目的:探讨生殖细胞特异基因-2(GSG2)基因在神经胶质瘤中的作用。方法:通过慢病毒敲除GSG2的U87细胞系构建裸鼠成瘤模型。随后进行瘤体体积、重量测量和动物活体成像分析，并应用蛋白芯片技术探讨下游分子机制。采用非配对 t检验或 χ2检验来计算两组之间的差异。 结果:GSG2敲低后1个月裸鼠瘤体明显减小[敲低(KD)组：(109.42±209.94) mm 3，对照(NC)组：(1 070.00±410.28) mm 3， P<0.05]，凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(FasL)、p27、p53、SMAC的表达水平显著上调( P<0.05)，SMAC蛋白激活最为明显。 结论:GSG2在体内促进神经胶质瘤细胞凋亡，并降低胶质瘤增殖。

目的:探讨 SMARCA2基因变异致Nicolaides-Baraitser综合征（NCBRS）的临床及基因变异特点。 方法:回顾性分析成都市妇女儿童中心医院2022年6月收治的1例确诊为NCBRS患儿的临床资料及基因结果；以“SMARCA2”和“Nicolaides-Baraitser综合征”或“Nicolaides-Baraitser Syndrome”为关键词，分别检索中国知网、万方数据库、PubMed、EmBase和Web of Science数据库（检索时限建库至2023年1月），分析 SMARCA2基因变异致NCBRS中国患儿的临床特点及基因特征。 结果:患儿，男，12月龄时以睡眠中发热惊厥起病，之后出现反复发热或无热惊厥，伴生长受限、发育迟缓，随着年龄增长，逐渐显现典型面部及手足特征，全外显子组测序示 SMARCA2基因c.2564G>A新生错义变异。文献检索截至2023年1月，有6篇中国人群 SMARCA2基因变异致NCBRS的报道6例，加上本例，共7例进行总结。男女比例为6:1。患儿均有不同程度神经发育障碍，语言受累明显。5例患儿有特殊面容，主要包括头发稀疏、头围小、人中宽且长、上唇薄、三角脸和掌指（趾）关节突出。5例以惊厥为首发症状，起病年龄1~2岁，发作形式多样，多种抗癫痫发作药物疗效不佳。视频脑电图和MRI均无特征性表现。7例患儿 SMARCA2基因变异位点分别为c.553C>G、c.2002G＞T、c.2564G>A、c.3293G＞A、c.3593T＞G、c.3592G＞A和c.3313C>T，均为常染色体显性遗传；5例患儿为新生变异，父系生殖细胞嵌合和母系体细胞嵌合各1例。 结论:NCBRS患儿存在不同程度的神经发育障碍，伴反复癫痫发作及特征性面部表现，全外显子组基因测序有助于早期诊断。该病缺乏特异性治疗，规律随访、定期评估尤为重要，及时干预智力、语言、行为以及癫痫发作等问题有助于提高患儿生存质量。

目的:探究沉默信息调节因子1(SIRT1)在小鼠生殖细胞发育中的功能。方法:利用Cre-LoxP系统构建SIRT1雄性生殖细胞特异性敲除小鼠模型，所有小鼠均为C57BL/6背景。提取对照组(Con)小鼠和SIRT1雄性生殖细胞特异性敲除(cKO)小鼠睾丸总RNA，进行转录组测序分析。两组间比较采用 t检验。 结果:cKO小鼠睾丸组织SIRT1信使RNA水平(0.14±0.04)低于Con组(1.32±0.09)，差异有统计学意义( t＝26.144， P<0.01)。cKO小鼠睾丸组织SIRT1蛋白水平(0.28±0.05)低于Con组(1.01±0.06)，差异有统计学意义( t＝19.705， P<0.01)。转录组测序筛选出差异表达基因3 816个，基因本体(GO)功能富集分析显示，差异表达基因显著富集于转录调控、精子发生及精子活力等生物学功能；京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示，差异表达基因主要涉及信号通路包括细胞因子-细胞因子受体相互作用、转化生长因子-β(TGF-β)信号通路、补体等。 结论:雄性生殖细胞特异性SIRT1敲除，导致小鼠睾丸中与精子发生、精子活力及转录调控相关关键基因表达发生变化，影响小鼠生育力。

