目的:探讨凋亡通路相关基因的遗传变异与直肠癌患者术后同步放化疗不良反应的关系。方法:选择362例接受术后同步放化疗的Ⅱ～Ⅲ期直肠癌患者，同步放化疗前抽取静脉血，采用Sequenom MassARRAY检测凋亡通路中的Fas细胞表面死亡受体(FAS)、Fas配体(FASL)、凋亡蛋白活性因子1(APAF1)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(TRAILR1)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAILR2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7(CASP7)基因共29个标签单核苷酸多态位点(htSNP)的基因型，分析基因型与放化疗不良反应之间的关系。基因型与放化疗不良反应的关联分析采用非条件Logistic回归模型。结果:362例患者接受全直肠系膜切除手术后，行照射总剂量为50 Gy、化疗方案为卡培他滨单药的同步放化疗。106例(29.3%)发生≥2级骨髓抑制，FAS rs1468063 ( OR＝1.51，95% CI为1.07～2.15， P＝0.020)、APAF1 rs11296996( OR＝0.69，95% CI为0.49～0.98， P＝0.039)、BAX rs4645904( OR＝0.69，95% CI为0.50～0.97， P＝0.030)与该不良反应发生有关。161例(44.5%)患者发生≥2级的腹泻，APAF1 rs11296996( OR＝1.42，95% CI为1.02～2.00， P＝0.040)和rs74619561( OR＝2.16，95% CI为1.27～3.68， P＝0.005)、CASP7 rs12263370( OR＝1.67，95% CI为1.05～2.66， P＝0.029)和rs12247479( OR＝1.85，95% CI为1.12～3.08， P＝0.017)、TRAIL rs112822654 ( OR＝0.68，95% CI为0.48～0.96， P＝0.027)与该不良反应发生有关。其余位点与直肠癌放化疗不良反应的发生无关(均 P>0.05)。直肠癌患者的性别与中重度骨髓抑制的发生有关( P＝0.046)；手术方式、病灶距齿状线距离与中重度腹泻的发生有关(均 P<0.001)，也与中重度放射性皮炎的发生有关(均 P<0.05)。 结论:凋亡通路相关基因FAS、APAF1、BAX、TRAIL和CASP7遗传变异与直肠癌患者接受术后同步放化疗不良反应的发生有关，可能作为直肠癌个体化治疗的潜在遗传生物标志物。

目的:探讨急性期川崎病(Kawasaki disease，KD)患儿CD8 +CD28 －调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)改变及其在KD免疫发病机制中的作用。 方法:研究对象为2019年6月—2021年12月收治的48例KD患儿，分别于急性期及静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin，IVIG)治疗后取血备检，对照组为32例同龄健康儿童。流式细胞术检测外周静脉血CD8 +CD28 －Treg细胞比例及程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1，PD-1)、凋亡相关因子配体(factor associated suicide ligand，FasL)、可诱导共刺激分子配体(inducible T-cell co-stimulator ligand，ICOSL)、CD80、CD86蛋白表达水平；荧光定量PCR分析转录因子Helios、穿孔素、颗粒酶B、免疫球蛋白样转录物3(immunoglobulin-like transcript 3，ILT3)和ILT4 mRNA表达水平；ELISA检测细胞培养上清中IL-10和TGF-β1蛋白浓度。 结果:(1)急性期KD患儿CD8 +CD28 －Treg细胞比例及Helios表达明显高于对照组( P<0.05)，但合并冠状动脉损伤组(coronary artery lesion，CAL)前述2项指标低于未合并冠状动脉损伤组(non-coronary artery lesion，NCAL)，差异有统计学意义( P<0.05)。经IVIG治疗后，KD患儿CD8 +CD28 －Treg细胞比例及Helios表达明显降低( P<0.05)。(2)急性期KD患儿CD8 +CD28 －Treg细胞FasL、PD-1、ICOSL和穿孔素表达均高于对照组( P<0.05)，经活化的CD4 +T细胞刺激后CD8 +CD28 －Treg细胞培养上清中IL-10和TGF-β蛋白浓度低于对照组( P<0.05)，其中CAL组患儿前述6项指标均低于NCAL组( P<0.05)。经IVIG治疗后，KD患儿前述指标均呈不同程度恢复( P<0.05)。各组间颗粒酶B表达虽略有差异，但差异无统计学意义( P>0.05)。(3)急性期KD患儿CD14 +细胞表面过度表达CD80和CD86等共刺激分子( P<0.05)，抑制性分子ILT3和ILT4表达亦高于对照组( P<0.05)；CAL组患儿CD14 +细胞表面CD80和CD86蛋白水平高于NCAL组( P<0.05)，而ILT3、ILT4表达低于NCAL组( P<0.05)。经IVIG治疗后，KD患儿前述指标均明显恢复( P<0.05)。 结论:CD8 +CD28 －Treg细胞相对不足及功能障碍可能是导致KD患儿免疫功能异常活化及血管损伤的重要因素之一。

