目的:研究乙苯染毒后耳蜗毛细胞株（HEI-OC1）细胞增殖及氧化指标的变化。方法:于2019年7至12月，设置乙苯浓度分别为0、30、60、90、300、600、900 μmol/L和3、6、9、10 mmol/L，共11个浓度组，用CCK-8法测定乙苯染毒24 h后HEI-OC1细胞增殖活性；以0、1、2、4、8、16、32、64 mmol/L乙苯处理细胞24 h，计算乙苯的半数抑制浓度。用0、6、9和12 mmol/L乙苯染毒HEI-OC1细胞24 h后，测定细胞内丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果:与0 mmol/L浓度组比较，6、9、12 mmol/L浓度HEI-OC1细胞存活率明显降低（ P<0.01）。乙苯对HEI-OC1细胞的半数抑制浓度为12.86 mmol/L（ R2=99.05）。不同浓度组（0、6、9、12 mmol/L）乙苯处理HEI-OC1细胞24 h，MDA含量、SOD和GSH-Px活力差异均有统计学意义（ F=65.11、6.48、22.85， P<0.05）；与0 mmol/L浓度组比较，9、12 mmol/L浓度组HEI-OC1细胞MDA含量明显升高，12 mmol/L浓度组SOD活力明显降低，6、12 mmol/L浓度组GSH-Px活力明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:乙苯可以抑制HEI-OC1细胞增殖，引起细胞氧化损伤。

目的 利用代谢组学技术和药源性聋细胞模型寻找红树共生放线菌链霉菌属Streptomyces sp.(No.1624117)代谢产物中防治药源性听力损失成分.方法 从菌株粗提物中筛选具有抗炎活性的极性分段样,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS)对菌株粗提物和活性分段样的化学成分进行数据采集;通过主成分分析法(PCA)与正交偏最小二乘法-判别分析法(OPLS-DA)进行多元统计学分析,筛选差异成分;经过柱层析和高效液相色谱(HPLC)定点分离目标差异点,利用核磁和质谱鉴定结构;最后通过顺铂诱导的HEI-OC1细胞损伤模型考察化合物对耳蜗毛细胞的保护作用.结果 代谢组学分析有38个差异代谢物,结合抗炎活性测定结果,分离纯化出6个化学成分并确定了结构.在顺铂诱导的HEI-OC1细胞损伤模型中,化合物1,2,3,4和6均显示出对耳蜗毛细胞具有保护作用.结论 本研究建立了一种基于代谢组学技术挖掘放线菌代谢产物中防治药源性听力损失成分的方法,为寻找防治听力损失活性化合物提供了新途径.

目的 通过分析氧化应激损伤的凋亡HEI-OC1细胞各信号转导及转录激活子(signal transducers and activators of transcription,STATs)的表达,探讨酪氨酸激酶-信号转导及转录激活子(janus kinase-signaltransducers and activators of transcription,J AK-STATs)信号通路在毛细胞凋亡中的生物学作用.方法 采用不同浓度(0、20、40、60μM)叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)染毒构建HEI-OC1细胞株凋亡模型(0 μM浓度为对照组),Annexin V-FITC/PI法检测20、40、60μM浓度t-BHP染毒组细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测STATs mRNA表达水平.结果 对照组及20、40、60 μM t-BHP染毒组的细胞凋亡率分别为3.9％、7.4％、32.0％、91.2％;与对照组相比,各浓度T-BHP染毒组STAT1mRNA、STAT3mRNA、STAT5mRNA、STAT6 mRNA的表达水平均显著性下降(分别为F=5 534.302,P＜0.01;F=146.038,P＜0.01;F=685.929,P＜0.01;F=516.11,P＜0.01),各浓度t-BHP染毒组间差异无统计学意义(P＞0.05);与对照组相比各浓度t-BHP染毒组STAT2mRNA的表达水平均有显著变化(F=1 259.148,P＜0.01),20μM染毒组STAT2 mRNA的表达水平明显下降(P＜0.01),但40、60 μM染毒组均明显升高(P＜0.01);STAT4 mRNA在HEI-OC1细胞株中未见表达.结论 JAK-STAT2信号通路具有促进毛细胞氧化应急损伤凋亡的生物学作用,JAK-STAT1/STAT3/STAT5/STAT6信号通路有抑制毛细胞氧化应急损伤凋亡的生物学作用.

