绦虫病是一类严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病，其药物治疗和疫苗防治是当今研究的热点，而目前蛋白质组学成为了研制疫苗和了解致病机制的重要工具。寄生虫不同发育阶段间蛋白质模式的差异可能反映了其在不断变化的环境和生命周期中所使用的特定策略和适应机制，故本文对多种绦虫的蛋白质组学研究进展作一综述，旨在为绦虫病的防治提供参考依据。

现如今对肾移植急性排斥反应的诊断仍依赖于肾脏穿刺活检 [1]。本实验通过建立和比较大鼠肾移植急性排斥反应移植物中组织蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定其差异表达的组织蛋白质谱，旨在寻找肾移植急性排斥反应非创伤性的蛋白标志物。

目的:探讨程序性细胞死亡因子4（PDCD4）在肝癌组织中表达及其临床诊断价值。方法:选取2021年6月到2023年6月新乡医学院第一附属医院手术切除的肝癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用蛋白质组学分析肝癌组织中差异表达的蛋白；采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹分析癌旁组织和肝癌组织PDCD4表达水平；采用全自动生化仪检测肝癌患者血清肿瘤标志物糖类抗原199（CA199）与甲胎蛋白（AFP）的水平；分析PDCD4表达水平与肝癌患者临床病理特征和预后的关系，并分析PDCD4与肿瘤标志物CA199与AFP的关系。制备接收者工作曲线，分析PDCD4诊断肝癌的价值。符合正态分布的计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:双向电泳结果显示肝癌组织和癌旁组织差异表达的蛋白54个，其中上调20个，下调24个。下调最为显著的蛋白是PDCD4。肝癌组织中PDCD4蛋白和mRNA表达水平（0.85±0.24、0.85±0.24）明显低于癌旁组织（1.57±0.29、1.06±0.26），差异均有统计学意义（ t＝18.710、17.460， P<0.05）。中高分化患者、未淋巴结转移患者PDCD4表达水平（1.09±0.16、1.17±0.23）明显高于低分化和淋巴结转移（0.74±0.13、0.75±0.15），差异有统计学意义（ t＝11.410、10.720， P<0.05）。PDCD4高表达组患者3年生存率[55.56%（30/54）]明显高于低表达组[35.56%（16/45）]，差异有统计学意义（LogRank＝5.649， P<0.05）。高表达组患者血清CA199与AFP水平[（40.67±8.23） U/ml、（55.72±14.79） μg/L]明显低于低表达组患者[（83.94±13.58） U/ml、（58.44±7.72） μg/L]，差异有统计学意义（ t＝11.570、6.990， P<0.05）。PDCD4、CA199与AFP联合诊断的曲线下面积0.850（0.724～0.985），灵敏度为0.895，特异性为0.879。 结论:肝癌患者肿瘤组织中PDCD4表达显著下调，与患者不良临床病理特征和预后相关，与血清标志物CA199和AFP联合检测有助于肝癌诊断。

弱精子症是一种精子运动活力不足的病症，约有27.8%的男性不育由弱精子症导致，其病因复杂，发病机制尚不明确，探讨其发病机制有助于寻找有效预防和治疗策略。近年来，随着蛋白质组学技术（双向电泳、酵母双杂交技术、质谱等技术）的发展，众多研究者将研究重点放在基于蛋白质组学的弱精子症研究上，揭示了弱精子症差异蛋白及所在生物通路，为弱精子症的机制研究提供了众多理论支撑。本文围绕蛋白质组学的相关技术，对弱精子症的差异蛋白表达、病因和发生机制等方面取得的诸多成果进行综述，希望为弱精子症的诊治提供新思路。蛋白质间的相互作用和通路及代谢异常为研究弱精子症的精子运动活力提供了一个很有潜力的方向。

