目的:制备针对纤维连接蛋白亚型胞外结构域B(EDB－FN)的特异性分子探针 18F－AlF－1，4，7－三氮杂环壬烷－1，4，7－三乙酸－(聚乙二醇) 4－ZD2( 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2)，并进行体内外理化性质评价。 方法:通过Al 18F一步螯合标记的方法制备 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2，通过高效液相色谱(HPLC)测定其放化纯和体外稳定性，测定脂水分配系数(logP)，并行细胞摄取实验[将三阴性乳腺癌MDA－MB－231细胞(1×10 6/管)分为3组(各3管)，分别为阳性组、抑制组和控制对照组]。取MDA－MB－231荷瘤裸鼠( n＝3；实验组)行 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2 microPET显像(30、60、90和120 min)，并与阻断组( n＝3；注射NOTA－PEG 4－ZD2后0.5 h再注射 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2)进行对照。采用两独立样本 t检验分析数据。 结果:成功制备 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2，优化后的放化产率为(33.8±2.1)%(未行衰变校正， n＝8)，放化纯>96%；37 ℃放置120 min， 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2在人血清和PBS中的放化纯均>93%，体外稳定性好；产物比活度为(11.1±3.2) GBq/μmol；logP为－1.43±0.05。注射 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2后120 min，阳性组肿瘤细胞摄取为(1.77±0.28)百分加样活度(%AR)/10 6个细胞，抑制组细胞摄取为(0.76±0.07)%AR/10 6个细胞( t＝4.30， P＝0.032)。荷瘤裸鼠microPET显像示， 18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2主要经肝肾代谢，注射后60 min实验组肿瘤摄取为(1.94±0.21)每克组织百分注射剂量率(%ID/g)，注射后90 min肿瘤/肌肉比值为3.80±0.25；阻断组注射后60 min肿瘤摄取为(0.43±0.09) %ID/g( t＝3.18， P＝0.006)。 结论:18F－AlF－NOTA－PEG 4－ZD2制备简单、标记率高、体外稳定性好，microPET显像肿瘤摄取和靶本比高，特异性良好，有较长的肿瘤滞留时间，在EDB－FN高表达的三阴性乳腺癌中具有良好的应用前景。

目的:评价鸢尾素对呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠肺泡巨噬细胞极化的影响。方法:SPF级健康成年雄性SD大鼠30只，6~8周龄，体重200~250 g。采用随机数字表法将其分为3组( n＝10)：对照组(C组)、VILI组(V组)和鸢尾素组(I组)。采用机械通气(潮气量20 ml/kg，通气频率80次/min，吸入氧浓度21%，吸呼比1∶2，呼气末正压为0)4 h方法制备大鼠VILI模型。C组保留自主呼吸4 h；I组于气管插管前30 min尾静脉注射鸢尾素1 μg/kg，其余组注射等容量生理盐水。机械通气4 h时处死大鼠，取肺组织，HE染色后行肺损伤评分，计算湿重/干重比值(W/D比值)；收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，采用ELISA法测定BALF IL-6、TNF-α、IL-10浓度；采用Western blot法测定BALF诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)和肺泡巨噬细胞磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化NF-κB p50(p-NF-κB p50)表达水平；流式细胞术测定M1型、M2型肺泡巨噬细胞百分比及M1/M2比值。 结果:与C组相比，V组肺组织W/D比值、肺损伤评分、BALF IL-6、TNF-α和IL-10浓度升高，iNOS和Arg-1、p-NF-κB p65及p-NF-κB p50表达上调，M1型和M2型肺泡巨噬细胞百分比增多，M1/M2比值升高( P<0.05)。与V组相比，I组肺组织W/D比值、肺损伤评分、BALF IL-6和TNF-α浓度降低，iNOS和p-NF-κB p65表达下调，M1型肺泡巨噬细胞百分比减少，M1/M2比值降低( P<0.05)，BALF IL-10和Arg-1水平、M2型肺泡巨噬细胞百分比、p-NF-κB p50表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:鸢尾素减轻VILI大鼠炎症反应的机制可能与抑制NF-κB信号通路激活，减轻肺泡巨噬细胞向M1型极化有关。