目的:分析生殖细胞特异基因-2(GSG2)在肺癌组织的预后意义，探讨其mRNA的表达水平与患者常见肺癌临床病理学特点的相关性。方法:在线生存信息分析网站中研究肺癌组织中的GSG2的mRNA水平对肺癌患者生存的影响。收集苏州大学附属第一医院2018年1月到2019年2月间胸外科的15例肺癌患者手术切除后的新鲜冰冻标本，应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析肺癌组织和正常肺组织的GSG2的表达；扩大样本量后，在86例肺癌患者中，分析GSG2的表达水平和肺癌临床病理学特点的关系。肺癌癌组织和正常组织的GSG2表达差异采用配对 t检验，GSG2的mRNA表达量和肺癌常见临床病理学特征的相关性采用Fisher’s确切概率法或者检验分析。 结果:GSG2高表达的肺癌人群的总生存期(OS)在总体人群、腺癌患者、女性患者、男性患者和吸烟者中明显低于GSG2低表达者( P<0.05)；GSG2高表达的肺癌人群的首次进展生存(FP)在总体人群、男性和吸烟者中显著低于GSG2低表达组( P<0.05)；在肺癌新鲜冰冻组织中的GSG2的表达水平显著高于正常肺组织(2.15±0.34比1.00±0.12， P<0.05)；肺癌中GSG2的表达水平与肺癌的淋巴结分期呈明显正相关( P<0.05)，较高的GSG2表达水平提示较多的淋巴结转移。 结论:较高的GSG2提示肺癌患者较差的预后，同时GSG2在肺癌组中显著高表达，与肺癌淋巴结转移明显相关。

为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8.通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50％的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含有生殖细胞的性索结构;qRT-PCR和免疫荧光结果显示雌性特异性基因Foxl2和Cyp19a1表达量显著降低,而调控睾丸发育的Dmrt1、Sox9和Amh基因表达上调.实验结果表明Sox8的过表达诱导ZW胚胎性腺往雄性方向分化,揭示了Sox8在中华鳖睾丸分化过程中的作用.

目的:验证程序性细胞死亡因子4 (programmed cell death 4,PDCD4)在小鼠雄性生殖细胞中的表达.方法:RT-PCR检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸的基因表达情况;Western blot法检测PDCD4在不同周龄小鼠睾丸中蛋白表达水平;免疫荧光法检测PDCD4在雄性生殖嵴以及在不同周龄小鼠睾丸的定位情况.结果:RT-PCR和Western blot结果均显示PDCD4在0周龄小鼠睾丸中开始有表达,并持续表达至成年;免疫荧光显示PDCD4在胚胎期雄性小鼠生殖细胞中也有表达;在出生后0周和1周龄小鼠睾丸中,PDCD4特异表达于精原细胞;在2周龄小鼠睾丸中,PDCD4分布于精原细胞和精母细胞;而在3、4和5周龄小鼠睾丸组织中,PDCD4主要分布于精原细胞、精母细胞与圆形精子细胞.结论:PDCD4分布于胚胎期和出生后各阶段生精细胞,这为进一步研究PDCD4在精子发生中的作用打下基础.

目的 探索卵巢早衰患者来源的诱导多能干细胞(POF-iPSC)分化为单倍体细胞的可能.方法 以卵巢早衰患者外周血单个核细胞进行核转染自行建系POF-iPSC,培养基中添加激活素A、糖原合酶激酶-3抑制剂CHIR-99021共2 d,随后添加骨形态生成蛋白4及表皮生长因子5 d,再添加视黄酸7 d,设基线(D0)、培养7 d(D7)、培养14 d(D14)组及无诱导的对照组.应用实时定量PCR及免疫荧光染色分别检测原始生殖细胞或减数分裂相关基因的mRNA及蛋白表达水平;荧光原位杂交技术(FISH)检测细胞内X染色体单体;流式细胞仪检测单倍体细胞比例.结果 POF-iPSC在诱导过程中,D0组细胞形态为长梭形纤维样,D7组细胞体积变大,但胞质稀薄,具有多个触角,D14组细胞核及核仁变得明显.在mRNA相对表达水平上,NANOG随分化而下降,BLIMP1逐步上升,STELLA、OCT4、DDX4、γH2AX、MLH1于D7组最高,DAZL、SYCP3、PRDM9于D7组及D14组逐步提高(P均<0.01).在蛋白表达上,D0组细胞中DAZL、PRDM9、SCP3蛋白均呈阴性表达,D7组细胞中DAZL及PRDM9蛋白呈阳性表达,D14组细胞中DAZL、PRDM9、SCP3蛋白均呈阳性表达.针对X染色体着丝粒的FISH检测显示,对照组细胞中均未见单个X染色体显色的细胞;D14组的部分细胞核中有单个X染色体显色,提示其单倍体的可能.D0组、D7组、D14组及对照组细胞中均可见发生分裂状态的染色体.其中D14组单倍体细胞比例高于D0组、D7组及对照组(P均<0.01).结论 POF-iPSC体外培养后能分化为类原始生殖细胞,部分细胞可完成减数分裂为单倍体细胞.