目的:探讨前列腺癌组织蛋白质组学及其差异表达蛋白分析。方法:选取2022年1月至2023年12月郑州大学附属肿瘤医院收治的12例前列腺癌组织和癌旁组织作为研究对象。12个癌旁组织和前列腺癌组织采用组织裂解液提取总蛋白，采用梯度重叠的固定化PH梯度胶对肿瘤样本和正常组织样本进行双向电泳，获得总蛋白质图谱，对两组图谱进行差异分析，选取差异表达的印迹点，切割后进行质谱鉴定和数据库检索，分析差异蛋白的生物学功能。采用蛋白质免疫印迹验证质谱筛选差异表达蛋白水平。计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:采用双向电泳共得到125个差异表达的蛋白质点，串联质谱分析，获得肽段指纹图谱，共获得54个显著表达的的蛋白，其中上调31个，下调23个。其中表达增加排名前5的蛋白分别为L-乳酸脱氢酶B、α-烯醇酶、内质网蛋白ERp29、转录激活因子6、高迁移率蛋白A2。表达下调排名前5的蛋白分别为蛋白质二硫化物异构酶、血小板反应素-1、WW结构域的氧化还原酶、内质网蛋白ERp29、乙醛脱氢酶。上述蛋白主要参与细胞中心碳代谢、蛋白质翻译、基因转录调控、内质网应激反应、细胞外基质重塑等生物过程。癌旁组织中L-乳酸脱氢酶B、α-烯醇酶、波形蛋白、转录激活因子6和高迁移率蛋白A2蛋白表达水平(0.87±0.09、1.05±0.15、0.75±0.06、0.76±0.09、0.62±0.09)明显低于前列腺癌组织(1.85±0.13、1.71±0.14、1.47±0.12、1.24±0.12、1.40±0.22)，差异有统计学意义( t＝21.530、11.090、18.930、11.450、11.460， P<0.05)。癌旁组织中蛋白质二硫化物异构酶、血小板反应素-1、WW结构域的氧化还原酶、内质网蛋白ERp29和乙醛脱氢酶蛋白表达水平(1.43±0.19、1.14±0.14、1.37±0.14、1.03±0.09、0.91±0.06)明显高于前列腺癌组织(0.42±0.12、0.74±0.11、0.79±0.07、0.69±0.07、0.60±0.13)，差异有统计学意义( t＝15.430、7.620、12.750、10.280、7.418， P<0.05)。 结论:前列腺癌组织细胞中心碳代谢、蛋白质翻译和基因转录调控等相关的蛋白表达异常，可能与前列腺癌的形成和进展密切相关。

目的:探讨肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠癌组织的表达变化及其上游微小RNA(miRNA，miR)对其表达水平的调控。方法:选取2020年1月至2023年1月新乡医学院第一附属医院收治的58例结直肠癌临床标本和癌旁组织作为研究对象，采用双向电泳技术分析结直肠癌和癌旁组织差异表达的蛋白，选取肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和结直肠癌组织肿瘤相关钙信号传感器2表达水平。免疫组织化学分析两组组织细胞增殖抗原(PCNA)的阳性率；相关性分析肿瘤相关钙信号传感器2与细胞增殖的关系。转录组学分析癌旁组织和结肠癌组织miRNA，筛选差异靶向肿瘤相关钙信号传感器2的miRNA，并采用双荧光素酶报告基因验证分析miRNA的靶向性。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:双向电泳筛选10个差异的蛋白质，本研究选择差异显著的蛋白肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象。癌旁组织中肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(0.92±0.14)明显低于结直肠癌组织(1.62±0.20)，差异有统计学意义( t＝14.320， P<0.05)。PCNA表达阴性患者肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(1.33±0.13)明显低于结直肠癌组织(1.69±0.16)，差异有统计学意义( t＝6.092， P<0.05)。癌旁组织和结直肠癌组织总计差异miRNA共1 218个，其中上调表达732个，下调486个。发现5个与肿瘤相关钙信号传感器2存在互补的miRNA，分别为miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p。癌旁组织中miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p表达水平(1.07±0.08、1.07±0.09、1.11±0.15、1.01±0.10、1.15±0.15)明显高于结直肠癌组织(0.28±0.05、0.30±0.07、0.45±0.08、0.54±0.09、0.69±0.12)，差异有统计学意义( t＝21.050、26.350、14.850、12.600、9.165， P<0.05)。miRNA对照和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.96±0.07、0.94±0.03、0.92±0.06、0.91±0.08、0.95±0.05)明显高于miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p模拟物和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.22±0.06、0.24±0.07、0.34±0.09、0.45±0.08、0.60±0.12)，差异有统计学意义( t＝23.541、23.102、18.208、14.231、12.514， P<0.05)。 结论:肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠组织中表达显著上调，受miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p等miRNA调控。