目的 分析氧化应激损伤的HEI-OC1毛细胞中热休克蛋白75/78(GRP75/78)的表达水平,探讨GRP75、GRP78在耳蜗毛细胞凋亡过程中的可能作用.方法 用不同浓度(20、40、60 μM)叔丁基过氧化氢(t-BHP)染毒构建HEI-OC1毛细胞株凋亡模型,对照组不加t-BHP,培养24 h后用Western blot检测各组毛细胞凋亡标志物Caspase-3、Active-Caspase-3表达水平,实时荧光定量PCR检测GRP75、GRP78 mRNA表达水平.结果 与对照组相比,各染毒组Caspase-3和Active-Caspase-3蛋白表达水平显著增高(F=1 196.741,P＜0.001和F=184.131,P＜0.001),40μM和60μM染毒组Caspase-3和Active-Caspase-3蛋白表达水平显著高于20μM染毒组(P＜0.01),但40μM和60 μM染毒组之间差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比较,各染毒组GRP75和GRP78 mRNA表达水平显著增高(F=228.065,P＜0.001和F=1 298.057,P＜0.001),40μM和60μM染毒组GRP75和GRP78 mRNA表达水平显著高于20μM染毒组(P＜0.01),但40 μM和60μM染毒组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GRP75和GRP78在氧化应激损伤的耳蜗毛细胞中有抗凋亡的生物学作用.

目的 探讨银杏叶提取物(EGB761)对放射性损伤耳蜗毛细胞株HEI-OC1增殖、凋亡及细胞存活素(Survivin)、Bcl-2家族前凋亡蛋白(Bax)表达的影响.方法 体外培养耳蜗毛细胞株HEI-OC1,设置正常对照组、放射性损伤组及10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L EGB761干预组,除正常对照组外其他组均选择对数生长期HEI-OC1细胞进行照射,建立放射性损伤模型,之后各干预组分别给予相应浓度EGB761进行干预.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测各组HEI-OC1细胞增殖能力,利用流式细胞仪(FCM)检测各组HEI-OC1细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组细胞Survivin、Bax表达水平.结果 MTT结果显示,与正常对照组比较,放射性损伤组HEI-OC1细胞增殖能力明显下降(P<0.05);与放射性损伤组比较,EGB761干预组HEI-OC1细胞增殖能力明显上升(P<0.05),且呈一定剂量依赖性.FCM结果显示,与正常对照组比较,放射性损伤组HEI-OC1细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与放射性损伤组比较,EGB761干预组HEI-OC1细胞凋亡率明显降低(P<0.05),且呈一定剂量依赖性.qRT-PCR结果显示,与正常对照组比较,放射性损伤组HEI-OC1细胞中Survivin水平明显下降(P<0.05),Bax水平明显升高(P<0.05);与放射性损伤组比较,EGB761干预组HEI-OC1细胞中Survivin水平明显升高(P<0.05),Bax水平明显下降(P<0.05),且呈一定剂量依赖性.结论 EGB761可明显促进HEI-OC1细胞增殖,抑制HEI-OC1细胞凋亡.其作用机制可能为上调凋亡抑制基因Survivin表达及下调凋亡促进基因Bax表达.

目的 分析抑制热休克蛋白75(GRP75)对氧化应激损伤HEI-OC1细胞凋亡的影响,探讨GRP75在耳蜗毛细胞凋亡过程中的作用机制.方法 人工设计合成靶向GRP75的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),转染不同浓度(20、40、60μM)叔丁基过氧化氢(t-BHP)染毒HEI-OC1毛细胞株,并设空白对照,采用蛋白免疫印迹法检测GRP75和Caspase-3蛋白表达水平.结果 转染GRP75-siRNA后HEI-OC1细胞GRP75表达水平明显受到抑制(t=35.722,P＜0.01);T BHP染毒组GRP75表达水平明显升高(细胞凋亡组:F=1 009.09,P＜0.01;siRNA转染组:F=1 603.97,P＜0.01),并且都随着染毒浓度的增加而增加;T-BHP染毒组Caspase 3表达水平显著增高(细胞凋亡组:F=3 068.67,P＜0.01;siRNA转染组:F=6 348.27,P＜0.01),并都随着染毒浓度的增加而增加;20 μM、40μM、60μM t-BHP染毒组转染siRNA后Caspase-3表达水平均显著升高(t=21.275、P＜0.01;t=18.584、P＜0.01;t=11.147、P＜0.01).结论 抑制氧化应激损伤毛细胞的GRP75表达可导致凋亡程度加重,推测GRP75可能具有抗凋亡效应.

