目的:了解我国医师对儿童脓毒性休克治疗策略的认知现状。方法:编制问卷，于2017年4至6月中国医师协会儿童重症医师分会368名儿童重症医师完成儿童脓毒性休克治疗邮件问卷调查。结果:回收有效问卷368份(应答率45.1 %)，单位应答率87.2%(68/78)。59.2%和77.7%受访者选择清创手术和体液引流等清除病灶；90.8%受访者选择休克1 h内使用抗生素；98.4%选择生理盐水，72.3%使用白蛋白，53.8%选择血浆进行液体复苏；休克复苏静脉通路开通困难时，57.1%首选开通骨髓内通路；79.3%和83.2%受访者使用糖皮质激素和静脉丙种球蛋白等辅助治疗；96.7%受访者可提供氧气和机械通气支持，85.3%提供持续肾替代治疗，22.0%提供体外膜肺氧合等脏器支持。322名(88.7%)、188名(51.1%)和85名(23.1%)受访者符合液体复苏、正性肌力药物和缩血管药物的临床模拟病例的"最佳建议"；缩血管和正性肌力药物模拟病例中，分别有69.3%和24.2%受访者选择液体复苏治疗；液体复苏病例中，49.7%(183/368)受访者进行液体容量和反应性评估，评估仪器包括重症床旁超声[39.4%(145/368)]，生物阻抗监测器[10.3%(38/368)]和经肺热稀释装置[6.3%(23/368)]；接受儿童高级生命支持课程( P＝0.006)和重症专科培训中心培训( P＝0.002)的儿科医生做出"最佳建议"选项的比例高于未参加培训者。 结论:我国儿童脓毒性休克治疗现状是积极的病灶清除、抗生素使用及脏器支持等，无创血流动力学监测意识增加，但可能存在过度液体输注，不合理使用血浆、激素和丙种球蛋白等，不同形式的培训和继续教育可能促进合理治疗。

目的:探讨间质干细胞成骨过程中外泌体转运的miRNA-222-5p对肌腱细胞损伤的修复作用及其机制。方法:收集、分离和鉴定间质干细胞外泌体。小鼠跟腱切断后1周安乐死后取其肌腱，分离培养肌腱细胞，得到肌腱细胞损伤模型（损伤组）；将成骨分化过程中的间质干细胞与肌腱细胞共培养（共培养组）；将miRNA-222-5p模拟物转染进间质干细胞，成骨分化过程中的间质干细胞与肌腱细胞共培养（miRNA-222-5p组）。通过克隆形成、Transwell观察间质干细胞分泌外泌体及外泌体转运的miRNA-222-5p对肌腱细胞损伤修复的能力；qPCR、Western-blot和荧光染色检测成软骨和成骨相关蛋白的相对mRNA和相对蛋白表达水平；通过Western-blot检测信号通路因子的表达。结果:电镜观察外泌体直径为40~100 nm，形态为典型的杯口状结构。外泌体标志蛋白热休克蛋白70、多配体聚糖结合蛋白1、肿瘤转移抑制因子9、肿瘤转移抑制因子63和肿瘤易感基因101的相对表达量分别为2.56±0.22、2.06±0.42、1.96±0.32、1.94±0.38、1.86±0.33，与正常对照组比较差异均有统计学意义（ P<0.05）。克隆形成试验后细胞群落数量：损伤组（4.00±0.58）个、共培养组（7.25±0.48）个、miRNA-222-5p组（16.00±1.35）个，差异有统计学意义（ F=46.550， P<0.001）。Transwell试验后细胞数量：损伤组（37±4）个、共培养组（78±3）个、miRNA-222-5p组（168±8）个，差异有统计学意义（ F=454.100， P<0.001）。qPCR、Western-blot和荧光染色检测结果显示，与损伤组相比，共培养组细胞中Sry相关HMG盒9、Ⅱ型胶原纤维α1基因、蛋白聚糖、骨形态发生蛋白2、Runt相关转运因子2和骨桥蛋白的mRNA和蛋白质表达量增加；与共培养组相比，miRNA-222-5p组细胞mRNA和蛋白质表达量均增加（ P<0.05）。Western-blot结果显示，与损伤组相比，共培养组核因子κB、细胞外调节蛋白激酶2、信号传导与转录激活因子3、信号传导与转录激活因子5和细胞信号转导分子2的表达水平升高；与共培养组相比，miRNA-222-5p组的表达升高（ P<0.05）。 结论:间质干细胞与跟腱细胞共培养可促进跟腱细胞成骨分化，同时间质干细胞来源的外泌体可通过转运miRNA-222-5p进一步促进跟腱细胞成骨分化。其机制可能与损伤肌腱中信号通路因子核因子κB、细胞外调节蛋白激酶2、信号传导与转录激活因子3、信号传导与转录激活因子5和细胞信号转导分子2的表达上调有关。

