目的:探讨miR-3607-3p对宫颈癌细胞的恶性表型的作用及相关作用机制。方法:OncoLnc生物信息学网站分析miR-3607-3p的表达与宫颈癌患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常宫颈上皮细胞(H8)和宫颈癌细胞系(Hela、HCC94、SiHa、C33A)中miR-3607-3p的表达情况。SiHa细胞体外转染阴性对照核苷酸序列为阴性对照(NC)组，转染miR-3607-3p模拟序列为miR-3607-3p组。qRT-PCR检测转染后的SiHa细胞中miR-3607-3p表达变化。采用CCK-8法和划痕实验检测转染前后SiHa细胞的恶性生物学行为变化。qRT-PCR和Western blot检测转染前后肌动蛋白结合蛋白2(PFN2)基因表达变化，双荧光素酶报告基因实验检测miR-3607-3p与PFN2的靶向关系。结果:miR-3607-3p表达水平高的宫颈癌患者生存期显著长于miR-3607-3p低表达患者( P<0.01)。与H8细胞相比，miR-3607-3p在人宫颈癌细胞系中异常低表达( P<0.05)，其中SiHa细胞系中表达最低( P<0.01)。NC组和miR-3607-3p组miR-3607-3p表达分别为(1.04±0.31)和(9.28±1.76)，转染miR-3607-3p模拟序列后SiHa细胞miR-3607-3p表达水平明显高于NC组( P<0.01)，增殖活性和划痕愈合率明显低于NC组(均 P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-3607-3p直接靶向结合PFN2( P<0.01)。qRT-PCR和Western blot结果显示，miR-3607-3p组的PFN2 mRNA和蛋白表达均低于NC组，增殖蛋白CDK3、CDK2表达低于NC组，上皮表型相关蛋白Claudin-1、ZO-1表达高于NC组(均 P<0.01)。 结论:miR-3607-3p与宫颈癌患者的生存期相关，上调miR-3607-3p表达可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移，其机制可能与靶向抑制PFN2有关。

目的:研究miR-378在宫颈癌组织中的表达水平，并探讨其对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:收集2012年1月至2016年1月在山东大学齐鲁医院妇科检查的宫颈组织标本185例。采用RT-qPCR检测miR-378在宫颈组织和细胞中的表达水平；用Western Blot检测细胞中不同癌基因ATG12、CCND1和pRb的表达水平；应用BrdU细胞增殖检测和Transwell侵袭实验检测细胞增殖和侵袭情况；运用Target Scan预测并筛选miR-378的基因靶点，并用双荧光素酶报告系统进行验证。结果:miR-378在宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ病变组织和宫颈癌组织中的表达水平明显高于正常宫颈组织（ F=103.091， t=9.381、8.936，均 P<0.05）；miR-378在淋巴结转移阳性的宫颈癌组织中的表达水平明显高于淋巴结转移阴性的宫颈癌组织（ t=1.007， P<0.01）。miR-378的过表达显著促进了C-33A细胞的迁移和侵袭（ t=5.285， P<0.05），而miR-378的低表达则显著抑制HeLa细胞的迁移和侵袭能力（ t=2.941， P<0.05）。C-33A细胞中miR-378的过表达显著降低了ATG12、CCND1和pRb的表达水平（ t=1.382、1.431、2.086，均 P<0.05）；HeLa细胞中miR-378的低表达可增加ATG12、CCND1和pRb的表达水平（ t=3.961、3.062、2.894，均 P<0.05）。 结论:miR-378能显著促进宫颈癌的转移，ATG12作为miR-378的直接作用靶点，可为宫颈癌患者病理学和治疗靶点的分子机制提供新的见解。

目的:研究细胞核内巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对宫颈癌细胞增殖能力和侵袭能力的影响及其可能机制。方法:以构建的核内稳定表达M-CSF的HeLa细胞系为模型，溴脱氧尿苷(BrdU)标记的脱氧核糖核酸(DNA)复制分析法检测细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞侵袭能力；蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞核蛋白核内转录因子κB p65(NF-κB p65)和细胞总蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况。结果:核内稳定表达M-CSF的HeLa细胞的增殖能力和侵袭能力均明显增强( P<0.05， P<0.01)，且NF-κB p65、MMP-2表达增多(均 P<0.05)。 结论:核内M-CSF可促进宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力，其机制与上调NF-κB p65和MMP-2表达有一定的关系。