目的 建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)制品自身IgG抗体谱展示方法及抗体种类分析方法,考察比较国内不同血液制品企业市售IVIG自身IgG抗体多样性.方法 收集我国 4 个血液制品企业IVIG为研究对象,以人脐静脉内皮细胞总蛋白为抗原,通过双向电泳结合蛋白印记方法展示不同 IVIG的自身抗体谱,通过 IVIG与人类蛋白质组芯片杂交,高通量鉴定不同 IVIG中自身抗体的种类并进行生物信息学分析.结果建立了IVIG自身抗体谱展示方法和抗体种类分析方法,获得了较高质量的IVIG自身抗体谱以及其能够识别的人自身蛋白的生物学信息,不同IVIG制品识别自身抗原的数量、种类有明显差异.4 个制品针对人脐静脉内皮细胞蛋白抗体数量分别为 241～386 个;识别人蛋白质芯片上蛋白数量分别为292～435 个,有 172 个人自身蛋白被 4 个制品均识别.结论 利用抗体谱展示和蛋白质芯片技术能够用于分析IVIG中自身IgG抗体数量及种类多样性,检测的 4个厂家IVIG 制品中均具有广谱自身抗体,且具有各自的独特性.

目的 分析河南省自赤道几内亚输入性恶性疟原虫抗药性基因多态性,了解恶性疟原虫基因突变情况,评估其流行特征.方法 收集河南省2012-2019年自赤道几内亚输入性恶性疟病例信息和外周血样,提取血样中恶性疟原虫基因组DNA,巢式PCR扩增恶性疟原虫Kelch 13螺旋体(PfK13)基因、恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白(Pfcrt)基因、恶性疟原虫多药物抗性基因1(Pfmdr1)、恶性疟原虫二氢叶酸还原酶(Pfdhfr)基因和恶性疟原虫二氢蝶酸合酶(Pfdhps)基因,琼脂糖凝胶电泳后进行双向测序.获得的基因序列通过MEGA7软件与参考基因组进行比较获得突变位点信息,参考基因组来自GenBank的恶性疟原虫3D7野生虫株(GenBank登录号分别为 PF3D7_1343700、PF3D7_0709000、PF3D7_0523000、PF3D7_0417200 和 PF3D7_1324800).使用 SPPS 21.0软件对数据进行统计学分析.结果 2012-2019年,河南省共报告输入性疟疾病例1 522例,其中自赤道几内亚输入病例117例,包括恶性疟病例97例、卵形疟病例16例、间日疟和三日疟病例各1例、恶性疟原虫/三日疟原虫混合感染和恶性疟原虫/卵形疟原虫混合感染病例各1例.测序获得91份恶性疟原虫样品的PfK1 3基因序列,基因突变率为8.8％(8/91);突变样品中共检测出7个非同义突变位点和3个同义突变位点,其中非同义突变位点分别为M476I混合型(混)、A481V混、A564E混、P574L混、A578S、V589I和N609I混,同义突变位点分别为G625G、N664N和C469C.测序获得91份恶性疟原虫样品的Pfcrt基因序列,基因突变率为18.7％(17/91);检测出 3 种Pfcrt 基因型,分别为野生型 C72V73M74N75K76(81.3％,74/91)、突变型 C72V73I74E75T76(12.1％,11/91)和混合型C72V73M/I74N/E75K/T76(6.6％,6/91).测序获得92份恶性疟原虫样品的Pfmdr1基因序列,基因突变率为77.2％(71/92);检测出 3 个突变位点,分别为 N86Y(41.3％,38/92)、Y184F(75.0％,69/92)和 D1246Y(1.1％,1/92),其中 N86Y 突变率从2012年的 68.8％(11/16)下降到 2016年的 11.1％(1/9)(x2=11.58,P＜0.05);检测出5种Pfmdr1基因型,分别为野生型N86Y184D1246(22.8％,21/92),单基因突变型Y86Y184D1246(1.1％,1/92)、N86F184D1246(34.8％,32/92)、N86Y184Y1246(1.1％,1/92)和双重突变型Y86F184D1246(40.2％,37/92).测序获得90份恶性疟原虫样品的Pfdhfr基因序列,基因突变率为96.7％(87/90);检测出3个突变位点,分别为N51I(91.1％,82/90)、C59R(93.3％,84/90)和S108N(96.7％,87/90);检测出 5种Pfdhfr基因型,分别为野生型N51C59S108(3.3％,3/90),单基因突变型 N51C59N108(2.2％,2/90),双重突变型 I51C59N108(1.1％,2/90)、N51R59N108(3.3％,3/90)和三重突变型I51R59N108(90.0％,81/90).测序获得90份恶性疟原虫样品的Pfdhps基因序列,基因突变率为97.8％(88/90);检测出 6个突变位点,分别为 1431V(8.9％,8/90)、S436A(27.8％,25/90)、A437G(92.2％,83/90)、K540E(3.3％,3/90)、A581G(1.1％,1/90)和 A613S(2.2％,2/90);检测出 8 种Pfdhps基因型,分别为野生型I431S436A437K540A581A613(2.2％,2/90),单基因突变型 I436A436A43(5.6％,5/90)、I431S436G437K540A581A613(66.7％,60/90),双重突变型 I431A436G437K540A581A613(10.0％,9/90)、I431S436G437E540A581A613(3.3％,3/90),三重突变型V431A436G437K540A581A613(8.9％,8/90)、I431A436G437K540G581A613(1.1％,1/90)和 I431A436G437K540A581S613(2.2％,2/90).89份恶性疟原虫样品的Pfdhfr和Pfdhps基因同时测序成功,其中84例(94.4％)同时发生双基因突变,四重突变体I51R59N108-G437占比最高(64.0％,57/89).结论 自赤道几内亚输入的恶性疟原虫样品中检出多个PfKI3基因突变位点,其中M476I和P574L已被证实与青蒿素类药物抗性相关;随着氯喹的停用,与青蒿素配伍药物抗性相关的Pfcrt和Pfmdr1基因突变率呈下降趋势;恶性疟原虫对磺胺多辛-乙胺嘧啶药物抗性水平多为"部分抗性",未检出"超级抗性"样品.