该研究探讨毛蕊花糖苷对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾纤维化的作用。采用随机数字表法将24只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术（CON）组、单侧输尿管梗阻（UUO）组、UUO+毛蕊花糖苷（ACT）组和UUO+贝那普利（BZ）组，采用单侧输尿管结扎术建立肾纤维化动物模型。HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变。免疫组化法检测肾组织Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅢ）、热休克蛋白（HSP）-47、结缔组织生长因子（CTGF）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、β联蛋白（β-catenin）、B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白的表达。Western印迹法检测肾组织葡萄糖调节蛋白（GRP）78蛋白表达。结果显示，与CON组比较，UUO组大鼠肾小管扩张，肾间质胶原纤维沉积显著增加；UUO+ACT组和UUO+BZ组大鼠肾小管扩张和间质胶原纤维沉积程度较UUO组显著减轻，但仍明显重于CON组。与CON组比较，UUO组大鼠肾组织CTGF、α-SMA、CollagenⅢ、HSP-47、β-catenin及GRP78蛋白表达量均显著较高，Bcl-2蛋白表达量显著较低（均 P<0.05）；与UUO组比较，UUO+ACT组和UUO+BZ组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达量均显著较高，而其他蛋白表达量均显著较低（均 P<0.05）。该研究表明，毛蕊花糖苷可通过下调CTGF、α-SMA、CollagenⅢ、HSP-47、β-catenin及GRP78表达，上调Bcl-2表达，从而发挥改善肾纤维化的作用。

目的:评价丙泊酚对胃癌细胞凋亡时葡萄糖调节蛋白78(GRP78)-活化转录因子4(ATF4)-C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法:传代培养至对数期的MGC-803细胞，采用随机数字表法分为2组( n＝15)：对照组(C组)和丙泊酚组(P组)。C组细胞在37 ℃、5%CO 2条件下正常培养；P组细胞待贴壁生长至70%～90%时，加入丙泊酚，终浓度为5 μg/ml，24 h时采用流式细胞术检测细胞凋亡率，qPCR法检测GRP78、ATF4和CHOP的mRNA表达，Western blot法检测GRP78、ATF4和CHOP的表达。 结果:与C组比较，P组细胞凋亡率升高，GRP78、ATF4、CHOP及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:丙泊酚促进胃癌细胞凋亡的机制与激活GRP78-ATF4-CHOP信号通路有关。

