Background::Hyperthermia in combination with DnaJA4-knockout (KO) obviously affects the anti-viral immunity of HaCaT cells. The mechanisms of this process are not yet fully explored. However, it is known that DnaJA4 interacts with actin cytoskeleton after hyperthermia. Our aim was to investigate the effects of DnaJA4 on F-actin in HaCaT cells following hyperthermia.Methods::Wild-type (WT) and DnaJA4-KO HaCaT cells were isolated at either 37°C (unheated) or 44°C (hyperthermia) for 30 min followed by testing under conditions of 37°C and assessing at 6, 12, and 24 h after hyperthermia. The cytoskeleton was observed with immunofluorescence. Flow cytometry and Western blotting were used to detect the expression of F-actin and relevant pathway protein.Results::DnaJA4-KO and hyperthermia changed the cytoskeleton morphology of HaCaT cells. F-actin expression levels were elevated in DnaJA4-KO cells compared with WT cells (6364.33 ± 989.10 vs. 4272.67 ± 918.50, P < 0.05). In response to hyperthermia, F-actin expression levels of both WT and DnaJA4-KO cells showed a tendency to decrease followed by an obvious recovery after hyperthermia (WT cells: unheated vs. 6 h after hyperthermia or 24 h after hyperthermia: 0.34 ± 0.02 vs. 0.24 ± 0.01, 0.31 ± 0.01, P < 0.001, P < 0.05; DnaJA4-KO cells: unheated vs. 6 h after hyperthermia or 24 h after hyperthermia: 0.44 ± 0.01 vs. 0.30 ± 0.01, 0.51 ± 0.02, P < 0.001, P < 0.01). WT cells restored to baseline levels observed in the unheated condition, while DnaJA4-KO cells exceeded baseline levels in the recovery. As the upstream factors of F-actin, a similar profile in rho-associated serine/threonine kinase 1 (ROCK 1) and RhoA expressions was observed after hyperthermia. While E-cadherin expression was decreased in response to hyperthermia, it was increased in DnaJA4-KO cells compared with WT cells. Conclusions::Hyperthermia affects the expression levels of F-actin in HaCaT cells. DnaJA4 knockout increases the expression of F-actin in HaCaT cells after hyperthermia. DnaJA4 regulates the expressions of F-actin and the related pathway proteins in response to hyperthermia in HaCaT cells.

目的 探讨氨甲喋呤对映体(methotrexate,MTX)体外诱导急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞系BALL-1和CCRF-CEM蛋白质表达的差异性.方法 通过浓度递增及低剂量持续性诱导构建耐受30μmol MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]的CCRF-CEM和BALL-1细胞系.提取耐药细胞、非耐药细胞及不加药时两种细胞的总蛋白质,利用双向凝胶电泳技术获得亲本细胞和耐药细胞的电泳结果 ,选择差异倍数在2倍以上且边界比较清晰的蛋白质点,经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的结果进行生物学信息分析.结果共发现12个蛋白质点有生物学功能,包括4个热休克相关蛋白(HPSA5、HPSA8、HSPD1和DNAJA1/4)、5个与细胞增殖有关联的蛋白质(PCNA、NPM1、CORO1A、CALR和DYNC1I2)以及2个分子伴侣相关蛋白(CCT6A/B和VCP),另1个蛋白质为EON1/2,并证实其与细胞的新陈代谢有关联.结论 MTX对映体诱导耐药后细胞系蛋白质表达发生变化,可能在耐药过程中具有重要的作用.

目的 探究加权基因共表达网络识别冠状动脉(以下简称冠脉)介入治疗后与心房颤动(AF)有关的基因模块.方法 选取青海省心脑血管病专科医院收治的4例冠脉介入治疗后发生AF患者和4例冠脉介入治疗后未发生AF患者的左心房组织.对其进行转录组测序并筛选出差异表达基因,应用加权基因共表达网络分析算法构建与AF有关的基因模块.结果 共识别824个差异表达基因及与患者临床表型有关的模块,RCAN1和DNAJA4基因与AF严重程度有相关性.结论 构建共表达网络并从中筛选与AF有关的枢纽基因,能更好地理解这些枢纽基因在冠脉介入治疗后导致AF的作用.

