目的:探究敲减角质形成细胞KRT5基因对共培养黑素细胞黑素含量的影响，以解释屈侧网状色素沉着症（DDD）的色素增加性皮损形成的机制。方法:通过成簇的规律间隔的短回文重复序列-相关蛋白9（CRISPR-Cas9）技术获得KRT5基因杂合突变的HaCaT细胞，将转染非靶向单向导RNA：Cas9蛋白复合物的HaCaT细胞设为对照组，分别与人原代黑素细胞HEMn体外共培养。免疫荧光观察共培养细胞中细胞角蛋白及黑素小体表达；差异胰酶消化获得不同共培养组中黑素细胞，检测细胞内黑素含量。免疫组化检测1例KRT5突变DDD患者皮损和正常对照皮肤中黑素细胞特异性前黑素小体蛋白17（Pmel17）的表达改变。结果:Sanger测序显示，实验组HaCaT细胞KRT5基因第1外显子起始密码子发生杂合突变（c.1delA），对照组HaCaT细胞KRT5基因未发生突变。Western印迹显示，实验组HaCaT细胞KRT5蛋白表达水平（0.60 ± 0.05）显著低于对照组（1.00 ± 0.00， t = 32.38， P = 0.001）。HEMn细胞与实验组HaCaT细胞共培养体系中Pmel17标记的黑素小体较与对照组共培养体系增多，且细胞内黑素含量增加52.5%，差异具有统计学意义（ t = -3.48， P = 0.025）。KRT5突变DDD患者皮损组织中Pmel17表达量较正常对照皮肤增加。 结论:本研究通过CRISPR-Cas9诱导KRT5基因突变的HaCaT细胞，与黑素细胞在体外建立共培养细胞模型，验证了其对共培养黑素细胞的影响，为进一步研究角质形成细胞与黑素细胞相互作用机制以及皮肤色素异常的发病机制提供了初级研究模型。

目的:分析Dowling-Degos病1家系KRT5基因突变情况。方法:收集先证者临床资料，调查先证者家族3代共12人信息，采集先证者和8例家系成员以及家系以外50例无亲缘关系的健康人外周血，提取基因组DNA行全外显子测序后与人类基因组KRT5、POFUT1及POGLUT1序列进行比对。结果:本家系有3例患者，分别为先证者及其父亲和祖母（去世）。先证者及其父亲临床表现为皱褶部网状色素沉着，以胸腹皱褶部位为重，且KRT5基因第一外显子均存在c.165T>A杂合无义突变，其他家系成员及健康对照均未发现此突变，所有受试者POFUT1及POGLUT1基因检测未见异常。结论:本研究新发现1处KRT5基因c.165T>A突变，导致先证者及其父Dowling-Degos病。

先证者,男,30 岁.患者全身红色粟粒大小扁平丘疹 12 年,以腋下、脐周、上臂内侧为重,随年龄增加,皮损逐渐增多.皮疹伴轻微瘙痒,遇热出汗时瘙痒感加重.皮损组织病理示:表皮棘细胞层部分萎缩变薄,表皮突延长,见角囊肿结构,真皮浅层血管周围见少许单一核细胞.先证者家系中有 5例相似表现的患者,其中男 4 例,女 1 例.5 例患者均携带KRT5 基因杂合突变(c.14C>A,p.Ser5?).结合基因检测、临床及组织病理表现,诊断:家族性Dowling-Degos病.

患者女,52岁,胸腹部棕褐色丘疹斑片29年.既往体健,系统检查无异常.皮肤科情况:颈部、腋窝、乳房下等褶皱部密集分布棕褐色扁平丘疹或斑片,相互融合成网状.皮损组织病理示:表皮突呈鹿角状向下延长,真皮浅层血管周围少量淋巴细胞及组织细胞浸润,有散在噬色素细胞.家系调查显示家族4代中6人有类似皮损,男女各3人.诊断为褶皱部网状色素异常.

先证者女,50岁,皱褶部位反复脓肿、结节36年,黑褐色斑丘疹20年.皮肤科情况:面颈部、乳房、腋下、腹股沟区黑褐色斑丘疹,面颈部、躯干黑头粉刺、凹陷性瘢痕;后颈部、褶皱部位增生性瘢痕形成.皮损组织病理示:表皮突呈指状突起,伴色素增加,真皮浅层可见噬色素细胞.先证者家族中有9例有类似病史,其中男3例,女6例.诊断:家族性Dowling-Degos病合并化脓性汗腺炎.