目的:探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)调节卵巢癌耐药株A2780/顺铂(DDP)细胞迁移及侵袭能力的作用及其机制。方法:根据细胞对顺铂的耐药性，分为普通组A2780、顺铂耐药组A2780/DDP。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测A2780、A2780/DDP细胞活性及顺铂耐药性。Transwell细胞迁移、侵袭实验检测A2780、A2780/DDP细胞的迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测A2780、A2780/DDP细胞中ERCC1、上皮表型E-钙黏蛋白(E-cadherin)及间质表型波形蛋白(Vimentin)的表达。小干扰RNA(siRNA)-ERCC1转染A2780/DDP中ERCC1表达后，Transwell细胞迁移、侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变，Western blot检测细胞中ERCC1、E-cadherin及Vimentin表达的改变。两组间比较采用Student’s- t检验。 结果:A2780/DDP的半抑制浓度(IC 50)值为17.66 mg/L，A2780的IC 50值为2.236 mg/L，A2780/DDP较A2780的IC 50提高了7.898倍。A2780/DDP细胞的迁移和侵袭能力明显高于非耐药株，且A2780/DDP中ERCC1和间质表型Vimentin的表达明显高于非耐药株A2780，而上皮表型E-cadhetin表达明显低于A2780。干扰A2780/DDP中ERCC1表达后，细胞的迁移和侵袭能力明显低于对照组，且细胞中ERCC1和间质表型Vimentin的表达低于对照组，而上皮表型E-cadhetin表达高于对照组。结果差异均有统计学意义。 结论:A2780/DDP中高表达的ERCC1通过促进细胞发生上皮-间充质转化增强细胞的迁移及侵袭的能力。

患儿，男，8月26天，以"腹部进行性增大1月，呼吸困难1天"入西安市儿童医院。入院1月前患儿无明显诱因出现腹部进行性增大，腹壁张力逐渐增高，不伴发热，无呕吐、腹泻，就诊于当地医院并给予输注白蛋白、保肝等对症支持治疗。经治疗后效果不佳，1天前患儿腹胀较前明显加重，同时出现呼吸困难伴呻吟，精神状态差，拒乳，口唇发绀，当地医院予吸氧对症支持治疗后，无好转，意识障碍及发绀进行性加重后转诊至医院。

目的:探讨转录起始前复合物中通用转录因子IIH（TFIIH）在前列腺癌（PCa）中的遗传、表达特征及其与PCa预后的关系。方法:通过分析癌症基因图谱-PCa数据库（TCGA-PRAD）中495例PCa组织及52例癌旁组织TFIIH亚基的表达特征及临床意义。再通过PCa微阵列芯片验证TFIIH中的关键因子通用转录因子IIH亚基4（GTF2H4）与临床特征［病理分期、生化复发（BCR）以及格里森评分］的相关性。结果:495例PCa患者年龄为（61.01±6.82）岁。ERCC3、GTF2H4、MNAT1在格里森评分≥8的PCa组织中mRNA表达量较高（ P<0.05）。GTF2H4、MNAT1的表达量与病理分期相关（ P<0.05）。高表达GTF2H4 的PCa患者的BCR率较高（ HR=2.47，95 %CI：1.62~3.77， P<0.001），同时其对PCa患者BCR预测效果在各亚基中最好［3、5、7年受试者工作特征曲线下面积（AUC）均>0.7］，并在额外4个数据库中得到验证。480例PCa样本中，9例发生了TFIIH亚基的突变，占比1.87%。其中3例为ERCC2亚基突变，2例为GTF2H3亚基突变，GTF2H1、GTF2H4、CCNH、CDK7亚基突变各1例。单因素Cox回归分析显示GTF2H4为BCR的危险因素（ HR=2.470，95% CI：1.620~3.767， P<0.001），GTF2H5为保护因素（ HR=0.506，95% CI：0.336~0.762， P=0.001）。免疫组织化学染色评分结果显示GTF2H4的蛋白表达量与患者临床特征相关，差异均有统计学意义。 结论:TFIIH中的关键因子GTF2H4在PCa中高表达并提示预后欠佳。