目的:探讨金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP1）和纤维连接蛋白1（FN1）在妊娠相关乳腺癌（PABC）中的表达及其与E-钙黏蛋白（E-cad）表达的相关性。方法:回顾性收集2011年1月至2020年12月山东第一医科大学附属滨州市人民医院55例PABC患者临床病理资料。采用免疫组织化学法检测留存的石蜡包埋癌组织及对应癌旁组织（距离癌灶边缘>3 cm）中TIMP1、FN1及E-cad的表达；应用蛋白质印迹法检测其中10例PABC患者术中冻存的新鲜癌组织及癌旁组织中TIMP1和FN1蛋白的表达。采用 χ2检验分析TIMP1和FN1表达与患者临床病理特征的关系，采用Spearman法分析二者与E-cad表达的相关性，采用Kaplan-Meier法分析二者表达与生存间的关系。 结果:TIMP1、FN1在PABC组织中的阳性率分别为72.7%（40/55）、58.2%（32/55），在癌旁组织中的阳性率分别为25.5%（14/55）、18.2%（10/55），差异均有统计学意义（ χ2值分别为24.59、18.64，均 P<0.001）。蛋白质印迹法检测结果显示，10例PABC患者新鲜癌组织中TIMP1和FN1蛋白的相对表达量均高于其对应的癌旁组织（1.60±0.76比0.62±0.29，1.31±0.62比0.44±0.15），差异均有统计学意义（ t值分别为5.92、4.86，均 P<0.001）。PABC中TIMP1、FN1的表达与雌激素受体表达、Ki-67阳性指数、TNM分期及淋巴结转移均有关（均 P<0.05）。PABC中TIMP1、FN1表达与E-cad表达均呈负相关（ r值分别为-0.471、-0.432，均 P<0.001）。5例失访，其余50例中位随访43个月（12~90个月），50例中TMP1阳性36例，FN1阳性29例。TIMP1、FN1阴性组总生存均优于对应的阳性组（ χ2值分别为4.49、6.06，均 P<0.05），其中，TIMP1、FN1阳性组中位总生存时间分别为51个月（95% CI 37~65个月）、43个月（95% CI 32~53个月），阴性组分别为89个月（95% CI 84~93个月）、87个月（95% CI 85~92个月）。 结论:PABC组织中TIMP1、FN1表达均升高，均与E-cad表达负相关，TIMP1、FN1可能通过上皮间质转化参与PABC的侵袭，且影响患者预后。

目的:探讨鸢尾素对呼吸机相关性肺损伤大鼠细胞焦亡的影响。方法:健康清洁级雄性SD大鼠36只，体重200~250 g，6~8周龄，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：对照组(C组)、呼吸机相关性肺损伤组(V组)和呼吸机相关性肺损伤+鸢尾素组(V+I组)。V+I组机械通气前尾静脉注射鸢尾素1 μg/kg。机械通气(潮气量40 ml/kg，通气频率60次/min，吸呼比设为1∶2，PEEP 0，FiO 2 21%)4 h后采集股动脉血样，进行动脉血气分析，记录PaO 2，计算氧合指数(OI)；收集支气管肺泡灌洗液(BALF)，测定总蛋白浓度，采用ELISA法测定BALF和血清IL-1β、IL-18浓度。取肺组织，HE染色后行肺损伤评分，测定肺组织湿重/干重(W/D)比值；分别采用Western blot法和RT-PCR法检测焦亡相关蛋白消皮素D-N端(GSDMD-N)、caspase-1及其mRNA的表达水平。 结果:与C组比较，V组肺损伤评分和W/D比值升高，PaO 2和OI降低，BALF总蛋白浓度、BALF和血清IL-1β、IL-18浓度升高，肺组织caspase-1、GSDMD-N及其mRNA表达上调( P<0.01)；与V组比较，V+I组肺损伤评分和W/D比值降低，PaO 2和OI升高，BALF总蛋白浓度、BALF和血清IL-1β、IL-18浓度降低，肺组织caspase-1、GSDMD-N及其mRNA表达下调( P<0.01)。 结论:鸢尾素减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤的机制可能与抑制细胞焦亡有关。

