目的:探讨严重烧伤小鼠肠-胰岛轴功能的变化及其作用。方法:该研究为实验研究。将90只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假伤组和烧伤组（每组45只小鼠），于烧伤组小鼠背部制备30%体表总面积Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）创面，假伤组小鼠模拟致假伤。伤后24 h，检测空腹血糖（样本数为12）后，行腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验，并绘制血糖浓度-时间变化曲线，计算曲线下面积（样本数为6）；分别于腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前及腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min从心脏取血，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血浆胰岛素和胰高血糖素样肽1（GLP-1）水平（样本数为3）；取每组3只小鼠回肠组织，行免疫荧光染色及原位末端标记染色检测肠道L细胞GLP-1表达及凋亡水平；提取每组6只小鼠胰岛行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验，分别经低糖（2.8 mmol/L葡萄糖）和高糖（16.7 mmol/L葡萄糖）孵育后取上清液，采用ELISA法检测胰岛素水平。取36只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为假伤组、烧伤组和烧伤+艾塞那肽4（Ex-4）组（每组12只小鼠），对假伤组和烧伤组小鼠行同前对应处理，将烧伤+Ex-4组小鼠同烧伤组小鼠致伤后给予其GLP-1受体激动剂Ex-4。伤后24 h，提取小鼠胰岛，采用蛋白质印迹法检测重链结合蛋白（BIP）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达并计算p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α比值（样本数为3），采用流式细胞术检测胰岛细胞凋亡率（样本数为3），同前行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验以检测上清液中胰岛素水平（样本数为6）。结果:伤后24 h，烧伤组小鼠空腹血糖为（7.3±1.0）mmol/L，显著高于假伤组的（5.1±0.6）mmol/L（ t=6.36， P<0.05）。伤后24 h，在腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验中，烧伤组小鼠血糖浓度-时间变化曲线下面积均显著大于假伤组（ t值分别为4.32、6.03， P<0.05）；与假伤组相比，烧伤组小鼠经腹腔注射给予葡萄糖溶液前血浆胰岛素水平及经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前血浆GLP-1水平均显著降低（ P<0.05），经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min血浆胰岛素水平及经灌胃给予葡萄糖溶液后30、60 min血浆GLP-1水平均显著降低（ P<0.05）。伤后24 h，与假伤组相比，烧伤组小鼠肠道L细胞GLP-1表达水平显著降低（ t=7.74， P<0.05），凋亡水平显著升高（ t=14.28， P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平为（8.5±0.4）ng/mg，显著低于假伤组的（15.7±0.3）ng/mg（ t=18.68， P<0.05）。伤后24 h，与假伤组相比，烧伤组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著升高（ P<0.05）；与烧伤组相比，烧伤+Ex-4组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著降低（ P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠胰岛细胞凋亡率为（32.0±3.0）%，显著高于假伤组的（10.3±2.5）%（ P<0.05）；烧伤+Ex-4组小鼠胰岛细胞凋亡率为（20.0±3.6）%，显著低于烧伤组（ P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著低于假伤组（ P<0.05），烧伤+Ex-4组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著高于烧伤组（ P<0.05）。 结论:严重烧伤后小鼠肠-胰岛轴功能障碍，肠道L细胞凋亡增多、GLP-1合成及分泌减少，胰岛细胞发生内质网应激、凋亡增多，葡萄糖刺激的胰岛素分泌减少；GLP-1受体激动剂Ex-4能保护严重烧伤小鼠胰岛细胞功能，可能通过减轻内质网应激降低胰岛细胞凋亡水平，促进胰岛素分泌。