目的 探讨DnaJA4对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮肤炎症的影响.方法 4组小鼠(每组8只),即应用咪喹莫特(imiquimod,IMQ)诱导银屑病样皮炎的DnaJA4敲除(knockout,KO-IMQ)组小鼠及野生型(wild-type,WT-IMQ)小鼠,涂以等量凡士林的DnaJA4敲除(knockout,KO-blank)组小鼠及野生型(wild-type,WT-blank)小鼠.银屑病皮损面积及严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评价IMQ诱导的小鼠银屑病样皮损表现.HE染色观察皮损病理特征.免疫组织化学染色观察小鼠皮损表皮IL-6、IL-17、IL-27、C-X-C型趋化因子配体1(C-X-C motif ligand 1,CXCL1)阳性程度及银屑病患者与正常对照皮肤组织内DnaJA4表达情况.结果 IMQ诱导的银屑病样皮炎小鼠模型中,DnaJA4-KO小鼠出现更严重的红斑,皮肤增厚更明显,累积PASI评分在第3～5天明显高于WT小鼠,并较WT小鼠真皮更早出现炎症细胞,浸润细胞数更多,且在应用IMQ的第4天见更大面积的Munro's微脓肿.IMQ诱导的DnaJA4-KO小鼠银屑病样皮损表皮内IL-6、IL-17、CXCL1均较WT小鼠呈上调表达;DnaJA4未见于银屑病患者皮损组织,但在正常皮肤组织表皮基底细胞阳性表达.结论 DnaJA4敲除通过上调表皮内促炎细胞因子及趋化因子表达加重IMQ诱导的小鼠银屑病样皮肤炎症,并影响Munro's微脓肿形成.

目的:探索冬凌草甲素对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用的组学研究.方法:取食管鳞癌细胞系EC109和TE1细胞,分别用0、10、20、40、80和160μmol/L的冬凌草甲素处理,采用MTT法和流式细胞仪检测冬凌草甲素对EC109和TE1细胞增殖及凋亡的影响;冬凌草甲素处理食管鳞癌细胞后提取总RNA,采用全转录组分析技术(RNA-seq)探索食管鳞癌细胞转录组的变化;运用GO聚类分析对差异表达的基因进行功能分析.结果:冬凌草甲素可抑制食管鳞癌EC109和TE1细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05);RNA-seq分析结果显示,在EC109细胞中冬凌草甲素可使463个基因表达上调,419个基因下调,在TE1细胞中冬凌草甲素可使2023个基因表达上调,1642个基因下调;其中,共同上调的基因284个,共同下调的基因176个.冬凌草甲素处理后细胞出现明显的热激反应,HSPA1A、HSPA1B、BAG3、HSPH1、DNAJB1、HSPA8、HSP90AA1、DNAJA4和DNAJA1等基因表达升高,同时作为调节GSH-ROS的TRIM16、SLC7A11、TXNRD1、SRXN1、GCLM和GCLC等的基因表达也升高.GO聚类分析显示,差异表达基因为热激反应基因、蛋白错误折叠相关基因和神经投射发生基因.结论:冬凌草甲素抑制食管鳞癌细胞的增殖并促进其凋亡,其分子机制与热激反应及GSH-ROS系统密切相关.

目的:分析DNAJ热休克蛋白40家族成员A1[DNAJ heat shock protein 40 family(Hsp40)member A1,DNAJA1]在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,探讨DNAJA1对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响,揭示其与乳腺癌患者预后及化疗抵抗的关系.方法:免疫组织化学检测169例乳腺癌患者配对石蜡组织及120例接受新辅助化疗前穿刺活检石蜡组织中DNAJA1的表达情况.CCK-8、平板克隆、Transwell侵袭及细胞划痕实验检测DNAJA1对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响.结果:DNAJA1在原发灶及转移灶的乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.001,P＜0.001).临床病理分析发现,DNAJA1的高表达与分子分型、p53的突变和肿瘤复发密切相关.DNAJA1高表达还与患者的较短生存时间相关(P=0.023).另外,DNAJA1在接受新辅助化疗的Miller-Payne(MP)5级组患者的癌组织中表达明显低于其他组(P=0.000 4).体外实验证实,敲低DNAJA1能明显抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭.结论:DNAJA1能促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭,且DNAJA1在乳腺癌组织中高表达与患者不良预后及化疗抵抗相关,可作为预测患者预后及新辅助化疗效果的一个新靶点.