目的 探讨苯并(a)芘对变应性鼻炎(AR)模型鼻黏膜功能及Treg细胞甲基化水平的影响.方法 36只SPF级BALB/c雌性小鼠中选取12只作为正常对照组,剩余小鼠采用随机数表法分为AR模型组和苯并(a)芘干预组,各12只.AR模型组和苯并(a)芘干预组进行建模处理.建模后,苯并(a)芘干预组腹腔注射7.89 mg/kg苯并(a)芘,正常对照组和AR模型组给予等量的无菌PBS溶液腹腔注射.对各组小鼠的鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片嗜酸细胞(EOS)计数、血清中卵清蛋白特异性IgE(OVA-sIgE)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平、小鼠鼻黏膜病理学变化、小鼠鼻黏膜Th亚群及Foxp3甲基化和蛋白水平进行对比.结果 与AR模型组相比,苯并(a)芘干预组中小鼠鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片EOS计数增加最为明显(P＜0.05),小鼠血清中 OVA-sIgE、GM-CSF、TNF-α、IL-13 和 Eotaxin 水平升高最为明显(P＜0.05);苯并(a)芘干预后,可见大量的炎性细胞浸润,鼻黏膜上皮组织排列紊乱,增生和血管扩张严重,纤维上皮也受到严重的损伤,出现大量的杯形细胞,苯并(a)芘干预组小鼠鼻黏膜中AhR阳性细胞数量升高最为明显(P＜0.05);Th1和Treg占比降低最为明显,Th2、Th17占比升高最为显著(P＜0.05);小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化水平升高最为明显(P＜0.05),小鼠脾脏中Foxp3蛋白水平降低最为明显(P＜0.05).结论 苯并(a)芘通过增加CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化,降低Treg细胞比例,加重了鼻黏膜炎症和免疫失衡,进而参与变应性鼻炎的发病机制.

目的:探讨轴突导向因子3A（Sema3A）对脂多糖（LPS）诱导的CD4 +CD25 +调节性T细胞（Tregs）稳定性的作用及机制。 方法:采用体外免疫磁珠法分离和培养C57BL/6J小鼠脾脏CD4 +CD25 + Tregs，将分离的细胞按随机数字表法分为对照组（仅给予抗小鼠CD3e和CD28诱导细胞处于激活状态）、LPS组（在对照组的基础上给予LPS 100 μg/L）、LPS+核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L）、LPS+磷酸盐缓冲液（PBS）组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL）、LPS+PDTC+重组Sema3A（rSema3A）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L+rSema3A 300 μg/L）和LPS+PBS+rSema3A组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL+rSema3A 300 μg/L）。各组培养24 h后，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测CD4 +CD25 + Tregs特异性标志物叉头翼状转录因子-3（Foxp-3）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和膜相关转化型生长因子-β1（TGF-β1 m+）的基因及蛋白表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-10（IL-10）和分泌型转化生长因子-β1（sTGF-β1）的水平，采用免疫荧光法检测细胞凋亡，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测Foxp-3-Tregs特异性去甲基化区（Foxp-3-TSDR）的去甲基化程度，以反映CD4 +CD25 + Tregs的稳定性，采用电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB信号通路的DNA结合活性，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路活性。 结果:与对照组比较，LPS能够增加细胞稳定性，表现为Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达上调，IL-10和sTGF-β1分泌增加，细胞凋亡减少，Foxp-3-TSDR去甲基化程度增加；同时LPS可增加细胞内NF-κB信号通路的DNA结合活性，以及主要分子NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和p65的磷酸化水平，说明LPS增加细胞稳定性的机制与NF-κB信号通路有关。与LPS组比较，PBS并未对细胞稳定性和NF-κB信号通路产生影响；但添加rSema3A后能进一步增加细胞稳定性，并激活NF-κB信号通路。而PDTC能够抑制rSema3A增加细胞稳定性的功能，表现为：与LPS+PBS+rSema3A组比较，LPS+PDTC+rSema3A组Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达明显下调〔Foxp-3基因（2 -ΔΔCt）：8.092±1.117比18.509±1.068，Foxp-3蛋白（相对荧光强度）：1.224±0.033比1.826±0.181；CTLA-4基因（2 -ΔΔCt）：3.254±0.760比11.840±0.827，CTLA-4蛋白（相对荧光强度）：1.305±0.058比1.842±0.111；TGF-β1 m+基因（2 -ΔΔCt）：3.589±1.180比8.509±0.472，TGF-β1 m+蛋白（相对荧光强度）：1.319±0.033比1.822±0.063，均 P<0.01〕，IL-10和sTGF-β1分泌减少〔IL-10（ng/L）：445.33±54.08比992.67±83.10，sTGF-β1（ng/L）：1 116.67±65.25比1 494.67±94.45，均 P<0.01〕，细胞凋亡明显增加（荧光强度：0.398±0.031比0.268±0.046， P<0.01），Foxp-3-TSDR去甲基化程度明显降低（灰度值：0.467±0.048比1.780±0.119， P<0.01），NF-κB信号通路的DNA结合活性被明显抑制（灰度值：1.23±0.02比3.95±0.06， P<0.01），IKKβ和p65的磷酸化水平降低〔p-IKKβ表达（p-IKKβ/IKKβ）：0.97±0.07比1.97±0.04，p-p65（p-p65/p65）：0.95±0.08比1.93±0.06，均 P<0.01〕。 结论:LPS能通过NF-κB信号通路增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性；Sema3A能够进一步增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性，并且与NF-κB信号通路有关。