目的:探讨胰高糖素样肽-1（GLP-1）对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）状态下生长分化因子15（GDF15）表达的影响。方法:共对25例NAFLD合并2型糖尿病患者26周不同药物治疗后（利拉鲁肽组9例、西格列汀组8例、甘精胰岛素组8例）进行分析。收集治疗前后体重、体重指数（BMI）及血清GDF15水平，通过磁共振成像-质子密度脂肪含量测量肝内脂肪含量（IHL）。8周龄雄性C57BL/6小鼠进行12周高脂饮食喂养，采用随机数字表法分为高脂饮食（HFD）组（6只）、艾塞那肽组（GLP-1组）（6只），另设正常饮食对照组（6只），干预8周后收取肝脏组织。HepG2细胞用300 μmol/L棕榈酸钠（PA）处理，并予Exendin-4（浓度分别为0、1、20、100 nmol/L）干预，另设脱脂牛血清白蛋白对照组。使用lentiCRISPRv2-sgRNA载体构建稳定敲除GDF15的HepG2细胞，空载体转染的HepG2细胞作为阴性对照。转染的细胞用300 μmol/L PA处理，并予100 nmol/L Exendin-4干预。测定血清及细胞上清中GDF15蛋白水平及肝脏组织和HepG2细胞的GDF15 mRNA水平与甘油三酯（TG）含量。采用单因素方差分析、协方差分析、Pearson相关分析等进行统计学分析。结果:在NAFLD合并糖尿病人群中，西格列汀组和甘精胰岛素组血清GDF15水平在治疗前后无明显变化。而利拉鲁肽组在26周后血清GDF15水平为（920.3±265.4）pg/ml，比治疗前的（742.2±279.0）pg/ml明显升高，差异有统计学意义（ P=0.015）；体重、BMI、IHL明显下降（ P均<0.05）。利拉鲁肽组血清GDF15改变量与IHL改变量呈负相关（ r=-0.676， P=0.045）。GLP-1显著改善高脂饮食喂养小鼠的肝脏脂质沉积及炎症状态。与HFD组相比，GLP-1组小鼠肝脏组织GDF15 mRNA明显升高。GLP-1能改善PA诱导的HepG2细胞脂质沉积，并以剂量依赖的方式上调GDF15的表达与分泌。与阴性对照组相比，敲除GDF15显著削弱了GLP-1改善细胞TG蓄积及炎症状态。 结论:GLP-1可促进肝脏GDF15的表达与分泌，并改善NAFLD肝脏脂质沉积及炎症状态。

神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasm，NEN)是起源于肽能神经元和神经内分泌细胞的一组异质性罕见肿瘤，胰腺是其常见的发病部位，近年来，胰腺神经内分泌肿瘤的发病率明显上升 [1,2]。胰岛素瘤是最常见的功能性胰腺神经内分泌肿瘤，占94.8% [2]。胰岛素瘤首选手术治疗，所以术前定位尤为重要。胰岛素瘤常为单发，且直径常较小，所以胰岛素瘤的定位较为困难。随着新的显像技术的出现，胰岛素瘤的诊断率较前明显提高。本文现报道1例长期漏诊的胰岛素瘤患者，胰岛素瘤被 68稼( 68Ga)标记的艾塞那肽(Exendin-4)正电子发射断层显像/X线计算机体层成像(PET/CT)及 68Ga-轮环藤宁-乙二胺四乙酸-奥曲肽(DOTATATE)PET/CT检查准确定位。

目的:评价胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)信号通路在七氟烷后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠80只，8~10周龄，体重300~340 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、心肌缺血再灌注+七氟烷后处理组(ISP组)、心肌缺血再灌注+七氟烷后处理+GLP-1R拮抗剂组(ISPE组)。采用结扎冠状动脉左前降支40 min、再灌注2 h的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。ISP组于再灌注即刻吸入2.4%七氟烷15 min；ISPE组于造模前28 d时开始，腹腔注射GLP-1R拮抗剂Exendin9-39 50 μg/kg(溶于1 ml 0.9%生理盐水中)，1次/d，并于吸入七氟烷前40 min时最后腹腔注射1次，其余处理同ISP组。再灌注结束即刻采集腹主动脉血样，检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平；然后处死大鼠取心脏，采用HE染色法于光镜下观察心肌组织病理学结果，透射电镜下观察心肌细胞超微结构；TTC染色法测定心肌梗死体积，免疫组化染色法检测心肌GLP-1R表达；Western blot法检测心肌GLP-1R、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)的表达，并计算p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值。 结果:与S组比较，I/R组血清CK-MB和LDH水平升高，心肌梗死体积百分比升高，心肌组织GLP-1R表达上调，cAMP和PKA表达下调，p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值降低( P<0.05)；与I/R组比较，ISP组血清CK-MB和LDH水平降低，心肌梗死体积百分比降低，心肌组织GLP-1R、cAMP和PKA表达上调，p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值升高( P<0.05)；与ISP组比较，ISPE组血清CK-MB和LDH水平升高，心肌梗死体积百分比升高，心肌组织GLP-1R、cAMP和PKA表达下调，p-CREB/CREB比值和Bcl-2/Bax比值降低( P<0.05)。 结论:七氟烷后处理可通过激活GLP-1R信号通路，抑制心肌细胞凋亡，减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。