目的 采用小干扰RNA(siRNA)技术作用于人结肠癌细胞HCT116中的ERCC1,探讨其对结肠癌铂类耐药细胞株增殖、凋亡的影响.方法 体外培养结肠癌奥沙利铂耐药细胞株HCT116/L-OHP并验证其耐药性;qRT-PCR和蛋白印迹技术检测细胞和组织中ERCC1表达量的变化;采用siRNA-NC和siRNA-ERCC1转染细胞,CCK-8法检测耐药细胞的增殖能力,流式细胞术检测耐药细胞的凋亡变化.结果 结肠癌耐药组织和人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP ERCC1的表达水平明显升高(P＜0.05);转染siRNA ERCC1后,HCT116/L-OHP细胞中的ERCC1 mRNA和蛋白水平明显降低(P＜0.05);奥沙利铂联合处理后,siRNA ERCC1转染使HCT116/L-OHP细胞的增殖活性下降、凋亡率升高.结论 siRNA能有效下调ERCC1基因表达,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡,增强奥沙利铂对耐药细胞株HCT116/L-OHP的杀伤作用.

目的 探讨环状RNA HIPK3(circHIPK3)在鼻咽癌(NPC)细胞迁移和侵袭中的作用及其分子机制.方法 检索公共数据库,运用高通量基因表达数据库(GEO)分析NPC组织及非癌组织中circHIPK3表达水平;合成cir-cHIPK3-siRNA转染NPC 5-8F细胞;采用RT-qPCR、Western blot、细胞划痕、CCK-8和Transwell等实验方法,研究确定circHIPK3-siRNA干扰效果后,检测它对细胞增殖、迁移和侵袭及潜在下游基因CDH1、CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3表达的影响.运用转录组测序技术分析5-8F细胞cir-cHIPK3-siRNA干扰后显著差异表达的基因,以期找到介导circHIPK3促癌作用的关键基因.结果 与非癌组织相比,NPC组织中circHIPK3表达明显增加(P<0.05).使用siR-NA特异性敲低5-8F细胞中circHIPK3的表达后,与对照组相比,si-circHIPK3组细胞增殖速率降低(P<0.05),si-cir-cHIPK3组细胞划痕闭合率降低(P<0.01),同时si-cir-cHIPK3组细胞迁移和侵袭的细胞数目减少(P<0.05).此外,与对照组相比,si-circHIPK3组下游基因CDH1 mRNA和蛋白的表达量升高(P<0.001),CDH2、MMP2、MMP9、IL-6/STAT3 mRNA和蛋白的表达量减少(P<0.05).进一步测序分析显示,circHIPK3-siRNA转染的5-8F细胞中AL645922.1、SCO2、AL136295.1和ISY1-RAB43表达上调(P<0.05),BIVM-ERCC5、FAM47E-STBD1、INO80B-WBP1、NAIP、C15orf38-AP3S2、BCL2L2-PABPN1和SMIM11B表达下调(P<0.05).结论 NPC组织中circHIPK3表达显著升高.circHIPK3通过调节E-Cadherin、N-Cadherin、MMP2、MMP9和IL-6/STAT3的表达,促进NPC细胞5-8F的增殖、迁移和侵袭.AL645922.1和BIVM-ERCC5等基因可能在circHIPK3介导的促进NPC 5-8F细胞迁移和侵袭中发挥关键作用.