芦苇(Phragmites australis)分布范围广,生物量巨大,环境适应性强.受芦苇多倍体基因组的限制,在基因水平上解释其独特的物种特质非常困难.利用三代测序及多种方法研究2种生态型芦苇(2n=8x)中RCA基因(编码Rubisco活化酶)的类型、结构、表达和定位模式.结果表明,芦苇基因组中有4类RCA基因,均属于RCA2β.转录水平和蛋白质水平检测以及免疫胶体金定位结果表明,芦苇RCA的基因表达模式和蛋白质定位具有明显的生态型特异性.与沼泽芦苇(SR)相比,沙丘芦苇(DR)中RCA的表达水平较低,且更倾向于产生RCA2-β2产物.通过分相的蛋白双向电泳和质谱方法,鉴定到6个高表达的RCA同型物.在DR中这些同型物高比例地分布于膜相.研究表明当芦苇处于极度恶劣的沙漠环境中,RCA转移到膜相并参与叶绿体的膜保护机制.

目的 构建表达dsRNA的双向启动子以及靶基因AaCPR100A的大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315-AaCPR100A.方法 以苏云金芽孢杆菌pSVP27A质粒为模板通过PCR扩增苏云金芽孢杆菌Cry3A正向启动子Pro-1(+);以埃及伊蚊RNA反转为cDNA为模板,扩增靶基因AaCPR100A;将大肠-苏云金穿梭载体pHT315质粒经Hind Ⅲ和Sal Ⅰ双酶切线性化;按照转录方向将正向启动子与靶基因通过无缝克隆插入穿梭载体pHT315中;以生物合成的含有Cry3A反向启动子序列的质粒为模版,经PCR克隆扩增Pro-1(-)反向启动子;将含有正向启动子与靶基因的中间载体通过EcoRⅠ限制性酶切酶线性化,按转录方向在靶基因下游通过无缝克隆插入反向启动子.结果 经琼脂糖凝胶电泳检测,正向启动子、靶基因AaCPR100A和反向启动子PCR产物条带清晰,质量良好,可用于无缝克隆实验;经无缝克隆连接双向启动子以及靶基因片段后,对含有重组载体pHT315-AaCPR100A的重组质粒进行PCR验证,在重组载体中成功扩增正向启动子、靶基因片段以及反向启动子,经核苷酸测序验证双向启动子序列以及靶基因序列测序结果与序列比对结果基本一致,符合构建载体元件的要求,证明重组载体构建成功.结论 本研究利用无缝克隆技术成功构建含有双向启动子以及靶基因的重组穿梭载体,为构建表达伊蚊表皮蛋白基因AaCPR100A dsRNA的苏云金芽孢杆菌工程菌奠定基础.