目的 探究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂Exendin-4及内源性GLP-1对大鼠苍白球神经元自发放电活动的调控.方法 利用在体细胞外电生理记录法,在分别微压力注射浓度均为10 μmol/L的Exendin-4和GLP-1受体阻断剂Exendin-9-39后,观察二者对正常大鼠苍白球神经元自发放电活动的影响.结果 在记录到的16个正常大鼠苍白球神经元中,微压力注射Exendin-4可以显著增加其中11个神经元的自发放电频率(t=-4.729,P=0.001),与生理盐水对照组相比差异有显著性(Z=2.776,P＜0.01),且可以显著改变其放电模式(t=-3.136,P＜0.05),放电规律性降低.在记录到的9个正常大鼠苍白球神经元中,微压力注射Exendin-9-39可显著降低其中6个神经元的自发放电频率(t=6.374,P=0.001),与生理盐水对照组相比差异有显著性(Z=-2.739,P＜0.01),但不改变其放电模式.结论 Exendin-4可增加苍白球神经元自发放电频率并改变其放电模式,内源性GLP-1参与了苍白球神经元自发放电活动的调节.

目的 探讨胰高血糖素样肽 1(GLP-1)受体激动剂exendin-4 影响亲环蛋白A(CyPA)分泌抑制小鼠动脉粥样硬化(AS)及血管钙化过程的作用.方法 将 20 只ApoE-/-小鼠随机分为模型组和exendin-4 组,每组 10只,高脂饲料喂养建立AS模型,另取 10 只野生型C57BL/6J小鼠作为对照组,exendin-4 组腹腔注射GLP-1R激动剂exendin-4,1 次/d,持续 8 周.8 周后,ELISA法测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、CyPA表达水平,甲基麝香草酚蓝比色法检测血清钙水平,油红O染色检测主动脉粥样硬化斑块,HE染色观察主动脉病理学变化,Von Kossa染色观察主动脉钙盐沉积,免疫组织化学、Real-time PCR及Western blotting检测主动脉Runt相关转录因子 2(RUNX2)与骨形态发生蛋白 2(BMP-2)表达水平,免疫荧光染色检测主动脉CyPA表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C、Ca、CyPA水平升高(P<0.05),主动脉粥样硬化斑块面积均增加(P<0.05),主动脉壁明显增厚且出现大量炎性细胞浸润及钙盐沉积,主动脉组织RUNX2 与BMP-2的mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),主动脉组织内CyPA表达增强.与模型组比较,exendin-4组小鼠血清中TG、TC、LDL-C、Ca、CyPA水平降低(P<0.05),主动脉粥样硬化斑块面积均减少(P<0.05),主动脉壁增厚与炎性细胞浸润现象明显改善,钙盐沉积减少,主动脉组织RUNX2 与BMP-2 的 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05),同时,主动脉组织内CyPA表达减弱.结论 GLP-1 受体激动剂exendin-4 能够抑制小鼠动脉粥样硬化及血管钙化,其机制可能与减少CyPA的分泌相关.

目的 探讨Exendin-4 对兔自体游离脂肪移植保留率的影响.方法 自 2020年 9 月至 2022 年 3 月,哈尔滨医科大学附属第二医院整形美容科将兔随机均分为 3 组即对照组(生理盐水组)、实验组A(10 nmol/L Exendin-4)和实验组B(20 nmol/L Exendin-4),建立兔背部自体脂肪移植模型.分别在术后 2、4、12 周对移植物进行取材,观察移植物的大体保留情况,通过天平及排水法测定移植物的质量及体积.并对移植物行HE染色观察组织纤维化、炎症浸润、细胞完整性等情况;CD31 免疫组织化学染色,观察移植物的血管生成情况.结果 实验组A与实验组B的脂肪移植物的质量和体积明显高于对照组(P<0.05).在不同时间点,与对照组相比,实验组A与实验组B脂肪移植物具有较少的纤维结缔组织、炎症细胞的浸润及空泡出现情况均较少(P<0.05).随着实验时间的不断延长,各组移植物的血管密度均有所增加.在各时间点实验组A与实验组B均较对照组具有更好的血管生成情况(P<0.05).与实验组A比较,实验组B具有更好的移植物体积保留率以及更好的脂肪细胞完整性,血管的生成情况也更佳.结论 Exendin-4 可通过减轻移植脂肪组织的炎症浸润、减少移植物的纤维化程度、减少囊泡的形成以及促进移植物血管生成提高脂肪移植物的体积保留率.