目的:探讨外阴硬化性苔藓（VLS）患者外阴组织Foxp3表达及外周血CD 4+CD 25+CD 127low调节性T淋巴细胞（Treg）数量的变化及意义。 方法:选取2016年8月至2018年12月新疆医科大学第五附属医院确诊的VLS患者15例（VLS组，并根据外阴活检部位分为皮损组和皮损旁组），选择同期外阴修复手术者10例（外阴对照组）和健康体检者15例（外周血对照组）分别作为外阴组织和外周血的相应对照。亚硫酸氢钠基因测序法检测外阴组织Foxp3基因启动子区的甲基化率，蛋白印迹法检测外阴组织Foxp3、DNMT1、DNMT3b蛋白的表达水平，并分析各组蛋白的表达水平与甲基化率的相关性。流式细胞仪检测外周血CD 4+CD 25+CD 127low Treg数量。 结果:与外阴对照组比较，Foxp3蛋白的表达水平皮损组和皮损旁组均显著下降（分别为0.58±0.05、0.32±0.05、0.42±0.06； P<0.05）；DNMT1和DNMT3b蛋白的表达水平皮损组显著升高（分别为0.52±0.10、0.39±0.04； P<0.05）。3组Foxp3基因启动子区的总甲基化率无差异（ P>0.05）；10个CpG位点中，CpG1（皮损旁组）、CpG9（皮损组）、CpG4及CpG10（皮损旁组和皮损组）甲基化率均高于外阴对照组（ P<0.05）。VLS组患者10个CpG位点的甲基化率与Foxp3、DNMT1蛋白的表达水平无关（ P>0.05）；皮损组、皮损旁组Foxp3与DNMT1蛋白的表达水平均有相关性（ r＝0.375， P＝0.032； r＝－0.665， P＝0.007），而与DNMT3b蛋白的表达水平无相关（ P>0.05）。VLS组患者外周血CD 4+CD 25+CD 127low Treg数量明显下降［VLS组和外周血对照组分别为（6.8±1.5)%、(8.3±1.7)%； P<0.05］。 结论:VLS患者外阴组织Foxp3低表达所致外阴局部Treg数量减少或抑制功能异常，可导致VLS发生，这可能有部分甲基化的因素，可能与DNMT1表达上调有关。外周血CD 4+CD 25+CD 127low Treg数量下降可能是VLS的发病原因之一。

类风湿关节炎(RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病.脱氧核糖核酸(DNA)甲基化是一种重要的表观遗传修饰.本文对近年DNA甲基化与RA发生、发展、诊断、治疗和预后关系研究进行了综述,发现DNA甲基化与RA的发生和发展密切相关,有希望作为RA诊断、治疗和预后的新靶点.其中,MAP3K5和LBH等甲基化基因参与RA发病阶段的调控,CYP2E1 和DUSP22 等甲基化基因调控RA的发展过程,SHROOM1 等甲基化基因可用于RA的诊断,Foxp3 和patched 1(PTCH1)等基因甲基化水平可用于评价RA的治疗效果.此外,给药前后的整体甲基化水平改变可用于RA的预后,有利于加深RA发病机制、疾病过程在表观遗传学上的认识.