目的:研究转录激活因子6（ATF6）与需肌醇酶1-X-框结合蛋白1（IRE1-XBP1）在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤小鼠海马神经元（HT22）细胞中的交互作用。方法:复制OGD/R损伤HT22细胞模型，观察OGD/R后不同时间点（0、3、6、12、24 h）内质网应激（ERS）、细胞活性和凋亡的变化。将对数生长期的HT22细胞分为空白对照组、对照+ATF6激动剂AA147组、对照+IRE1抑制剂4μ8c组、OGD/R模型组、OGD/R+AA147组、OGD/R+4μ8c组（AA147组和4μ8c组于全程添加10 μmol/L AA147或16 μmol/L 4μ8c）。采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组HT22细胞ERS相关蛋白〔葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化需肌醇酶1（p-IRE1）、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α（p-eIF2α）〕以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化caspase-3的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ERS相关基因以及ATF6〔同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1（Herpud1）、蛋白二硫键异构酶家族成员4（Pdia4）、Lin-12样抑制子/增强子（Sel1L）〕和剪接型X-框结合蛋白1〔XBP1s，包括DnaJ热休克蛋白成员B9（Erdj4）、Sec24相关基因家族成员D（Sec24d）、信号受体序列3（Ssr3）〕介导的转录反应相关基因的mRNA表达；采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；采用免疫荧光法检测活化caspase-3表达。结果:与空白对照组比较，ERS相关蛋白p-IRE1和p-eIF2α的蛋白表达量分别在OGD/R 12 h、OGD/R 3 h升高（p-IRE1/β-actin：2.09±0.10比1.00±0.00，p-eIF2α/β-actin：1.39±0.11比1.00±0.00，均 P<0.01），ERS相关基因ATF6、XBP1s、非剪接型X-框结合蛋白1（XBP1u）、转录激活因子4（ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达量在OGD/R后不同时间点也明显升高，表明ERS在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组p-IRE1蛋白表达量无改变，但XBP1s和XBP1u的mRNA表达量明显下降〔XBP1s（2 -ΔΔCt）：0.76（0.71，0.92）比1.13（1.03，1.29），XBP1u（2 -ΔΔCt）：0.29±0.05比0.52±0.04，均 P<0.01〕，而XBP1s介导的转录反应相关基因表达量无明显改变。与OGD/R模型组比较，在使用4μ8c后短链ATF6（sATF6）和GRP78的蛋白表达量无明显改变，ATF6介导的转录反应相关基因的mRNA也无明显改变。提示ATF6的激活能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达，但ATF6与XBP1s介导的转录反应无交互作用。与空白对照组比较，HT22细胞活性在OGD/R 3 h时显著降低〔（44.64±5.12）%比（99.13±5.76）%， P<0.01〕，凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值分别在OGD/R 3 h和OGD/R 0 h显著升高（Bax/Bcl-2比值：6.15±1.65比1.00±0.00，活化caspase-3/caspase-3比值：17.48±2.75比1.00±0.00，均 P<0.01），表明凋亡在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组细胞活性显著下降〔（36.52±17.78）%比（69.90±9.43）%， P<0.01〕，Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值明显升高（Bax/Bcl-2比值：2.06±0.31比1.10±0.25，活化caspase-3/caspase-3比值：3.35±0.59比0.55±0.09，均 P<0.01）。 结论:在OGD/R损伤HT22细胞中，ATF6和XBP1s介导的转录反应无明显交互作用，但AA147激活的ATF6能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达并促进应激HT22细胞中死亡的发生。

