目的:探讨DNA损伤激活的非编码RNA（NORAD）在高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡中的作用及机制。方法:根据培养基中葡萄糖浓度将小鼠肾小球系膜细胞SV40-MES-13分为高糖组及低糖组，处理24 h后转染NORAD小干扰RNA（si-NORAD）及Toll样受体4（TLR4）小干扰RNA（si-TLR4），实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测NORAD及TLR4的表达。在SV40-MES-13细胞中分别转染NORAD、TLR4过表达质粒及小干扰RNA。Cell Counting Kit-8（CCK-8）、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡结果；共转染NORAD和miR-520h模拟剂，TLR4和miR-520h模拟剂后检测荧光素酶强度及三者表达情况；共转染si-NORAD和miR-520h抑制剂、TLR4过表达质粒和miR-520h模拟物以及共转染si-TLR4和miR-520h抑制剂后检测三者水平及细胞增殖水平来验证三者的调节关系。结果:高糖处理小鼠系膜细胞SV40-MES-13后，NORAD（1.65±0.08比1.00±0.06， P=0.003）及TLR4（1.96±0.09比1.01±0.07， P=0.001）的表达均升高。NORAD及TLR4过表达后细胞增殖加快（1.34±0.04比0.85±0.04， P=0.001；1.33±0.02比0.82±0.03， P<0.001），细胞凋亡减少（0.45±0.03比0.94±0.06， P=0.001；0.51±0.05比0.99±0.03， P=0.001）。双荧光素酶报告基因结果显示，miR-520h能与NORAD及TLR4结合；NORAD与miR-520h表达相互影响，miR-520h模拟物可减少TLR4表达。与单独转染si-NORAD相比，共转染si-NORAD及miR-520h抑制剂时TLR4相对表达量升高（0.74±0.03比0.55±0.03， P=0.014）；与单独转染miR-520h模拟物相比，共转染miR-520h模拟剂及TLR4过表达质粒后细胞增殖更快（0.73±0.01比0.61±0.02， P=0.007）；与单独转染miR-520h抑制剂相比，共转染miR-520h抑制剂及si-TLR4后细胞增殖减少（1.31±0.04比1.55±0.04， P=0.013）。 结论:NORAD可结合miR-520h调节TLR4促进高糖诱导系膜细胞增殖及抑制凋亡。

