BE形成过程中胆汁反流具有重要作用，是伴肠化生类型BE发生发展的必要条件。胆汁酸可直接损害上皮细胞或刺激鳞状上皮细胞分泌前炎性细胞因子，通过后者可聚集炎性细胞并进一步破坏上皮细胞。胆汁酸针对食管下段鳞状细胞的损伤还表现为激活氧化应激、细胞外通路调节激酶和核因子-κB (NF-κB)通路、损伤细胞DNA、促使致癌基因积累、诱导细胞分泌一些转录因子(如尾型同源框转录因子2(CDX2)、Sry相关HMG盒2(SOX2)、骨形态发生蛋白4(BMP4)等)，这些细胞因子可进一步参与食管上皮细胞表型转化、肠上皮分化、阻碍细胞凋亡。本文拟对相关具体机制做一系统阐述。

目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)中的miR-221-3p靶向DNA损伤诱导转录本4(DNA-damage-inducible transcript 4,DDIT4)对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响和机制.方法 小鼠睾丸间质细胞(mouse testicular stromal cells,TM3)经不同浓度的镉(0、10、20、30和40 μmol/L)染毒后,使用CCK-8检测细胞活性.提取镉染毒TM3细胞的总RNA,以差异倍数(fold change,FC)＞1.2,P＜0.05作为标准筛选显著差异表达miRNA.TM3细胞分为空白对照组、阴性对照组、镉染毒组(CdCl2,20 μmol/L)和镉染毒+miR-221-3p模拟物组,其中对镉染毒+miR-221-3p模拟物组,先将miR-221-3p模拟物转染进TM3细胞,再联合镉染毒24 h.Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot免疫印迹法检测DDIT4表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与DDIT4的结合,生物信息学分析DDIT4的功能及与细胞凋亡的关联,过表达miR-221-3p后观察B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达水平.结果 镉染毒可降低TM3细胞活性且存在剂量-效应关系.细胞形态学发现,与对照组相比,镉染毒组细胞皱缩、细胞核浓染,凋亡率升至19.66％±0.45％(P＜0.01);与镉染毒组相比,镉染毒+miR-221-3p模拟物组正常形态细胞增多,凋亡率降至13.76％±0.37％(P＜0.05).镉染毒组miR-221-3p表达水平下调(P＜0.01),DDIT4表达水平上调(P＜0.05).生物信息学分析和双荧光素酶报告分析发现DDIT4为miR-221-3p的靶基因之一.与镉染毒组相比,镉染毒+miR-221-3p模拟物组DDIT4表达水平下调(P＜0.05),Bcl-2/BAX比值由0.54±0.03增加为0.71±0.04.结论 miR-221-3p通过靶向DDIT4进而抑制镉诱导的TM3细胞凋亡.

目的 探讨DNA损伤诱导转录样蛋白4(DDIT4L)在人脑多形性胶质母细胞瘤(GBM)中的表达与患者预后的关系及相关机制.方法 分别从癌症基因组图谱(TCGA)和人类肿瘤相关基因表达汇编(GEO)数据库下载GBM的RNASeqV2数据,以及GBM样本数据集GSE7696的系列矩阵数据.应用Kaplan-Meier和多因素COX逐步回归分析方法确定DDIT4L的预后价值,采用基因集富集分析方法分析DDIT4L相关的信号通路.结果 DDIT4L高表达是提示GBM术后患者预后不良的独立因素,其高表达与烟酸-烟酰胺代谢、组氨酸代谢、氮代谢、苯丙氨酸代谢相关通路增强有关.结论 DDIT4L高表达的GBM患者预后不良,可能通过对GBM中的烟酸-烟酰胺、组氨酸、氮或苯丙氨酸代谢的调节而发挥促肿瘤作用.