该研究目的在于利用网络药理学方法探究黄芪-莪术药对治疗胃癌的作用机制,并通过胃癌细胞SGC7901 体外模型对黄芪-莪术的药效和关键靶点进行实验验证.首先,采用CCK-8法证明黄芪-莪术对胃癌细胞SGC7901 增殖的直接影响.然后,使用网络药理学的方法探究黄芪-莪术药对治疗胃癌的关键活性成分、关键靶点和关键信号通路.结果显示,黄芪-莪术药对包含 18 个潜在活性成分,例如槲皮素、山柰酚和姜黄素等.基因本体论功能富集及京都基因和基因组百科全书通路富集分析提示,黄芪-莪术药对治疗胃癌的主要靶点涉及蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性的调节、MAPK活性的激活、半胱氨酸型内肽酶活性和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性的负调节等.HIF-1信号通路、ABC转运蛋白、细胞色素P450 对异生素的代谢、p53 信号通路和细胞凋亡等信号通路是黄芪-莪术作用于胃癌的关键通路.随后,在体外实验中证明,黄芪-莪术药对能够显著下调多药耐药基因(ABCB1)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、低氧诱导因子-1(HIF1A)、B-细胞淋巴瘤因子2(BCL2)、乳腺癌易感基因 1(BRCA1)、DNA聚合酶θ(POLH)、核苷酸还原酶M1(RRM1)、切除修复交叉互补基因 1(ERCC1)的表达,并上调肿瘤蛋白p53(TP53)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(CAPS3)表达.最后,利用癌症基因组图谱计划(TCGA)数据库中的胃癌患者基因表达和临床信息数据,应用多变量COX回归模型证明了黄芪-莪术作用的关键靶点与胃癌患者不良预后的相关性,并通过LASSO算法进行特征选择.结果显示,EGFR、HIF1A、TP53、POLH、RRM1 和ERCC1 与胃癌患者的生存期密切相关.黄芪-莪术对上述多个靶点及通路的作用,通过影响胃癌细胞的DNA修复、生存和凋亡等相关基因的表达,从而在胃癌辅助治疗中发挥重要的作用.

目的:探讨减数分裂后分离蛋白 2(PMS2)表达对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响,阐明PMS2与切除修复交叉互补组1(ERCC1)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号转导通路的关系.方法:将PMS2 siRNA质粒和PMS2过表达质粒分别转染入结肠癌SW480细胞(分别为PMS2敲减组和PMS2 过表达组),同时设PMS2 敲减对照组(siRNA-NC组)和PMS2 过表达对照组(PMS2 control组).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中PMS2 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PMS2蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率.通过String数据库,对PMS2、ERCC1和ERK上下游蛋白的关系进行生物信息学分析.SW480细胞分别采用3条siRNA进行PMS2和ERCC1敲减,采用RT-qPCR法验证PMS2与ERCC1 的相互作用,采用Western blotting法检测各组细胞中PMS2、细胞外调节蛋白激酶 1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平.结果:RT-qPCR法和Western blotting法检测,PMS2基因敲减和过表达细胞模型构建成功.与siRNA-NC组比较,PMS2 敲减组细胞增殖活性和细胞迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),侵袭细胞数明显增加(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显降低(P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞增殖活性和细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显升高(P<0.01).蛋白-蛋白互作(PPI)富集P值为2.09e-07,包含ERCC1和ERK1/2等相互作用节点数共有13个,提示PMS2、ERCC1和ERK1/2之间可能存在调控作用.与siRNA-NC组比较,各PMS2敲减组细胞中ERCC1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05 或P<0.01);与siERCC1-NC组比较,各ERCC1敲减组细胞中PMS2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05).与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).结论:PMS2表达可影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力.PMS2与ERCC1存在互相作用关系,并可通过调节ERCC1参与ERK信号转导通路.