目的:探讨非编码RNA FAM225A对卵巢癌Hela细胞增殖和转移特性的影响及其分子机制。方法:选取2019年7月到2021年7月河南大学淮河医院收集的宫颈癌组织和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析FAM225A表达水平。采用对照慢病毒和FAM225A短发卡RNA(shRNA)慢病毒感染人宫颈癌细胞系Hela，命名为对照组和FAM225A KD组，采用荧光定量PCR分析两组FAM225A表达水平；采用噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验分析两组细胞的增殖、周期、迁移和侵袭能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析FAM225A的靶基因及其下游调控基因。组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织FAM225A表达水平(0.99±0.14)明显低于宫颈癌组织(2.05±0.23)，差异有统计学意义( t＝32.820， P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.02±0.14)明显高于FAM225A KD组(1.46±0.15)，差异有统计学意义( t＝6.591， P<0.05)。克隆形成实验结果显示，对照组细胞克隆形成率[(63.70±4.62)%]明显高于FAM225A KD组[(40.14±6.72)%]，差异有统计学意义( t＝7.077， P<0.05)。对照组细胞G 0/G 1期比例[(30.27±2.33)%]明显低于FAM225A KD组[(39.98±3.32)%]，差异有统计学意义( t＝7.077， P<0.05)。对照组细胞S期比例[(33.13±2.20)%]明显高于FAM225A KD组[(28.25±2.17)%]，差异有统计学意义( t＝3.866， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(81.17±5.71)%]明显高于FAM225A KD组[(63.17±6.40)%]，差异有统计学意义( t＝5.142， P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(105.17±14.82)个]明显高于FAM225A KD组[(70.18±10.32)个]，差异有统计学意义( t＝4.746， P<0.05)。miR-197-5p是FAM225A的海绵。癌旁组织miR-197-5p表达水平(1.07±0.15)明显高于宫颈癌组织(0.65±0.11)，差异有统计学意义( t＝19.350， P<0.05)。对照组细胞miR-197-5p表达水平(1.04±0.17)明显低于FAM225A KD组(1.81±0.31)，差异有统计学意义( t＝5.322， P<0.05)。 结论:FAM225A在宫颈癌组织中呈高表达，作为miR-197-5p海绵，调控着宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

目的:利用AdEasy腺病毒载体系统构建G蛋白信号调节蛋白5(regulator of G-protein signaling 5，RGS5)重组腺病毒载体，初步探讨RGS5在神经元发育过程中的作用。方法:以C57BL/6小鼠大脑皮层神经元cDNA为模板，利用PCR扩增RGS5基因，构建腺病毒重组质粒pAD-Track-RGS5。重组质粒pAD-Track-RGS5经PacI酶切线性化后与pADEasy-1骨架质粒共同转化BJ5183感受态细胞，筛选重组成功的质粒，命名为pAD-RGS5。用293A细胞包装重组腺病毒AD-RGS5，并纯化病毒，以pAD-Track包装的腺病毒(AD-EGFP)作为对照组检测重组腺病毒RNA水平RGS5表达情况。将重组腺病毒AD-RGS5感染培养的原代皮层神经元，以AD-EGFP作为对照组检测RGS5对原代皮层神经元发育的影响。结果:与Neuro 2a、CATH.a和C17.2细胞系比较，大脑原代皮层神经元RGS5相对表达量明显升高，差异具有统计学意义( t值分别为7.40、7.58和7.60， P值均<0.05)。pAD-Track-RGS5转染Hela细胞中RGS5表达量较pAD-EGFP组明显升高，差异显著具有统计学意义( t＝7.58， P<0.05)，成功构建了过表达RGS5基因的腺病毒载体。与AD-EGFP腺病毒组相比，AD-RGS5腺病毒组神经元对突触囊泡内吞的能力变弱，荧光染色变弱，差异具有统计学意义( t＝5.372， P<0.05)，提示RGS5对皮层神经元的突起发育具有明显的抑制作用。 结论:成功构建了RGS5过表达的AD-RGS5腺病毒载体，RGS5对原代皮层神经元胞吞突触囊泡的能力有抑制作用。

目的:探讨热休克蛋白90（Hsp90）抑制剂PU-H71联合X射线照射对辐射抗性人宫颈癌细胞的作用。方法:利用生物信息学分析 Hsp90基因在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达。通过分次照射法（2 Gy/次，共30次）获得辐射抗性的宫颈癌细胞系HeLa RR和SiHa RR，将细胞分为对照组（二甲基亚砜处理）、单纯照射组、PU-H71组（0.5 μmol/L PU-H71处理）、PU-H71+照射组（0.5 μmol/L PU-H71处理24 h后给予照射）。利用克隆形成法检测细胞存活。细胞处理后1、6、24 h，用免疫荧光法检测γH2AX聚焦点。细胞处理后1、2、6、12、24 h，利用蛋白质印迹法检测Rad51的表达；细胞处理后2 h，检测磷酸化的DNA依赖蛋白激酶催化亚基（p-DNA-PKcs）的蛋白质表达。细胞处理后48 h，流式细胞术检测细胞凋亡。 结果:PU-H71增强了辐射抗性宫颈癌细胞对X射线的敏感性。与单纯照射组相比，PU-H71+照射组HeLa RR和SiHa RR细胞，在10%存活下的辐射增敏比（SER）分别为1.36和1.27，而凋亡率分别提高了约72.1%和63.1%。PU-H71使辐射诱导的γH2AX聚焦点的持续时间延长，抑制了DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）的磷酸化，从而限制非同源末端连接（NHEJ）修复，同时延迟了同源重组修复。结论:PU-H71通过抑制DNA双链断裂修复途径，增加了辐射抗性宫颈癌细胞的辐射敏感性，有望作为一种增强宫颈癌放射治疗疗效的放射增敏剂。