目的:探讨DNA损伤激活的非编码RNA (NORAD)诱导细胞自噬对食管胃结合部腺癌(AEG)奥沙利铂耐药的影响及分子机制。方法:收集2023年1月至6月安阳市肿瘤医院诊治的进展期AEG患者AEG及其癌旁正常组织手术标本4对，应用长链非编码RNA微阵列芯片分析AEG及其癌旁组织中NORAD的表达情况。使用新鲜AEG组织标本制备肿瘤组织来源的AEG细胞系(PDC) ，构建PDC和AEG细胞系OE19的奥沙利铂耐药细胞系(PDC-R、OE19-R)，并通过转染shNORAD制备敲减NORAD的PDC-R和OE19细胞系(shNORAD PDC-R、shNORAD OE19-R)。应用生物信息学工具Starbase v3.0和DIANA-lncBase v3.0预测NORAD潜在靶点及其与微RNA-433-3p(miR-433-3p)的相互作用。PDC、PDC-R，OE19、OE19-R细胞分别共转染miR-144-3p和野生型NORAD(NORAD-WT)或突变型NORAD(NORAD-Mut)质粒，应用双萤光素酶报告实验验证NORAD与miR-433-3p的相关性。通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃正常黏膜细胞系GES-1及AEG细胞系PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R、shNORAD OE19-R中NORAD和miR-433-3p表达水平，蛋白质印迹法检测上述细胞p62和微管相关蛋白1轻链3 B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定奥沙利铂对PDC、PDC-R、shNORAD PDC-R、OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的细胞半数抑制浓度(IC 50)。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:微阵列芯片分析发现与癌旁正常组织相比，AEG中NORAD表达显著上调(差异表达倍数≥2.0, P<0.05)。生物信息学研究发现miR-433-3p是NORAD的潜在靶点。双萤光素酶报告实验结果显示，在PDC和PDC-R细胞中，NORAD-WT组的相对萤光素酶活性低于NORAD-Mut组(0.441±0.104比0.928±0.204、0.449±0.112比0.947±0.201)，差异均有统计学意义( t＝－14.74、－14.94,均 P<0.001)；OE19和OE19-R细胞中双萤光素酶报告实验结果与PDC细胞系相同。qRT-PCR检测结果显示，NORAD在GES-1细胞中的相对表达量(1.016±0.213)低于PDC细胞(2.194±0.322)和PDC-R细胞(4.040±0.336)，且在PDC细胞中相对表过量低于PDC-R细胞，差异均有统计学意义( t＝－14.94、－37.21、－19.43，均 P<0.001)；在shNORAD PDC-R细胞中的相对表达量(0.290±0.165)则低于PDC-R细胞，差异有统计学意义( t＝－49.05, P<0.001)。miR-433-3p在GES-1细胞中的相对表达量(1.017±0.248)高于PDC细胞(0.470±0.156)和PDC-R细胞(0.203±0.045)，且PDC细胞中的相对表达量高于PDC-R细胞，差异均有统计学意义( t＝9.15、15.85、8.11,均 P<0.001)，在shNORAD PDC-R细胞中的相对表达量(0.699±0.256)也高于PDC-R细胞，差异有统计学意义( t＝9.37, P<0.001)。蛋白质印迹法检测结果显示，PDC-R中LC3B-Ⅱ相对表达量高于PDC细胞(0.426±0.060比0.212±0.041)，shNORAD PDC-R细胞中LC3B-Ⅱ的相对表达量(0.155±0.029)低于PDC细胞，差异均有统计学意义( t＝8.70、－79.45，均 P<0.001)；而p62在各细胞系中表现呈相反趋势，在PDC-R中相对表达量低于PDC(0.205±0.031比0.311±0.040)，在shNORAD PDC-R中的相对表达量(0.504±0.084)高于PDC，差异均有统计学意义( t＝－31.19、62.80，均 P<0.001)。在OE19细胞系的原始细胞、耐药细胞和NORAD敲减细胞中NORAD和miR-433-3p，以及LC3B-Ⅱ和p62表达变化规律与PDC细胞系相似。CCK-8评估靶细胞活力发现，奥沙利铂对PDC、PDC-R和shNORAD PDC-R细胞的IC 50值分别为14.28、22.27和2.51 μg/mL，对OE19、OE19-R和shNORAD OE19-R细胞的IC 50值分别为3.95、8.12和1.89 μg/mL。 结论:NORAD在AEG组织及细胞中呈高表达；在奥沙利铂耐药的细胞呈过表达，而且增加了细胞的自噬活性。敲减NORAD后AEG细胞自噬活性受到抑制，而且AEG细胞对奥沙利铂的敏感性增加。