目的 探讨上皮性卵巢癌患者ERCC1基因多态性与TP化疗敏感性及预后的关系.方法 选择我院自2009年1月～2013年12月期间收治的370例上皮性卵巢癌患者作为研究对象,抽取其静脉血进行基因分型检测.根据患者FIGO分期情况进行合适的卵巢癌细胞减灭术,术后均进行TP方案化疗,探讨不同基因分型与TP化疗中铂类药物敏感性及预后的关系.结果 ERCCl rs11615多态的基因频率分布比例为:C/C型152(54.3％)例、T/T型25(8％)例、C/T型103(36.7％)例.ERCCl rs11615多态的C/C、T/T、C/T基因频率分布在TP化疗敏感组为54.2％、3.1％、42.7％,在TP化疗不敏感组为48.9％、18.2％、32.9％,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).ERCCl rs11615三种基因型患者平均PFS分别为19.67个月、9.26个月、21.33个月,平均OS分别为27.21个月、18.34个月、28.16个月,差异均有统计学意义(P<0.05).ERCCl rs11615三种基因型在复发组的分布频率分别为56.9％、6.4％、36.6％,未复发组分别为47.1％、1.2％、51.7％,差异有统计学意义(P<0.05).ERCCl rs11615三种基因型在生存组的分布频率分别为52.3％、8.7％、39.0％,在死亡组分别为54.8％、3.1％、42.1％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EOC患者中携带ERCCl基因T/T型和C/T型的患者对肿瘤细胞减灭术后TP化疗的敏感性较低,PFS也远低于C/C型患者.

全世界肺癌的发病率及病死率为恶性肿瘤的首位,且仍旧持续增加,严重威胁着人类生命安全.而非小细胞肺癌(NSCLC)患者占所有肺癌的80％以上,约85％的患者病情确诊时已处于中晚期,故铂类药物联合第三代标准化疗方案成为主要治疗措施[1-2].切除修复交叉互补基因2 (ERCC2)作为一种DNA解螺旋酶,为RNA聚合酶Ⅱ(TFⅡH)组分,参与碱基切除修复(BER)和核苷酸切除修复(NER)过程[3].而ERCC2基因的单核苷酸多态性(SNP)可抑制TFⅡH的活性,导致修复、转录缺陷异常,进而影响ERCC2蛋白表达及DNA损伤修复能力[4].人体内多种SNP决定对应修复酶的活性差异,故对DNA修复能力就表现出个体差异,影响患者对化疗药物敏感性[5].目前ERCC2基因的SNP研究热点主要集中在Asp312Asn、Lys751Gln.LI等[6]分析ERCC2基因多态性对长春瑞滨联合顺铂化疗敏感性,结果显示ERCC2 Lys751Gln基因型的化疗敏感性为Lys751Lys的0.4倍.金珊珊等[7]荟萃国内外文献资料,显示携带ERCC2 Asp312Asn/Lys751Gln基因肺癌患者敏感性较高.而PEREZ-RAMIREZ等[8]发现携带ERCC2 Asp312Asn/Lys751Gln基因与肺癌发病风险相关,且与患者种群、吸烟及危险环境有关.鉴于目前国内外晚期NSCLC患者的ERCC2与铂类药物化疗敏感性相关性的结论,本研究探讨它们之间调控机制,以期构建预测NSCLC铂类化疗药物疗效的基因组学体系,为指导临床晚期NSCLC患者铂类药物个体化治疗提供科学依据.

目的 探讨Cockayne综合征患儿的临床、影像学和ERCC8基因突变特征.方法 回顾分析1例经基因检测确诊的Cockayne综合征患儿的临床和影像学资料,应用目标序列捕获和第二代测序技术检测患儿相关基因,采用Sanger测序验证突变位点的结果,并对其父母、姐姐样本进行突变位点的序列分析.结果 女性患儿,7岁,主要临床表现为精神运动发育迟滞、生长发育障碍、特殊面容、光敏性皮炎、痉挛性瘫痪、小脑共济失调.头颅磁共振显示双侧半卵圆中心、脑室旁白质对称脱髓鞘改变,小脑萎缩.二代测序结果显示患儿ERCC8基因外显子区域两处杂合突变点c.397 C＞T和c.394_398del,分别引起氨基酸变化p.Q133X和p.L 132fs;Sanger测序结果显示2个突变分别来源于母亲和父亲,为复合杂合突变.c.394_398del位点为已报道致病突变,c.397C＞T为首次报道.结论 二代测序技术可准确检测Cockayne综合征的ERCC8基因突变.首次发现c.397C＞T突变位点,扩大了中国Cockayne综合征患者的基因突变谱.