目的:基于低氧诱导因子-1α（HIF-1α）/ATP柠檬酸裂合酶（ACLY）信号通路，探究透明细胞肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）潜在发病机制，为ccRCC的治疗提供新思路。方法:收集苏州大学附属第一医院诊断为ccRCC的78例标本，通过外显子测序明确VHL基因突变情况；通过免疫组织化学染色评估HIF-1α/ACLY在VHL基因突变的ccRCC中表达情况，通过Western blot实验在携带VHL基因突变的ccRCC细胞系（786-O、A498、UM-RC-2、SNU-333和Caki-2）中进行进一步验证。在ccRCC细胞系中过表达或者干扰HIF-1α，通过即时定量PCR（qPCR）和Western blot实验检测ACLY的mRNA和蛋白质水平。CoCl 2和低氧（1%O 2）处理HeLa细胞激活HIF-1α，检测ACLY的mRNA和蛋白水平。通过JASPAR数据库结合染色质免疫共沉淀实验（ChIP）及荧光素酶报告基因实验等探究HIF-1α调控ACLY潜在分子机制。通过BODIPY染色等细胞生物学技术检测HIF-1α/ACLY调控轴对脂质积累的作用。比较ccRCC患者与良性病变患者ACLY表达情况，通过生存期分析探究ACLY作为ccRCC预后指标可行性。 结果:外显子测序发现，78例ccRCC患者中有55例携带VHL失活突变，其中HIF-1α与ACLY蛋白水平呈正相关，携带VHL基因突变的ccRCC细胞系中ACLY和HIF-1α的蛋白水平同样呈现不同程度正相关；在A498细胞中过表达HIF-1α可以增加ACLY的mRNA和蛋白水平，在Caki-2细胞中敲低HIF-1α则可以抑制ACLY的mRNA和蛋白质水平（均 P<0.001），CoCl 2和低氧处理可以通过激活HIF-1α显著提高ACLY的mRNA和蛋白水平（均 P<0.001）。荧光素酶报告基因转录活性量化及ChIP-qPCR结果提示HIF-1α可以直接与ACLY启动子区域结合从而转录激活ACLY表达，提高ACLY蛋白水平（均 P<0.001）。BODIPY染色结果提示细胞系中游离脂肪酸的含量和细胞中HIF-1α及ACLY的水平呈正相关，敲低HIF-1α可以有效降低细胞中脂质积累，过表达ACLY则可以逆转这一过程。同时，细胞功能实验提示 HIF-1α敲低的ccRCC细胞增殖速率显著下降，外源性过表达ACLY则可以恢复肿瘤细胞的增殖能力（ P<0.001）。通过生存分析发现，相较于ACLY低表达组，ACLY高表达组ccRCC患者预后较差，中位生存期较短（ P<0.001）。 结论:ccRCC中VHL失活突变介导的HIF-1α高表达通过上调ACLY促进脂质合成，促进肿瘤进程，靶向HIF-1α/ACLY信号轴可能为ccRCC临床诊疗提供理论依据。

目的:研究人类白细胞抗原G(HLA-G)在人类T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染中的表达情况，探讨HLA-G在HTLV-1逃逸宿主免疫应答中的功能和机制。方法:采用HTLV-1稳定感染的细胞系MT2分别感染HeLa和THP-1细胞，qRT-PCR和Western blot检测HLA-G异构体在mRNA和蛋白质水平的表达情况，流式细胞术检测HLA-G1的表达情况。在HeLa细胞中通过转染上调HLA-G的表达以及采用siRNA基因沉默HLA-G，再用HTLV-1感染细胞，从蛋白质水平上验证HTLV-1特征性病毒蛋白Tax的改变。结果:HTLV-1感染HeLa和THP-1细胞能诱导HLA-G异构体的差异性表达，以HLA-G1、HLA-G5为主；HTLV-1病毒感染宿主细胞24 h后HLA-G mRNA和蛋白质水平表达明显上调。同时，过表达HLA-G的HeLa细胞被HTLV-1病毒感染后病毒蛋白Tax明显升高，采用siRNA的手段将HeLa细胞HLA-G基因沉默后，则得到相反的结果。结论:免疫耐受分子HLA-G在HTLV-1感染细胞后表达量明显上升，从而促进HTLV-1病毒蛋白的传播和复制，进而导致病毒的持续感染。