目的:探讨胰高血糖素样肽 1 受体(GLP-1R)激动剂Exendin-4(E4)对高糖高脂(HGHL)环境下心肌细胞损伤的影响,阐明其相关机制.方法:大鼠心肌H9C2细胞分为对照组、HGHL组、HGHL+E4组和HGHL+E4+铁死亡激活剂(Erastin)组,H9C2细胞采用33 mmol·L-1葡萄糖和 500 μmol·L-1 棕榈酸脂诱导HGHL模型,HGHL+E4组和HGHL+E4+Erastin组H9C2细胞在诱导形成HGHL细胞模型后分别采用100 nmol·L-1 E4和5 μmol·L-1 Erastin进行处理,CCK-8法检测各组细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色法观察各组细胞凋亡情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,2',7'-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,JC-1 染色法检测各组细胞中线粒体膜电位(MMP)水平,FerroOrange荧光探针检测各组细胞中铁离子(Fe2+)水平,Western blotting法检测各组细胞中谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)和溶质载体家族 7 成员 11(SLC7A11)蛋白表达水平.结果:与对照组比较,HGHL组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞出现碎裂和皱缩,呈典型凋亡表现,细胞凋亡率及细胞中ROS和MDA水平明显升高(P<0.05),细胞中GSH和MMP水平明显降低(P<0.05),Fe2+水平明显升高(P<0.05),GPX4和SLC7A11蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与HGHL组比较,HGHL+E4 组细胞存活率明显升高(P<0.05),凋亡细胞减少,细胞凋亡率及细胞中ROS和MDA水平明显降低(P<0.05),细胞中GSH和MMP水平明显升高(P<0.05),Fe2+水平明显降低(P<0.05),GPX4和SLC7A11蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与 HGHL+E4 组比较,HGHL+E4+Erastin组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞碎裂和皱缩现象明显减轻,细胞凋亡率及细胞中ROS和MDA水平明显升高(P<0.05),细胞中GSH和MMP水平明显降低(P<0.05),Fe2+水平明显升高(P<0.05),GPX4和SLC7A11蛋白表达水平明显降低(P<0.05).结论:GLP-1R激动剂能够减轻HGHL环境下心肌细胞损伤,其保护作用可能与其抑制铁死亡有关.

目的 合成具有全新肽序的新型胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂非洲爪蟾GLP-1并对其(XenGLP-1)进行长效化修饰.方法 先通过在其C端引入PSSGAPPPS序列以增加其降糖活性,再在XenGLP-1序列上引入半胱氨酸,进一步利用MAL-PEG2000与其进行缀合.结果 合成得到PEG2000-ZF-1和PEG2000-ZF-22个缀合肽,并对缀合肽进行长效化降糖活性研究.结论 2个PEG化缀合肽具有长效的降糖活性,具有很好的药物开发前景.

目的:研究Exendin-4调控胰岛 β 细胞瘤INS-1细胞增殖的机制.方法:使用Exendin-4刺激INS-1细胞,通过EdU标记染色法检测INS-1细胞增殖率变化,并采用实时半定量PCR法和蛋白质印迹法检测INS-1细胞Wnt5a基因和蛋白的表达.siRNA瞬时转染沉默INS-1细胞Wnt5a基因,通过EdU标记观察细胞增殖率变化.重组Wnt5a蛋白与Exendin-4共刺激INS-1后EdU标记观察细胞增殖率变化.结果:Wnt5a在INS-1细胞中基础表达丰度高,Exendin-4显著降低INS-1细胞Wnt5a基因mRNA及蛋白表达水平.siRNA-Wnt5a瞬时转染降低INS-1细胞增殖率.重组Wnt5a蛋白呈浓度依赖性拮抗Exendin-4对INS-1细胞的促增殖效应.结论:Exendin-4通过下调Wnt5a基因表达促进INS-1细胞增殖.