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植修复大鼠脊髓损伤过程中外源性和内源性凋亡通路的作用。方法:分离并扩增SD大鼠的BMSCs,以携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的腺病毒转染BMSCs。采用Allen法构建脊髓损伤大鼠模型，并将30只脊髓损伤SD大鼠按照随机数字表法分为两组，每组15只。实验组：将携带GFP基因的BMSCs注入大鼠脊髓损伤区域附近。对照组：以无菌生理盐水注射于大鼠脊髓损伤区域附近。BMSCs移植1，2，3周后通过荧光显微镜观察携带GFP基因BMSCs的增殖情况，通过BBB评分观察大鼠行为能力变化，并采用TUNEL法观察脊髓损伤区域神经元凋亡状况。RT-PCR对B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、CD95特异性配体(FasL)、天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)基因的表达进行分析。Western blot检测caspase-8蛋白的表达情况。结果:携带GFP基因的BMSCs在脊髓损伤区域增殖。实验组BBB评分第2，3周时分别为(9.3±1.2)分、(12.5±2.2)分，较对照组高[分别为(5.2±1.1)分、(5.6±1.1)分]( P<0.05或0.01)；实验组1，2，3周的BBB评分逐渐升高( P<0.01)。实验组凋亡神经元数目在第2，3周时分别为(23.9±1.7)个、(10.5±1.9)个，均显著低于对照组[分别为(40.3±2.0)个、(37.2±2.6)个]( P<0.01)；实验组凋亡神经元在1，2，3周逐渐减少( P<0.01)。RT-PCR结果表明，实验组在第2，3周时Bcl-2的表达水平分别为0.50±0.02、0.71±0.04，均显著高于对照组(分别为0.23±0.02、0.21±0.01)( P<0.01)；实验组Bcl-2的表达水平在第1，2，3周逐渐升高( P<0.01)。实验组第2，3周时Bax的表达水平分别为0.31±0.02、0.33±0.03，低于对照组(分别为0.52±0.06、0.78±0.04)( P<0.05或0.01)；实验组Bax的表达在第1，2，3周差异无统计学意义( P>0.05)，对照组第1，2，3周的Bax的表达水平逐渐升高( P<0.05)。实验组第2，3周Bcl-2/Bax的比值分别为1.62±0.06、2.16±0.27，显著高于对照组(分别为0.44±0.03、0.28±0.02)( P<0.01)。实验组第2，3周FasL的表达水平分别为0.42±0.04、0.27±0.02，低于对照组(分别为0.62±0.04、0.60±0.04)( P<0.05)；实验组第1，2，3周FasL的表达水平逐渐降低( P<0.05)。实验组第2，3周时caspase-8基因的表达水平分别为0.38±0.01、0.16±0.02，低于对照组(分别为0.57±0.02、0.28±0.02)( P<0.05或0.01)。Western blot结果表明，实验组第2，3周时caspase-8蛋白的表达水平分别为0.28±0.06、0.26±0.05，低于对照组(分别为0.47±0.08、0.86±0.09)( P<0.05或0.01)；实验组caspase-8蛋白的表达在第1，2，3周差异无统计学意义( P>0.05)，对照组caspase-8蛋白的表达在1，2，3周逐渐升高( P<0.01)。 结论:BMSCs移植至脊髓损伤区后可显著改善脊髓损伤大鼠的行为能力，而这与其增强受损脊髓组织Bcl-2的表达，下调Bax、FasL、caspase-8的表达，抑制外源性和内源性凋亡程序从而减少神经凋亡有关。