目的 了解矽尘对作业工人叉头转录因子3(forkhead/winged helix transcription factor,FOXP3)基因启动子区域DNA甲基化状态的影响.方法 选取健康检查者和矽尘作业工人为对照组和接尘组,采用亚硫酸氢盐测序法检测外周血FOXP3基因启动子特定区域DNA甲基化水平.结果 在男性中,无论对照组还是接尘组FOXP3基因启动子区(+2071,+2182)5个CpG位点均呈现高甲基化(100％).在女性中,对照组第1个CpG位点(+2102)和第4个CpG位点(+2144)呈现低甲基化(40％),而接尘组相关CpG位点可见高甲基化(100％).结论 女性接尘作业工人FOXP3基因启动子特定位点DNA高甲基化可能与矽尘的毒性有关.

目的 分析原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,为PBC的发病机制、临床诊断和治疗提供新的方向.方法 收集PBC及健康对照组外周抗凝血各30份,分离PBMC,从中各选取4份进行lncRNA表达谱芯片测定,并用逆转录PCR(RT-PCR)验证芯片结果.对芯片结果进行生物信息学分析,如 Cis/Trans 靶基因分析、Gene ontology(GO)分析、Pathway分析和共表达网络预测,并设计小干扰RNA(siRNA)干扰lncRNA的表达,进行靶点验证.结果 相对于健康对照组,PBC患者PBMC中共发现749个异常表达的lncRNA, 230个异常表达的信使RNA(mRNA).PBC组核受体(NR4A3)基因表达水平下调78%,而在NR4A3基因下游20000 bp左右的lncRNA linc-pbc的表达上调2.56倍.转染针对linc-pbc 的siRNA后, PBMC中linc-pbc的水平下降,而NR4A3的mRNA表达水平及蛋白质水平均上调,叉头状转录因子(FOXP3)的表达也上调.结论 linc-pbc或许通过招募多梳蛋白抑制性复合物(PRC2),使NR4A3基因启动子区甲基化,下调NR4A3基因的表达水平,使其调控靶基因转录的活性降低,导致下游的靶基因FOXP3的表达下降,进而引起外周血及肝组织局部具有免疫抑制功能的调节性T细胞(Treg)细胞数量减少,打破机体免疫耐受平衡,促进PBC的发生和发展.

目的 研究绝经后骨质疏松症患者外周血CD4+T细胞Foxp3基因CNS2去甲基化水平.方法 纳入绝经后骨质疏松症患者42例为观察组,绝经后无骨质疏松症妇女38例为对照组.检测两组患者血清Ⅰ型前胶原氨基端前肽(P1NP)、β胶原特殊序列(β-crosslaps)以及血钙含量;分离两组患者外周血CD4+T细胞,亚硫酸氢盐测序法检测Foxp3基因CNS2去甲基化水平,实时定量PCR检测Foxp3 mRNA表达量;分析以上指标之间的相关性.结果 观察组中Foxp3基因CNS2去甲基化率(P<0.01)、Foxp3基因表达(P<0.01)均显著低于对照组;观察组中P1NP(P<0.01)与β-crosslaps(P<0.01)均显著高于对照组;绝经后骨质疏松症中Foxp3 CNS2去甲基化率与血清β-crosslaps呈负相关,其相关性差异具有统计学意义(P<0.01).结论 CD4+T细胞中Foxp3 CNS2去甲基化在绝经后骨质疏松症诊断中具有一定价值,其水平与骨代谢异常具有相关性.