目的:探讨肾损伤标志性蛋白在烧伤延迟复苏患者急性肾损伤(AKI)早期诊断中的价值。方法:采用回顾性病例对照研究方法。2018年5月—2020年5月，郑州市第一人民医院收治43例符合入选标准的烧伤延迟复苏患者，其中男27例、女16例，年龄18～75(35±3)岁，按伤后7 d内是否发生AKI分为AKI组23例及非AKI组20例。比较2组患者性别、年龄、深Ⅱ度烧伤面积、Ⅲ度烧伤面积、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ，统计伤后12、24、48 h补液量和血清肌酐及伤后12、24、48、72、120、168 h血清白蛋白/纤维蛋白原比值(AFR)，尿热休克蛋白70(HSP70)、金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)×胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)。对数据行Mann-Whitney U检验、重复测量方差分析、独立样本 t检验、 χ2检验及Bonferroni校正，行多因素logistic回归分析筛选预测AKI发生的自变量，绘制预测烧伤延迟复苏患者AKI发生的受试者操作特征曲线，计算诊断AKI的曲线下面积(AUC)、最佳阈值及最佳阈值下的敏感度、特异度。 结果:2组患者性别、年龄、深Ⅱ度烧伤面积、Ⅲ度烧伤面积、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ相近( χ2＝1.98， t＝1.98、1.99、1.99、1.99， P>0.05)。AKI组患者伤后24、48 h补液量明显少于非AKI组( t＝15.37、6.51， P<0.01)。AKI组患者伤后12、24、48 h血清肌酐明显高于非AKI组( Z＝2.16、5.62、6.72， P<0.01)。AKI组患者伤后12、24、48、72、120、168 h血清AFR明显低于非AKI组( t＝16.14、35.35、19.60、20.47、30.20、20.17， P<0.01)。AKI组患者伤后12、24、48、72、120、168 h尿HSP70为(6.89±0.87)、(6.42±0.73)、(5.81±0.72)、(5.17±0.56)、(4.63±0.51)、(3.89±0.51)μg/L，明显高于非AKI组的(3.89±0.75)、(3.57±0.63)、(2.66±0.41)、(1.83±0.35)、(1.48±0.19)、(1.28±0.19)μg/L， t＝12.00、13.61、17.39、22.98、26.34、21.59， P<0.01。AKI组患者伤后12、24、48、72、120、168 h尿TIMP-2×IGFBP-7、NGAL明显高于非AKI组( t＝26.94、101.11、35.50、66.89、17.34、14.30，14.00、13.78、12.32、14.80、21.36、22.62， P<0.01)。将伤后12 h尿HSP70和血清AFR，伤后24 h尿TIMP-2×IGFBP-7、NGAL纳入多因素logistic回归分析(比值比＝2.42、3.47、7.52、5.61，95%置信区间＝1.99～2.95、1.86～3.92、2.87～9.68、2.14～14.69， P<0.01)。对43例烧伤延迟复苏患者，伤后12 h血清AFR预测AKI发生的受试者操作特征曲线AUC为0.739(95%置信区间＝0.576～0.903)，最佳阈值为9.90，敏感度为82%，特异度为90%；伤后12 h尿HSP70 AUC为0.990(95%置信区间＝0.920～1.000)，最佳阈值为1.40 μg/L，敏感度为98%，特异度为96%；伤后24 h尿TIMP-2×IGFBP-7 AUC为0.715(95%置信区间＝0.512～0.890)，最佳阈值为114.20 μg 2/L 2，敏感度为91%，特异度为95%；伤后24 h尿NGAL AUC为0.972(95%置信区间＝0.860～1.000)，最佳阈值为78 μg/L，敏感度为95%，特异度为96%。 结论:尿HSP70、NGAL对烧伤延迟复苏导致的AKI具有较高诊断价值。

目的:探讨血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、热休克蛋白(HSP)27、HSP70、HSP90α与肝细胞癌(HCC)患者经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗疗效的关系.方法:选取2021年6月～2023年6月在南充市中心医院接受TACE治疗的HCC患者125例,根据TACE治疗疗效分为无效组(47例)和有效组(78例).采用酶联免疫吸附法检测血清HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α.多因素Logistic回归分析影响HCC患者TACE治疗疗效的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α对HCC患者TACE治疗无效的预测价值.结果:与有效组比较,无效组血清HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α水平升高(P＜0.05).多因素Logistic回归分析显示,低分化、血管侵犯和HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α升高为HCC患者TACE治疗无效的独立危险因素(P＜0.05).血清HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α联合预测HCC患者TACE治疗无效的曲线下面积为0.958,大于血清HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α 单独预测的 0.750、0.739、0.742、0.749.结论:血清 HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α 升高是 HCC患者TACE治疗无效的独立危险因素,血清HIF-1α、HSP27、HSP70、HSP90α联合预测HCC患者TACE治疗无效的价值较高.