急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是危重患者呼吸衰竭的常见原因，全世界重症监护病房患者中约10%会发生ARDS。尽管目前有所改善，但仍缺乏明确有效的治疗方案，死亡率依然高达30%～40%。ALI/ARDS是由炎症细胞浸润导致严重的肺泡上皮和肺泡毛细血管膜损伤、血管通透性增加、肺间质/肺泡水肿的急性炎症性过程。ARDS的病理生理学涉及多种机制，包括炎症细胞浸润、氧化应激、肺泡毛细血管屏障破坏/通透性改变、细胞凋亡和组织纤维化，涉及到MAPK、NF-κB、AMPK/SIRT1、PI3K/Akt、Nrf2/HO-1、Fas/FasL、Wnt/β-catenin、Notch等多种分子信号通路的激活。本文将对ALI发生、发展以及治疗相关分子机制的研究进展进行综述，为后续的临床与基础研究提供一定的参考。

目的:探讨生殖细胞特异基因-2(GSG2)基因在神经胶质瘤中的作用。方法:通过慢病毒敲除GSG2的U87细胞系构建裸鼠成瘤模型。随后进行瘤体体积、重量测量和动物活体成像分析，并应用蛋白芯片技术探讨下游分子机制。采用非配对 t检验或 χ2检验来计算两组之间的差异。 结果:GSG2敲低后1个月裸鼠瘤体明显减小[敲低(KD)组：(109.42±209.94) mm 3，对照(NC)组：(1 070.00±410.28) mm 3， P<0.05]，凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(FasL)、p27、p53、SMAC的表达水平显著上调( P<0.05)，SMAC蛋白激活最为明显。 结论:GSG2在体内促进神经胶质瘤细胞凋亡，并降低胶质瘤增殖。

目的:探讨老年皮肤癌患者血清可溶性Fas、FasL水平及临床意义。方法:选择浙江省诸暨市人民医院和浙江省人民医院2014年1月至2017年12月住院手术治疗的老年皮肤癌患者82例作为皮肤癌组，选择同期健康体检老年人82例作为对照组。采用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）测定两组血清sFas、sFasL水平，并进行比较。结果:皮肤癌组血清sFas、sFasL水平均高于对照组[（21.06 ± 3.23）μg/L比（5.64 ± 1.18）μg/L、（14.52 ± 3.42）μg/L比（3.27 ± 0.96）μg/L]，差异有统计学意义（ t=40.606、28.679， P<0.05）。皮肤癌患者血清sFas、sFasL水平与病理分级和淋巴结转移关系密切，病理分级Ⅲ~Ⅳ级患者血清sFas、sFasL水平高于Ⅰ~Ⅱ级患者[（23.57 ± 3.16）μg/L比（16.35 ± 3.62）μg/L、（17.16 ± 3.29）μg/L比（12.15 ± 3.58）μg/L]，差异有统计学意义（ t=8.931、6.173， P<0.05）；有淋巴结转移患者血清sFas、sFasL水平高于无淋巴结转移患者[（24.09 ± 3.46）μg/L比（14.37 ± 3.19）μg/L、（18.17 ± 3.64）μg/L比（11.02 ± 3.27）μg/L]，差异有统计学意义（ t=13.124、9.306， P<0.05）；皮肤癌患者血清sFas、sFasL水平与年龄、性别、部位、类型无关（ P>0.05）。皮肤癌患者治疗后血清sFas、sFasL水平低于治疗前[（7.94 ± 1.21）μg/L比（21.06 ± 3.23）μg/L、（5.38 ± 1.02）μg/L比（14.52 ± 3.42）μg/L]，差异有统计学意义（ t=34.445、23.191， P<0.05）。 结论:老年皮肤癌患者血清sFas、sFasL水平升高，血清sFas、sFasL水平与老年皮肤癌患者的病理分级、淋巴结转移关系密切，可评估临床疗效。