目的 探讨PM2.5激活人正常支气管上皮细胞(BEAS2B) Foxp3表达的分子机制.方法 实验设对照组(磷酸盐缓冲液)、PM2.5组(300 μtg/mL)、5-AzaC组(DNA甲基化转移酶抑制剂,5.0 μrnol/L)、TSA组(组蛋白去乙酰化酶抑制剂,0.2 μrnol/L)、PM2.5对照组;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测BEAS2B细胞中Foxp3、HOXA1和HOXA2基因表达,蛋白印迹法(Western blot)检测Dnmts相关蛋白表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)检测DNA甲基化水平.结果 与对照组比较,PM2.5处理的BEAS2B细胞Foxp3表达量上升1.15倍,差异有统计学意义(P＜ 0.05);Dnmt1和Dnmt3b表达量分别下降0.51和0.38倍,Dnmt3a上升1.51倍,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);5-AzaC或TSA处理后,Foxp3表达量分别上升1.61和1.20倍,差异均有统计学意义(P＜0.05),并伴随Foxp3启动子区DNA低甲基化及Dnmt1蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 PM2.5可能通过抑制Dnmt1表达激活Foxp3表达.

目的 检测过敏性紫癜患者外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例和叉头框蛋白3(Foxp3)基因mRNA表达以及启动子区甲基化水平.方法 2015-2016年在中南大学湘雅二医院皮肤科收集20例过敏性紫癜住院患者和20例健康人,两组间性别、年龄差异无统计学意义(均P＞ 0.05).分离受试者外周血CD4+T淋巴细胞,荧光实时定量PCR试剂盒检测Foxp3基因mRNA,流式细胞仪检测CD4+CD25 +Treg比例,亚硫酸氢钠测序技术检测Foxp3基因启动子甲基化水平.采用SPSS16.0软件分析数据,两独立样本均数比较采用t检验,单因素直线相关分析评估各指标的相关性.结果 过敏性紫癜组CD4+T淋巴细胞中Foxp3mRNA表达水平(0.380±0.226)显著低于健康对照组,t=9.503,P＜0.01,CD4+ CD25+ Treg比例(1.668％±0.959％)显著低于对照组(2.741％±1.131％),t=2.552,P＜ 0.05,Foxp3基因启动子区甲基化水平(0.712±0.164)显著高于对照组(0.453±0.147),t=3.610,P＜0.01.患者组Foxp3启动子区甲基化水平与CD4+CD25+Treg百分比呈显著负相关(r=-0.490,P＜0.05),和临床病情评分呈正相关性(r=0.486,P＜ 0.05).肾损害组患者Foxp3基因启动子区甲基化水平显著高于无肾损害组(P＜0.05).结论 过敏性紫癜患者CD4+T细胞Foxp3基因启动子区甲基化水平升高,下调Foxp3基因表达和CD4+CD25+Treg比例,这可能与过敏性紫癜发病有关,并影响病情进展和预后.

免疫性血小板减少性症(ITP)为一种自身免疫性出血性疾病,其经典发病机制为机体产生针对血小板膜糖蛋白的自身抗体,从而介导血小板的破坏.近年来,研究发现ITP亦存在其他多种机制共同介导血小板生成减少、破坏增多,其中细胞免疫异常发挥了重要作用.在细胞免疫中,CD4+ CD25high CD127-调节性T细胞(Treg)为一类存在于人外周血与脾中的T细胞亚群,具有抑制自身反应性T细胞应答的功能;而辅助性T细胞(Th)17为新近发现的、能够分泌白细胞介素(IL)-17的淋巴细胞亚群,参与介导炎症反应,在自身免疫性疾病中具有重要意义.多项研究结果显示,ITP患者外周血中Treg/Th17失衡,以及特异性转录因子叉头框蛋白(Foxp)3及维甲酸相关孤核受体(ROR)-γt表达异常.而DNA甲基化诱导Foxp3基因沉默、IL-6/STAT3信号通路异常活化,可能是导致Treg/Th17失衡及ITP发生的机制,由此提出的去甲基化治疗可能为ITP的靶向治疗提供新思路,但是其科学性、有效性及安全性仍需进一步研究证实.笔者拟就Treg/Th17失衡及相关基因甲基化机制在ITP发生、发展过程中所发挥的作用及相关治疗进行综述.