目的:多囊卵巢综合征(PCOS)母亲孕早期的高雄激素可能影响其男性子代成年后的生育力.本研究利用人胚胎干细胞(hESCs)体外分化的实验模型,观察不同浓度睾酮对hESCs向早期雄性生殖细胞分化的影响,探讨孕早期高雄激素暴露对男性子代原始生殖细胞储备及成年后生育力的潜在影响. 方法:2 μmol/L视黄酸(RA)体外诱导hESCs (46,XY)向雄性生殖细胞分化,同时添加0 mol/L、3×10-7 mol/L、5×10-7 mol/L、15×10-7 mol/L、45×10-7 mol/L、135×10-7 mol/L睾酮,在分化的第0、4、7、14天收集细胞样品,分析不同分化阶段雄性生殖细胞特异基因的表达,比较分化进程、分化效率. 结果:不同浓度睾酮处理的hESCs,同一分化阶段细胞形态无差异.原始生殖细胞的标志基因DAZL的表达峰值出现在分化的第4天,15×10-7 mol/L、45×10-7 mol/L、135×10-7 mol/L睾酮处理组的DAZL的表达量与3×10-7 mol/L睾酮处理组对比明显增加(P＜0.01).减数分裂期早期生殖细胞特异基因SCP3的表达在分化的第4天开始上调,45 ×10-7 mol/L睾酮处理组与3×10-7 mol/L、5×10-7 mol/L睾酮处理组比较,SCP3的表达均明显上调(P＜0.01);SCP3的表达在分化的第7天达到峰值,15×10-7 mol/L、45×10-7 mol/L、135×10-7 mol/L睾酮处理组与3×10-7 mol/L睾酮处理组相比,SCP3明显高表达(P＜0.01).免疫荧光、流式细胞分析结果显示,各组间分化第4天DAZL、分化第7天SCP3及VASA的表达量随着睾酮浓度升高而有升高趋势.分化第4天,雄激素受体(AR)的表达开始升高,并且可维持至分化第14天;在相同分化阶段,睾酮较高浓度组hESCs的AR表达量高于睾酮较低浓度组(但P＞0.05). 结论:hESCs向早期雄性生殖细胞分化过程中高雄激素处理,诱导雄激素受体的提前表达,使hESCs向早期雄性生殖细胞分化提前,可能导致PCOS患者男性子代雄性原始生殖细胞储备不足,进而影响其成年后的生育力.hESCs可作为体外模型研究PCOS患者宫内高雄激素暴露对其男性子代生育力影响研究的新工具,并有益于男性不育症病因机制的研究.

目的:雄性原始生殖细胞在植入生殖嵴后,会从有丝分裂退出进入静息状态,在这一过程中伴随着细胞内代谢状态的改变,本研究旨在体解析原始生殖细胞增殖的改变与细胞代谢之间的因果关系.方法:通过体内Brdu掺入实验明确不同时间点雄性生殖细胞的增殖状态;分析比较增殖状态和静息状态原始生殖细胞糖酵解相关基因的表达;利用腹腔注射HK2特异性抑制剂2-Deoxy-D-glucose (2-DG),构建糖酵解抑制小鼠模型;通过免疫荧光与qPCR分析抑制糖酵解后原始生殖细胞的表型.结果:免疫荧光结果显示雄性生殖细胞增殖停滞从E13.5开始,至E15.5完全停滞;qPCR和Western Blot显示在此过程中HK2的表达是逐渐降低的;在E11.5抑制小鼠胚胎中的糖酵解过程,可以在E13.5检测到雄性PGCs增殖下降,并且可以抑制多能性基因如Sox2、Oct4的表达.结论:研究发现,E11.5-E 13.5雄性原始生殖细胞内增殖与多能性的维持需要糖酵解.改变胚胎糖酵解水平可以影响原始生殖细胞增殖分化进程.

目的 NOBOX是在原始卵泡激活过程中起关键作用的转录因子,可直接调控Gdf9转录,并参与GDF9/SMAD通路影响颗粒细胞增殖分化,但其在初级卵泡及之后的具体调控机制并不清楚.Kit作为影响卵泡发育的重要基因,其启动子存在多个NOBOX结合位点.本研究拟探索在初级卵泡发育阶段,转录因子NOBOX对Kit的转录调控作用,以及通过GDF9/SMAD通路对卵泡发育的影响.方法 体外培养初级卵泡统计发育时间;qRT-PCR检测显微注射Nobox-siRNA的初级卵泡中Nobox、Kit、Kitl、Gdf9的mRNA表达变化;Western blot检测显微注射Nobox-siRNA的初级卵泡中NOBOX、KIT、P-SMAD的蛋白表达变化;ChIP实验验证转录因子NOBOX在Kit基因启动子上的结合位点.结果 初级卵泡在体外培养第5天可发育为次级卵泡,注射Nobox-siRNA的初级卵泡延缓2 d发育至次级;初级卵泡中注射Nobox-siRNA后,卵泡中Nobox、Kit、Kitl、Gdf9 mRNA表达显著下调,NOBOX、KIT、P-SMAD2/3蛋白表达量降低;转录因子NOBOX可以结合于Kit基因启动子.结论 NOBOX是小鼠初级卵泡发育至次级卵泡的关键基因,NOBOX可直接结合Kit基因启动子,且影响初级卵泡中KITL/KIT和GDF9/SMAD通路.