目的:评价长链非编码RNA NORAD在氯胺酮诱发小鼠海马神经元毒性中的作用及其与内质网应激的关系。方法:分离并培养原代小鼠海马神经元，采用随机数字表法分为5组( n＝36)：对照组(C组)、氯胺酮组(K组)、氯胺酮+pcDNA3.1-NORAD质粒组(K+NORAD组)、氯胺酮+对照质粒组(K+NC组)和氯胺酮+NORAD+衣霉素组(K+NORAD+TM组)。C组使用正常培养基培养24 h；K组加入40 μmol/L氯胺酮孵育24 h；K+NORAD组先转染pcDNA3.1-NORAD质粒至神经元中，48 h后加入氯胺酮40 μmol/L孵育24 h；K+NC组先转染pcDNA3.1(+)质粒至神经元中，48 h后加入氯胺酮40 μmol/L孵育24 h；K+NORAD+TM组先转染pcDNA3.1-NORAD质粒，24 h后加入内质网应激激活剂衣霉素1 μg/ml孵育24 h，然后再加入氯胺酮40 μmol/L孵育24 h。采用CCK-8法检测神经元活力，检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量，采用TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡情况，Real-time PCR法测定NORAD表达，Western blot法检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK (p-PERK)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。 结果:与C组相比，K组神经元活力降低，LDH释放量增加，凋亡神经元百分比和细胞凋亡率升高，NORAD表达下调，CHOP表达上调，p-PERK/PERK升高( P<0.05)；与K组相比，K+NORAD组神经元活力升高，LDH释放量减少，凋亡神经元百分比和细胞凋亡率降低，NORAD表达上调，CHOP表达下调，p-PERK/PERK降低( P<0.05)，K+NC组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与K+NORAD组相比，K+NORAD+TM组神经元活力降低，LDH释放量增加，凋亡神经元百分比和细胞凋亡率升高，CHOP表达上调，p-PERK/PERK升高( P<0.05)，NORAD表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:过表达NORAD可通过抑制内质网应激，减轻氯胺酮诱发的小鼠海马神经元毒性。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）在浅表性食管鳞状细胞癌中表达及其临床意义。方法:选取2022年6月到2023年6月新乡市中心医院和上海市胸科医院收治的54例浅表性食管鳞状细胞癌和癌旁组织作为研究对象，采用lncRNA芯片分析癌旁组织和浅表性食管鳞状细胞癌差异表达lncRNA，分析差异表达基因的功能富集和生物学调控通路。选择差异最为显著的lncRNA NORAD作为研究对象，采用荧光定量分析癌旁组织和浅表性食管鳞状细胞癌组织中lncRNA NORAD表达水平。分析lncRNA NORAD表达水平与浅表性食管鳞状细胞癌患者临床病理特征和预后的关系。采用多因素回归分析分析浅表性食管鳞状细胞癌预后的独立因素。计量数据比较采用 t检验。 结果:采用lncRNA芯片共筛选出2 180条差异表达的lncRNA （上调lncRNA 1 432条，下调lncRNA 748条）。上调倍数最大的是lncRNA NORAD （12倍）。京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集显示这些lncRNA参与诸多生物代谢和信号转导相关的通路，包括细胞糖代谢过程、细胞生长和死亡、蛋白质相互作用、蛋白质转录翻译后修饰、DNA损伤修复和氨基酸嘌呤代谢。癌旁组织中lncRNA NORAD表达水平（1.01±0.17）明显低于浅表性食管鳞状细胞癌（1.95±0.17），差异有统计学意义（ t＝29.150， P<0.05）。中高分化患者浅表性食管鳞状细胞癌组织lncRNA NORAD表达水平（1.85±0.12）明显低于低分化患者（2.07±0.15），差异有统计学意义（ t＝5.828， P<0.05）。管腔狭窄患者浅表性食管鳞状细胞癌组织lncRNA NORAD表达水平（2.03±0.14）明显高于无管腔狭窄患者（1.88±0.16）。差异有统计学意义（ t＝3.592， P<0.05）。有脉管癌栓患者浅表性食管鳞状细胞癌组织lncRNA NORAD表达水平（2.05±0.17）明显高于无脉管癌栓患者（1.90±0.13），差异有统计学意义（ t＝5.248， P<0.05）。淋巴结转移患者浅表性食管鳞状细胞癌组织lncRNA NORAD表达水平（1.83±0.13）明显高于未见淋巴结转移患者（2.04±0.13），差异有统计学意义（ t＝6.221， P<0.05）。lncRNA NORAD高表达、分化程度和淋巴结转移是浅表性食管鳞状细胞癌预后的独立危险因素（ Wald＝14.526、13.578、11.425, P<0.05）。 结论:lncRNA NORAD在浅表性食管鳞状细胞癌中呈高表达，并与患者临床病理特征和预后密切相关。

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制.方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达.体外分离培养人VSMC,随机分为 对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics 组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控.结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(尸＜0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P＜0.05).与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA 组、miR-513b-5p mimics 组细胞 GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67 阳性率、迁移率、侵袭数及 N-cadherin、Vimentin 蛋白表达降低(P＜0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P＜0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P＜0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P＜0.05).结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡.

目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性.细胞克隆试验检测细胞增殖能力.结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加.MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强.细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖.结论:NORAD高表达可增强MM对BTZ化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性.

目的 探讨长链非编码 RNA NORAD(LncRNA NORAD)、微小 RNA-199a-3p(miR-199a-3p)在食管鳞癌病人血清中的表达,分析其对食管鳞癌的诊断价值.方法 2018年1月～2022年12月间我院收治的食管鳞癌病人286例(食管鳞癌组),记录其临床病理特征,同期纳入健康体检者204例(对照组).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清LncRNA NORAD、miR-199a-3p表达水平;采用Pearson相关性分析血清LncRNA NORAD与miR-199a-3p表达水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA NORAD、miR-199a-3p表达水平对食管鳞癌的诊断价值.结果 食管鳞癌组血清LncRNA NORAD表达水平高于对照组,miR-199a-3p表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).食管鳞癌病人血清LncRNA NORAD与miR-199a-3p表达水平呈负相关(r=-0.649,P＜0.05).有淋巴结转移、TNM分期为T3～T4期、低分化的食管鳞癌病人LncRNA NORAD高表达、miR-199a-3p低表达比例高于无淋巴结转移、TNM分期为T1～T2期、中/高分化的食管鳞癌病人,差异有统计学意义(P＜0.05).LncRNA NORAD、miR-199a-3p单独及二者联合诊断食管鳞癌的AUC分别为0.817、0.796、0.854.结论 食管鳞癌病人血清LncRNA NORAD高表达,miR-199a-3p低表达,二者表达水平可作为食管鳞癌的辅助诊断指标之一.