目的:探讨脐带间充质干细胞（ucMSC）外泌体对急性皮肤创面愈合的影响。方法:用超高速离心法提取ucMSC外泌体，经透射电镜观察、Western印迹检测外泌体表面标志物CD63和TSG101和粒径分析鉴定外泌体。体外培养3~5代人皮肤成纤维细胞（HSF），分别用含0（阴性对照组）、1、2 μg/ml外泌体的高糖DMEM培养基孵育24 h（分别为1、2 μg/ml组），CCK8法检测ucMSC外泌体对HSF增殖活力的影响。取24只8周龄雄性BALB/c小鼠构建全层皮肤损伤小鼠模型，按随机数字表等分为ucMSC外泌体组和磷酸盐缓冲液（PBS）组，距创缘约1 mm处等距皮下多点注射ucMSC外泌体悬液或PBS。术后第0、4、7、10、14天观察两组小鼠创面并计算创面残余面积百分比，术后第7、14天取创面组织后行HE和Masson染色，观察皮肤组织结构变化。术后第14天收集两组小鼠创面皮肤组织，实时定量PCR和Western印迹检测Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达水平。统计分析采用单因素方差分析、LSD- t检验、双因素重复测量方差分析及非配对 t检验。 结果:透射电镜下，ucMSC外泌体呈椭圆形，直径约100 nm；Western印迹检测显示，ucMSC外泌体表面蛋白CD63、TSG101表达阳性；粒径分析显示，96.2% ucMSC外泌体直径30 ~ 150 nm。CCK8法检测显示，外泌体1 μg/ml组和2 μg/ml组HSF相对活力（0.97 ± 0.05、1.08 ± 0.07）均显著高于阴性对照组（0.71 ± 0.04）， t值分别为2.00、7.05，均 P<0.05，且2 μg/ml组HSF相对活力显著高于1 μg/ml组， t = 5.09， P<0.05。术后第4、7、10、14天，ucMSC外泌体组创面残余面积百分比均显著低于PBS组（均 P<0.05）。HE和Masson染色显示，与PBS组相比，ucMSC外泌体组小鼠创面新生皮肤组织中毛囊、腺体以及肉芽组织更丰富且有新生血管形成，胶原排列也更整齐。实时定量PCR和Western印迹实验显示，ucMSC外泌体组Ⅰ型胶原蛋白、纤连蛋白、血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达均显著高于PBS组（均 P<0.01）。 结论:皮下注射ucMSC外泌体可以促进小鼠急性皮肤创面愈合，可能与ucMSC外泌体促进小鼠创面组织中细胞外基质和血管内皮生长因子的合成及促进HSF增殖有关。

目的 探讨血管性认知功能障碍(vascular cognitive impairment,VCI)患者血清 8 异构前列腺异素(8-iso-prostaglandin,8-iso-PGF2α)、鸢尾素(Irisin)、纤维连接蛋白Ⅲ型域包含蛋白 5(fibronectin type Ⅲ domain inclusion protein 5,FNDC5)表达及临床意义.方法 选取我院血管性认知功能障碍患者 92 例为观察组,同期选取健康体检者 48 例为对照组.比较 2 组血清 8-iso-PGF2α、Irisin、FNDC5 水平及蒙特利尔认知评估量表(montreal cognitive assessment,MoCA)评分,分析 VCI 患者血清 8-iso-PGF2α、Irisin、FNDC5 水平与 MoCA 评分相关性,Logistic回归分析非痴呆性血管性认知功能障碍(vascular cognitive impairmentno dementia,VCIND)进展为血管性痴呆(vasculardementia,VD)的影响因素,受试者工作特征(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线分析血清 8-iso-PGF2α、Irisin、FNDC5 对 VCIND进展为 VD的预测价值.结果 观察组血清 8-iso-PGF2α水平高于对照组,血清 Irisin、FNDC5 水平及 MoCA评分低于对照组(t=13.999、11.702、20.186、9.211,P<0.05);VCI 患者血清8-iso-PGF2α水平与 MoCA 评分呈负相关,Irisin、FNDC5 水平与 MoCA 评分呈正相关(r=-0.736、0.751、0.698,P<0.05);Logistic回归分析显示,血清 8-iso-PGF2α升高及 Irisin、FNDC5 降低为 VCIND进展为 VD的独立危险因素(OR=4.999、0.362、0.387,P<0.05);ROC 曲线显示,8-iso-PGF2α、Irisin、FNDC5 对 VCIND进展为 VD 均具有一定预测价值,且联合预测的 AUC达0.866.结论 血清 8-iso-PGF2α、Irisin、FNDC5 均参与 VCI发生发展,与患者认知功能损害程度密切相关,且可有效预测 VCIND进展为 VD的风险.

Fibronectin glomerulopathy is a rare autosomal dominant inherited glomerular disease associated with massive deposition of fibronectin. We recently diagnosed fibronectin glomerulopathy in a 29-year-old woman presenting nephrotic syndrome. Genetic analysis of fibronectin 1 gene showed heterozygosity for the Y973C mutation. However, this mutation was not found in her parents. She had stable renal function but persistent nephrotic proteinuria after one-year follow-up.