目的 探讨线粒体DNA(mtDNA)介导的Toll样受体9(TLR9)-髓样分化因子88(MyD88)信号通路在呼吸机相关性肺损伤(VILI)发生中的作用机制.方法 将30只健康雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组、正常潮气量(VT)组(VT为8 mL/kg)和大VT组(VT为40 mL/kg),每组10只.正常VT组和大VT组大鼠分别进行机械通气,呼气末正压(PEEP)为0,吸入氧浓度(FiO2)为0.50.通气4 h后采集心脏血并处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-6、IL-1β)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)含量;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用BCA法测定总蛋白含量.取肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值;苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺组织病理学改变;采用免疫组化法检测肺组织中mtDNA编码的细胞色素C氧化酶Ⅳ(COX-Ⅳ)、TLR9、MyD88、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达.结果 光镜下显示,自主呼吸组和正常VT组大鼠肺组织结构基本正常,而大VT组肺组织则可见明显炎性改变;大VT组病理学评分明显高于自主呼吸组和正常VT组(分:3.50±0.41比0.25±0.09、0.33±0.10,均P<0.05).与自主呼吸组和正常VT组比较,大VT组大鼠肺W/D比值明显升高(6.42±0.41比4.14±0.04、4.28±0.11,均P<0.05), BALF总蛋白含量明显升高(g/L:0.43±0.04比0.13±0.01、0.14±0.01,均P<0.05),血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量也明显升高〔IL-6(μg/L):1.15±0.17比0.42±0.10、0.46±0.04,IL-1β(μg/L):6.73±0.38比2.08±0.90、2.19±0.18,TNF-α(μg/L):4.10±0.11比1.12±0.10、1.14±0.04,均P<0.05〕.免疫组化结果显示,大VT组大鼠肺组织COX-Ⅳ、TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白均呈棕褐色强阳性表达,而正常VT组和自主呼吸组则呈不着色的阴性未表达或浅黄色的弱阳性低表达;定量分析显示,大VT组COX-Ⅳ、TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白的免疫组化染色评分(IRS)均明显高于自主呼吸组和正常VT组〔COX-Ⅳ IRS(分):8.80±2.17比0.80±0.45、1.40±0.55,TLR9 IRS(分):8.40±2.51比1.00±0.71、1.20±0.84,MyD88 IRS(分):9.40±1.52比1.40±0.55、1.60±0.55,NF-κB p65 IRS(分):9.80±2.05比1.00±0.71、1.20±0.84,均P<0.05〕.正常VT组与自主呼吸组所有检测指标差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 mtDNA能激活TLR9-MyD88信号转导通路,使其下游的NF-κB p65表达上调,介导炎性因子释放,诱导肺组织发生急性炎症损伤,最终引发VILI.

目的 探讨p53野生型及p53缺失型的人结肠癌HCT116细胞在紫外线照射后磷酸化蛋白质组的表达差异及其不同DNA损伤修复通路.方法 将紫外线照射30 s后继续培养4 h的人结肠癌细胞系HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-的细胞总蛋白进行磷酸化蛋白质谱检测,对所获得的差异蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析,继而用SRING数据库软件分析DNA损伤修复的蛋白互作网络,最后采用Reactome软件分别绘制HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-细胞中DNA损伤修复通路.结果 HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-细胞经紫外线照射前后差异表达的磷酸化蛋白分别为148个和210个,重叠的磷酸化蛋白有57个,其中上调、下调趋势一致的有39个.在p53野生型HCT116细胞中,紫外线诱导特异表达的磷酸化蛋白功能富集在染色质修复与组蛋白修饰、DNA损伤修复上,差异表达的DNA损伤修复相关的磷酸化蛋白主要参与核苷酸切除修复;而在p53表达缺失的情况下,紫外线诱导特异表达的磷酸化蛋白功能富集在mRNA加工、转录调控、细胞黏附上,差异表达的DNA损伤修复相关的磷酸化蛋白,主要参与非末端同源重组修复.结论 p53状态不同的HCT116细胞经紫外线照射后诱导磷酸化的蛋白不同,而且磷酸化蛋白富集通路和DNA损伤修复途径也不相同.