目的:探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡.方法:体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组:对照组、LPS组(10 μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10 μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10 μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和 miR 阴性对照)、LPS+干扰 NORAD+miR-378a-3p 抑制剂组(10 μg/mLLPS+共转染干扰 NORAD 和 miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外,其余组细胞LPS刺激24 h.用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以流式细胞术检测细胞凋亡率;以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系.结果:与对照组比较,LPS组心肌细胞中NORAD的表达量、TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率升高,miR-378a-3p的表达量降低(P均＜0.05);与LPS+阴性序列组比较,LPS+干扰NORAD组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平降低及细胞凋亡率降低(P均＜0.05);双荧光素酶报告实验证实NORAD可靶向结合miR-378a-3p;与LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组比较,LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组心肌细胞中TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率升高(P均＜0.05).结论:NORAD可通过调控miR-378a-3p减轻LPS诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡.

背景与目的 针对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗和诊断仍然是医学界的难题,而探究NSCLC发生发展的分子机制是当前研究的热点.长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)NORAD在多种癌细胞中高表达,可能是促进NSCLC发生的分子靶点.探讨LncRNA NORAD通过miR-199a-3p调控锌指蛋白217(zinc finger protein 217,ZNF217)对NSCLC细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法 实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B、肺癌H460细胞和顺铂(Cisplatin,DDP)耐药细胞株H460/DDP细胞中NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达;将H460/DDP细胞分为control组、si-NC组、si-NORAD组、miR-NC组、miR-199a-3p mimic组、si-NORAD+inhibitor NC组、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组.检测细胞增殖、细胞凋亡情况,各组细胞NORAD、miR-199a-3p、ZNF217基因表达,Ki-67、caspase-9、ZNF217蛋白表达量;验证miR-199a-3p与NORAD和ZNF217的关系.结果 与BEAS-2B细胞相比,H460和H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05).与H460细胞相比,H460/DDP细胞中NORAD、ZNF217 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-199a-3p表达显著降低(P<0.05).与control组和si-NC组相比,si-NORAD组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著升高(P<0.05).与miR-NC组相比,miR-199a-3p mimic组H460/DDP细胞增殖率、NORAD、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、miR-199a-3p、caspase-9表达显著升高(P<0.05).与si-NORAD+inhibitor NC组相比,si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor组H460/DDP细胞增殖率、ZNF217 mRNA表达、Ki-67、ZNF217蛋白表达显著升高,凋亡率、miR-199a-3p表达、caspase-9表达显著降低(P<0.05).结论 下调NORAD表达可增强miR-199a-3p表达并抑制ZNF217表达,进而抑制H460/DDP细胞增殖,促进其凋亡,增强其DDP化疗敏感性.

目的:探究lncRNA NORAD靶向miR-34a对口腔鳞状细胞癌MMP-2 表达的影响.方法:将SCC-9 细胞随机分为control组(不转染任何质粒)、si-NORAD(SCC-9 细胞转染si-NORAD质粒)及si-NC组(SCC-9 细胞转染阴性对照质粒)、miR-34a组(SCC-9 细胞转染miR-34a mimics质粒)、si-NORAD+miR-34a inhibitor组(SCC-9 细胞同时转染si-NORAD质粒和miR-34a inhibitor质粒).RT-PCR检测细胞中NORAD、miR-34a表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹(Western blotting)检测细胞中MMP-2 蛋白表达;荧光素酶实验报告检测NOARD和miR-34a的靶向关系.结果:与人永生化口腔上皮细胞HIOEC相比,口腔鳞癌细胞株中NORAD表达均明显增加,miR-34a表达明显降低,且SCC-9 细胞中 NORAD表达和 miR-34a表达变化最显著(P＜0.05).与control组相比,si-NORAD组和miR-34a组细胞增殖、侵袭,以及MMP-2蛋白表达均明显降低(P＜0.05);control组和si-NC组、si-NORAD组和miR-34a组细胞增殖、侵袭,以及MMP-2蛋白表达相比无明显差异(P＞0.05);与si-NORAD组相比,si-NORAD+miR-34a inhibitor组细胞增殖、侵袭,以及MMP-2 蛋白表达均明显增加(P＜0.05).结论:敲减NORAD可靶向调控miR-34a,进而抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和细胞中MMP-2表达.