目的 通过生物信息学研究梗阻性无精子症(OA)和非梗阻性无精子症(NOA)患者的睾丸组织差异基因的表达,为NOA的诊断提供新的标志物.方法 从基因表达综合数据库(GEO)下载无精子症相关基因的芯片数据(GSE45885和GSE9210)并进行GEO2R在线分析,得出NOA相关的差异表达基因(DEGs),利用韦恩图取交集,确定共同DEGs.使用R软件进行DEGs的GO注释和KEGG富集分析.应用STRING构建DEGs相关的蛋白质互作网络(PPI).再利用Cytoscape软件筛选出NOA的最显著的枢纽(Hub)基因,并对其进行可视化处理.采用ROC曲线判断Hub基因对NOA的诊断价值,并在GSE145467数据集进行验证.结果 经筛选共得到83个DEGs,其中78个下调,5个上调.GO富集分析显示DEGs参与的生物过程(BP)有生精细胞的发育和分化、运动纤毛的组装等;细胞组成(CC)主要包括精子鞭毛、运动纤毛、顶体泡、生精细胞核等;分子功能(MF)主要有赋予细胞外基质抗压能力的结构成分、蛋白质结合、热休克蛋白的结合等.KEGG相关通路涉及多个物种长寿调控途径、细胞周期和凋亡、精母细胞的减数分裂等.PPI网络筛选出NOA密切相关的5个Hub基因分别为SPAG5、CCNB2、AURKC、NCAPH、PTTG1.ROC 曲线显示 5 个 Hub 基因均是 NOA 潜在生物标志物.结论 SPAG5、CCNB2、AU-RKC、NCAPH、PTTG1基因可能在NOA的发生发展中起关键作用,可作为NOA的潜在生物标志物.

目的:探讨葡萄糖调节蛋白 78(glucose regulated protein 78,GRP78)在胆管癌组织中的表达水平及其预后价值.方法:收集胆管癌组织标本,利用iTRAQ技术筛选胆管癌组织差异蛋白.采用qRT-PCR和Western blot方法检测GRP78 的表达情况.利用组织芯片和免疫组化技术研究GRP78 和胆管癌预后之间的相关性.结果:利用 iTRAQ 技术共筛选出 147 个差异蛋白,其中热休克蛋白 70 家族成员 HSPA5(GRP78)在癌组织中异常高表达.Western blot发现癌组织中GRP78 蛋白表达水平均高于癌旁组织,而且GRP78 mRNA平均相对表达量在癌组织和癌旁组织中分别是2.90 和0.89,两者相差3.26 倍,t =4.834,P<0.001.Kaplan-Meier曲线示GRP78 高表达患者的中位总生存时间和无病生存时间分别为 6.83 和3.74 个月,而GRP78 低表达患者分别为12.01 和 11.70 个月,GRP78 高表达患者总生存率低且易复发,P<0.05.单因素Cox分析指出GRP78 高表达、肿瘤直径≥5 cm、肝内胆管癌、血管侵犯阳性以及高TNM分期等与胆管癌患者总生存时间和无病生存时间密切相关(P均<0.05).多因素Cox分析发现GRP78 高表达和肝内胆管癌以及肿瘤直径≥5 cm皆是胆管癌患者复发的独立危险因素(P均<0.05),并且GRP78 高表达是总生存时间的独立危险因素(P<0.05).结论:GRP78 在胆管癌组织中异常高表达,并且和胆管癌预后密切相关,是一个潜在的胆管癌预后指标和治疗靶标.

葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP 78),又称为免疫球蛋白重链结合蛋白(theimmunoglobulin heavy chain binding protein,Bip),当未折叠蛋白增多,GRP 78将信号传递到细胞核从而启动未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),进而触发内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)[1].GRP 78是ERS的标记性蛋白,它属于热休克蛋白70 (HSP 70)家族成员,其在促进蛋白加工、成熟以及维持内质网稳态中发挥重要作用.