目的 分析信号传导和转录激活因子2(STAT2)对氧化应激损伤HEI-OC1毛细胞株凋亡的影响.方法 采用随机数表法将对数生长期HEI-OC1毛细胞分为干扰组和未干扰组,干扰组中加入人工设计合成靶向STAT2的小干扰RNA和选择性改良伊格尔培养液(opti-MEM),未干扰组中仅加入opti-MEM,分别以不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的叔丁基过氧化氢(t-BHP)染毒干扰组和未干扰组.蛋白免疫印迹法检测各组细胞STAT2和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)相对表达水平,流式细胞仪检测毛细胞凋亡率.结果 在未干扰组和干扰组中,HEI-OC1细胞的细胞凋亡率和STAT2、Caspase-3的相对表达水平均随t-BHP染毒剂量的升高而升高(P<0.01).与同剂量染毒的未干扰组比较,20、40、60μmol/L t-BHP染毒的干扰组HEI-OC1细胞的细胞凋亡率和Caspase-3相对表达水平均升高(P<0.01),而STAT2相对表达水平均降低(P<0.01).结论 抑制氧化应激损伤毛细胞的STAT2表达可导致凋亡程度加重;STAT2具有抗凋亡效应.

目的 研究Gjb2在高糖诱导的HEI-OC1细胞株凋亡与氧化应激中的作用.方法 高血糖处理HEI-OC1细胞株后,RT-qPCR检测了Gjb2的表达.Tunel实验和流式细胞术检测HEI-OC1细胞株凋亡,RT-qPCR和West?ern Blot检测了凋亡相关基因和蛋白的表达.采用流式细胞术检测高糖处理后HEI-OC1细胞株内ROS的生成,RT-qPCR和Western blot检测了SOD2和catalase的mRNA和蛋白表达.结果 HEI-OC1细胞株经高糖处理后,凋亡率显著升高,BCL2的mRNA表达显著降低,而BAX、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达则显著升高,同时BCL2的蛋白表达显著降低,而BAX、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9的蛋白表达则显著升高.氧化应激检测结果显示高糖处理后细胞内ROS水平显著升高,同时伴随着SOD2和catalase的mRNA和蛋白表达显著升高.高糖处理显著抑制了Gjb2的表达,而在HEI-OC1细胞株中过表达Gjb2则能抑制高糖诱导的细胞凋亡和氧化应激.结论 过表达Gjb2能抑制高糖诱导的HEI-OC1细胞株凋亡和氧化应激.

目的 探讨补肾活血汤对衰老耳蜗毛细胞株HEI-OC1自噬和凋亡的影响.方法 应用D-半乳糖构建衰老HEI-OC1细胞的体外模型后,将细胞分为对照组、衰老组、含药血清低、中及高剂量组(5％、10％、20％),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测耳蜗HEI-OC1细胞的增殖能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老状态;膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡的程度;Western印迹检测细胞中自噬和凋亡相关蛋白的表达水平.结果 MTT、β-半乳糖苷酶染色、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术和Western印迹结果显示,与对照组比较,衰老组HEI-OC1细胞增殖能力明显下降;细胞衰老状态明显增加,细胞凋亡率明显增加,Atg5、Atg12、Beclin1和Bcl-2蛋白表达水平明显下降,p62和Bax蛋白表达水平显著升高(均P<0.01).与衰老组比较,补肾活血汤各组HEI-OC1细胞增殖能力明显上升;细胞凋亡率明显降低;Atg5、Atg12、Beclin1和Bcl-2蛋白表达水平显著增加(均P<0.05);p62和Bax蛋白表达水平显著下降(均P<0.05),且均呈现出剂量依赖性.结论 补肾活血汤可通过促进自噬及抑制凋亡来延缓耳蜗毛细胞株HEI-OC1的衰老,且与其浓度相关.

目的 探讨补肾活血汤延缓耳蜗毛细胞株HEI-OC1衰老的潜在机制.方法 应用D-半乳糖建立衰老HEI-OC1细胞模型,设立对照组、模型组、补肾活血汤组、PI3K抑制剂组和补肾活血汤+PI3K抑制剂组.采用ELISA法检测细胞SOD、GSH-Px活性和MDA水平,DCFH-DA法检测细胞ROS水平,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞Beclin-1、P62、Bcl-2、Bax mRNA表达.结果 与对照组比较,模型组HEI-OC1细胞SOD和GSH-Px活性、ROS水平、Beclin-1和Bcl-2 mRNA表达均降低(P<0.01),MDA水平、细胞凋亡率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达、P62和Bax mRNA表达均升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组均可改善以上指标(P<0.05,P<0.01),其中补肾活血汤+PI3K抑制剂组作用最为显著,而补肾活血汤组与PI3K抑制剂组之间比较无差异.结论 补肾活血汤可通过促进自噬、抑制凋亡和减轻氧化应激损伤延缓HEI-OC1细胞的衰老,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.