目的 探讨EIF2B3突变的少突胶质细胞是否存在对内质网应激(ERS)的不耐受,检测未折叠蛋白反应(UPR)通路的变化,为了解白质消融性白质脑病(VWM)的发病机制提供线索.方法 本研究利用转染EIF2B3野生型或突变型c.1037T＞C全长cDNA慢病毒载体的人类少突胶质细胞系,Thapsigargin对其进行ERS诱导后,通过细胞增殖-毒性检测试剂盒实验反映细胞增殖活力,检测凋亡相关分子Caspase-3剪切体的表达反映细胞凋亡水平,来验证野生与突变细胞对ERS的耐受性,并比较二者在基础状态及ERS诱导后不同时间点UPR激酶样内质网激酶(UPR-PERK)通路各分子指标的变化.结果 1.EIF2B3突变型少突胶质细胞对ERS不耐受,表现为ERS刺激后凋亡的增加和活力的显著下降.2.EIF2B3突变型少突胶质细胞存在UPR通路的过度激活.3.基础状态下UPR-PERK通路分子磷酸化α亚基的真核翻译起始因子2(P-eIF2α)、激活转录因子4、CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)和生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)的水平不同程度高于野生组.4.ERS刺激24h后,凋亡相关的UPR分子(CHOP和GADD34)和抑制蛋白翻译的P-eIF2α在野生型细胞中表达下降,而在突变细胞中持续高表达.结论 EIF2B3突变的人少突胶质细胞对ERS不耐受,这种不耐受与突变细胞存在UPR-PERK通路的过度持续激活,引起凋亡性的细胞死亡相关.减轻突变细胞的内质网负荷或稳定UPR的过度激活有望对疾病进展起到干预作用.

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,由于其发病较为隐匿,多数患者在就诊时已经到了中晚期,其死亡率仅次于肝癌和肺癌.结直肠癌的发生发展是多基因多因素共同作用的结果, 其中细胞周期的调控对细胞的增殖起着重要的作用,细胞周期检测点激酶1(CHK1)是细胞周期检测中关键的蛋白激酶,主要在S期和G2/M期进行调控,是保证细胞周期正常运行和基因蛋白完整性的重要调节因子, 与DNA损伤修复、凋亡及转录等有关[1]. 抑癌基因NPRL2也称肿瘤抑制候选基因4, 广泛存在于人类组织中,NPRL2基因具有DNA错配修饰、调控细胞周期及诱导细胞凋亡的功能[2,3]. 本文通过检测结直肠癌中CHK1和NPRL2蛋白的表达情况, 探讨二者与结直肠癌发生发展的关系,为结直肠癌的治疗及预后判断提供一定的依据.

组蛋白是真核生物染色质的基本结构蛋白.在炎症、组织损伤等应激情况下, 组蛋白可释放至细胞外成为细胞外组蛋白, 激活免疫及炎症反应, 启动或加重组织损伤.细胞外组蛋白可介导多种疾病的发生发展, 主要包括神经系统疾病(缺血再灌注损伤、组蛋白修饰介导的转录失调和神经胶质细胞反应性增生) 、脓毒血症(促进炎性因子TNF-α和IL-6大量释放) 、凝血功能障碍(通过TLR-2和TLR-4信号通路促血小板活化、血液凝固以及增加血管性血友病因子水平, 促进深静脉血栓早期发生) 、肝损伤(通过TLR-9和MyD88介导细胞毒性作用, 通过TLR2/TLR4信号通路, 加重肝细胞损伤以及激活Caspase-3途径诱导肝细胞凋亡) 、急性肺损伤(通过C5aR和C5L2介导肺组织损伤) 、肾损伤(通过与TLR2/TLR4受体结合, 激活MyD88、NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶, 启动炎症反应和直接细胞毒性作用) 以及自身免疫病(保护自身DNA免受降解, 通过组蛋白去亚氨基化和瓜氨酸化, 增强免疫原性) .