目的:观察前列腺癌（PCa）患者CD8 + T细胞中Notch受体的表达，分析Notch信号通路对PCa患者CD8 + T细胞功能的影响。 方法:收集2017年11月至2018年6月在山西省人民医院就诊的PCa患者45例、无菌性前列腺炎患者41例和健康对照者30名。分选外周血CD8 +T细胞，反转录实时定量PCR法检测CD8 + T细胞中Notch1~4 mRNA相对表达量。使用Notch信号通路抑制剂γ-分泌素抑制剂（GSI）刺激CD8 + T细胞，反转录实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA相对表达量变化，流式细胞术检测抗程序性死亡分子（PD）-1和CTLA-4阳性细胞比例变化。建立CD8 + T细胞与PCa细胞系LAPC4细胞的直接接触和间接接触培养体系，通过检测靶细胞的死亡比例和细胞因子分泌评估抑制Notch信号通路对CD8 +T细胞的杀伤功能的影响。组间比较采用单因素方差分析、LSD- t检验或配对 t检验。 结果:PCa患者CD8 +T细胞中Notch1~4 mRNA相对表达量（5.22±1.04、2.79±0.91、9.74±3.38、1.63±0.82）显著高于健康对照者（0.87±0.17、1.03±0.17、1.24±0.21、1.26±0.08）和无菌性前列腺炎患者（0.87±0.15、1.05±0.14、1.27±0.19、1.26±0.16）（均 P<0.05）。PCa患者CD8 +T细胞存在功能衰竭，主要表现为穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA相对表达量降低（均 P<0.000 1），PD-1：19.3%±5.4%和CTLA-4：11.7%±3.9%阳性细胞比例升高，直接接触共培养体系中PCa患者CD8 +T细胞诱导LAPC4细胞死亡比例下降（28.8%±6.4%比37.2%±2.6%， P=0.015），γ干扰素（IFN）-γ分泌水平降低[（61.7±10.6）ng/L比（88.6±20.2）ng/L， P=0.003 2]。使用GSI抑制Notch信号通路可增强PCa患者CD8 +T细胞中穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA相对表达量（均 P<0.01），PD-1 +CD8 +T细胞和CTLA-4 +CD8 +T细胞的比例降低。抑制Notch信号通路可增强直接接触共培养体系中PCa患者CD8 +T细胞诱导LAPC4细胞死亡比例（34.3%±7.2%， P=0.000 2），IFN-γ分泌水平亦升高[（88.4±33.6）ng/L， P=0.008 3]。 结论:PCa患者Notch受体表达升高诱导CD8 +T细胞功能衰竭。

目的:观察并分析泛素编辑蛋白A20对呼吸机相关性肺炎（ventilator associated pneumonia, VAP）患者单核细胞活性的影响。方法:入选2019年2月至9月在郑州大学第一附属医院诊断为VAP的患者24例（VAP组）和健康对照12例（对照组）。分离VAP组外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）、感染部位和非感染部位的支气管肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid, BALF）及对照组PBMCs，检测CD14 +单核细胞中A20水平。纯化VAP患者CD14 +单核细胞和CD4 +T细胞，使用A20 siRNA转染CD14 +单核细胞。转染的CD14 +单核细胞与自体CD4 +T细胞直接/间接接触共培养，检测CD4 +T细胞分泌干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）和白细胞介素-17（interleukin-17, IL-17）水平。转染的CD14 +单核与NCI-H889细胞直接/间接共培养，检测细胞毒性、分泌细胞因子、颗粒酶B水平及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL）、FasL配体（Fas ligand, FasL）水平。组间比较采用成组 t检验或SNK- q检验。 结果:VAP组外周血CD14 +A20 +细胞比例高于对照组[（62.61±15.33）% vs. （47.13±11.82）， P<0.05]，A20平均荧光强度（mean fluorescence intensity, MFI）亦高于对照组[（227.9±64.18） vs.（178.2±58.62）， P<0.05]。VAP组感染部位BALF中的CD14 +A20 +细胞比例高于未感染部位[（66.14±19.62）% vs. （52.52±13.71）%， P<0.05]，A20 MFI亦高于未感染部位[（268.0±72.56) vs. (197.4±60.01)， P<0.05]。A20 siRNA转染的VAP患者外周血和BALF中的CD14 +单核细胞与自体CD4 +T细胞直接接触共培养后，CD4 +T细胞分泌IFN-γ和IL-17的细胞比例均高于未转染和siRNA转染（ P<0.05），但间接接触共培养中，CD4 +IFN-γ +和CD4 +IL-17 +细胞比例在未转染、对照siRNA转染和A20 siRNA转染中的差异无统计学意义（ P>0.05）。A20 siRNA转染的VAP患者外周血和BALF中的CD14 +单核细胞与NCI-H889细胞直接/间接接触共培养后，靶细胞死亡比例均高于未转染和siRNA转染（ P<0.05），肿瘤坏死因子-α、IL-6、颗粒酶B水平及TRAIL MFI亦高于未转染和siRNA转染（ P<0.05），但靶细胞死亡比例在直接接触和间接接触共培养之间的差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:VAP患者单核细胞中A20水平升高，可能发挥抑制单核细胞活性的作用。