目的 探讨氧化应激下微小RNA-1 (miR-1)在人小梁网细胞(HTMC)中的表达及其对纤维连接蛋白(FN)的表达调控作用.方法 实验研究.分别用0、60、100、200、400 μmol/L H2O2对HTMC进行刺激6h;刺激后的细胞在体外培养24 h,随后采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-1和FN的表达情况.根据生物信息学分析预测出miR-1的靶基因为FN;分别构建pcDNA3/pri-miR-1、pcDNA3/增强型绿色荧光蛋白(EGFP)-FN-3'-非翻译区(3'-UTR)和pcDNA3/EGFP-FN突变体3'-UTR(FN-3'UTRmut)载体并转染HTMC,使用红色荧光蛋白(RFP)表达质粒pDsRed2-N1作为内参,转染48 h后检测EGFP和RFP的吸光度,以探究miR-1对FN表达的影响.过表达miR-1载体转染HTMC后用200 μmol/LH2O2刺激24 h,采用实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法和荧光免疫组织化学染色分别检测FN mRNA和蛋白的表达变化.采用单因素方差分析以及两样本t检验对数据进行统计学分析.结果 随着H2O2浓度升高,miR-1的水平逐渐下降(F=390.80,P＜0.01),而FN的水平逐渐升高(F=13.16,P＜0.01).与对照(1.000)相比,200 μmol/L和400 μmol/L H2O2刺激后的HTMC中miR-1水平分别下降至0.608±0.014(t=21.67,P＜0.01)和0.409 ±0.020 (t=29.91,P＜0.01),FN的mRNA水平分别上升至1.630±0.233(t=4.47,P=0.011)和1.903 ±0.246 (t=6.15,P=0.003).通过生物信息学分析,预测到miR-1在FN的mRNA 3'-UTR上存在可能的结合位点,双荧光检测发现:pcDNA3/pri-miR-1和pcDNA3/EGFP-FN-3'UTRmut共转染的细胞EGFP表达(0.562±0.018)高于pcDNA3/pri-miR-1和pcDNA3/EGFP-FN-3'UTR共转染细胞(0.329±0.015)(t=17.39,P＜0.01).与对照(1.000)相比,过表达miR-1时FN的mRNA表达量下降至0.294±0.081(t=1 1.01,P＜0.01);蛋白水平减少至0.584±0.022(t=5.57,P＜0.01).结论 氧化应激下HTMC中miR-1水平降低,而FN的表达升高;miR-1通过靶定FN的3'-UTR来抑制FN的表达.

OBJECTIVE:To investigate the effect of the clinical effective prescription of Qingre Lishi Yishen decoction (QRLS) on the activation of mesangial cells in immunoglobulin A nephropathy (IgAN) rats.METHODS:IgAN rat's model was established by combine with intragastric administration of bovine serum albumin (BSA) + intravenous injection of lipopolysaccharide (LPS) by + subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCL4).Then the animals were randomly divided into four groups:control group,IgAN model group,IgAN model with Valsartan (Val) treatment group and IgAN model with QRLS treatment group.To observe the indexes of 24-h urine protein,renal function,deposition of immune complexes,expression of activation factor,fibrosis marker and inflammatory cytokines in four different groups.RESULTS:The Val or QRLS treatment group:(a) it reduced the immune complexes deposition of IgA in glomerular mesangial and inhibited mesangial cell proliferation;(b) it decreased the expression of smooth muscle actin (α-SMA),fibronectin (FN) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α).CONCLUSION:The study suggested that QRLS ameliorate renal structure and function in IgAN rat's model.Furthermore,we also observed that QRLS alleviated mesangial cells activation and matrix accumulation partly by decreasing the α-SMA,then to downregulated the expression of FN and TNF-α.

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、糖蛋白-1(DKK-1)、β-连环蛋白(β-catenin)在近端胃癌组织中的表达及临床意义.方法 选择大庆油田总医院集团乘风医院2016年4月至2017年4月确诊的近端胃癌患者47例为研究对象,对患者病灶组织、癌旁组织及正常组织进行免疫组织化学检测,对比不同因素对GSK-3β、DKK-1、β-catenin表达的影响.结果 正常组织中GSK-3β阳性表达率为70.21％(33/47),高于病灶组织、癌旁组织的21.28％(10/47)、21.28％(10/47)(χ2=31.985,P<0.01);胃癌组织DKK-1、β-catenin阳性表达率分别为38.30％(18/47)、82.98％(39/47),均高于癌旁组织的8.51％(4/47)、8.51％(4/47)和正常组织的6.38％(3/47)、2.13％(1/47)(χ2=20.517、88.471,均P<0.01).原发灶淋巴结远处转移(TNM)分期Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、浸润≥50％、淋巴未转移者GSK-3β阳性表达率高(P<0.05);TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、中高分化、浸润不足50％者DKK-1阳性表达率高(P<0.05).结论 GSK-3β、DKK-1、β-catenin表达在胃癌患者病情发展、转移中有重要作用,在临床诊断、疗效评估方面有一定价值.