目的:探讨微小RNA-19a（miR-19a）通过调控第一凋亡信号/第一凋亡信号配体（Fas/FasL）通路对骨关节炎（OA）软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养人正常软骨细胞及OA软骨细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞中miR-19a表达。将OA软骨细胞分为对照组、miR-19a阴性对照（NC）组、miR-19a模拟物（mimics）组、miR-19a mimics＋空载质粒（pcDNA）组和miR-19a mimics＋Fas过表达质粒（Fas）组。RT-qPCR法检测各组细胞miR-19a、第一凋亡信号（Fas）、Fas配体（FasL）的mRNA表达；噻唑蓝（MTT）法检测各组OA软骨细胞增殖；流式细胞术分析细胞凋亡；免疫印迹法测定增殖、凋亡相关蛋白及Fas、FasL蛋白表达；双荧光素酶实验测定miR-19a与Fas的相互作用，以 t检验和单因素方差分析（ANOVA）进行组间比较。 结果:OA软骨细胞组miR-19a的表达水平显著低于正常软骨细胞组（0.45±0.06比1.01±0.19， t＝2.95， P<0.05）。增加miR-19a表达的miR-19a mimics组Fas和FasL表达显著低于miR-19a NC组（Fas：0.31±0.05比0.93±0.09， t＝15.78， P<0.05；FasL：0.37±0.04比0.87±0.10， t＝11.43， P<0.05），miR-19a mimics组细胞增殖显著高于miR-19a NC组（ A值：0.66±0.07比0.45±0.05， t＝8.70， P<0.05），miR-19a mimics组细胞凋亡率显著低于miR-19a NC组[（8.57±1.65）%比（22.45±2.66）%， t＝12.02， P<0.05]。 结论:miR-19a可通过靶向抑制Fas/FasL信号通路，促进OA软骨细胞增殖，抑制细胞凋亡。

目的:探究miR-125b在凋亡相关蛋白(Fas)/凋亡相关蛋白配体(FasL)信号介导胃癌细胞生长中的调控作用。方法:体外培养胃癌SGC-7901细胞，将miR-125b inhibitor序列、NC序列、转染试剂分别转染至SGC-7901细胞中，分为miR-125b抑制组、NC组、Control组。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测转染后细胞miR-125b表达，CCK-8法检测细胞增殖情况；平板细胞克隆形成实验检测菌落形成情况；流式细胞术检测细胞凋亡以及周期情况；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Fas、FasL的蛋白表达；荧光素酶活性测定检测miR-125b对Fas的靶向调控作用。结果:miR-125b抑制组细胞miR-125b表达水平及细胞菌落形成数量显著低于Control组、NC组，细胞增殖抑制率、凋亡率显著高于Control组、NC组(均 P<0.05)。miR-125b抑制组G 1期DNA含量显著高于Control组、NC组，S期细胞DNA含量显著低于Control组、NC组(均 P<0.05)。miR-125b抑制组Fas、FasL蛋白表达显著高于Control组、NC组(均 P<0.05)。Fas mRNA的3′-UTR中存在miR-125b的靶位点，与NC+Fas 3′UTR-Wt组相比，miR-125b抑制组+Fas 3′-UTR-Wt组荧光素酶活性显著降低( P<0.05)。 结论:抑制miR-125b表达后可激活Fas/FasL信号进而抑制SGC-7901细胞增殖，引起细胞周期G 1期阻滞，促进其凋亡。