目的:探讨神经纤维瘤蛋白1（NF1）在胆囊癌中的机制。方法:采用实验研究方法。培养人胆囊癌细胞系GBC-SD、NOZ、SGC996、EH-GB1、ZJU0428，人胚肾细胞系293T，人宫颈癌细胞系HELA；构建免疫共沉淀实验所需的重组质粒mRFP-YAP1 FL-FLAG和eGFP-MYC-NF1 2650~2750-HA，体外纯化Yes相关蛋白1（YAP1）截断体蛋白和NF1融合蛋白。分别采用等温滴定量热实验、GST pull-down实验、免疫共沉淀实验、免疫荧光和激光共聚焦检测NF1与YAP1的体内外相互作用，采用蛋白质免疫印迹法检测不同胆囊癌细胞系中NF1蛋白的表达水平。观察指标：（1）NF1与YAP1的体外相互作用。（2）NF1与YAP1的细胞内相互作用。（3）不同人胆囊癌细胞系中NF1蛋白的表达水平。结合解离常数由ITC200等温滴定量热仪自带软件输出，以 x±s表示。计数资料以绝对值表示。 结果:（1）NF1与YAP1的体外相互作用。①等温滴定量热实验结果显示：PPQY肽段滴定体外纯化YAP1的第1个WW1结构域蛋白存在相互作用，结合解离常数为（0.42±0.06）mmol/L；PPQY肽段滴定体外纯化YAP1的162~275蛋白区段存在相互作用，结合解离常数为（0.69±0.14）mmol/L。②GST pull-down实验结果显示：相对于GST蛋白和His-Sumo-YAP1 WW1反应体系，在GST-PPQY融合蛋白与His-Sumo-YAP1 WW1反应体系的蛋白泳道中可以观察到目的蛋白His-Sumo-YAP1 WW1；相对于GST蛋白和His-Sumo-YAP1 WW2反应体系，在GST-PPQY融合蛋白与His-Sumo-YAP1 WW2反应体系的蛋白泳道中可以观察到目的蛋白His-Sumo-YAP1 WW2。（2）NF1与YAP1的细胞内相互作用。①免疫共沉淀实验结果显示：在使用FLAG凝胶珠孵育共转染mRFP-YAP1 FL-FLAG和eGFP-MYC-NF1 2650~2750-HA的细胞裂解液中，观察到NF1蛋白的免疫印迹。②免疫荧光和激光共聚焦检测结果显示：在人胆囊癌细胞系NOZ的原位荧光中，YAP1和NF1荧光明显，主要定位于细胞质中。在人胆囊癌细胞系SGC996的原位荧光中，YAP1荧光明显，主要定位于细胞核中，NF1荧光不明显。（3）不同人胆囊癌细胞系中NF1蛋白的表达水平。蛋白印迹实验结果显示：以人宫颈癌细胞系HELA中NF1蛋白的表达量为标准，在人胆囊癌细胞系EH-GB1、GBC-SD、NOZ、SGC996、ZJU0428中，NF1蛋白的相对表达量分别为1.28、0、1.01、0、0。 结论:NF1可能通过直接作用于YAP1蛋白影响胆囊癌。

目的:探究miR-21对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭以及放射敏感性的影响和潜在作用机制。方法:利用RT-qPCR方法检测宫颈癌组织和相邻非肿瘤组织、正常宫颈上皮细胞(H8)以及宫颈癌细胞系(HeLa、SiHa、ME180)中miR-21表达水平。通过CCK-8检测、Caspase3/7活细胞凋亡检测、伤口愈合试验、Transwell侵袭、克隆形成试验、蛋白印迹和间接免疫荧光方法分别检测miR-21降低或RECK低表达对HeLa细胞活力、凋亡、迁移、侵袭、放射敏感性以及相关蛋白影响；双荧光素酶报告基因试验验证miR-21是否直接靶向RECK发挥调控作用。结果:miR-21在宫颈癌组织中表达明显高于相邻非肿瘤组织( P<0.05)。与H8细胞相比，HeLa、SiHa、ME180细胞中miR-21表达水平显著增加(均 P<0.05)。下调miR-21表达可显著性抑制HeLa细胞活力、促进细胞凋亡、降低其放射耐受性，并且抑制Cyclin D 1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达、促进p21和Bax蛋白表达(均 P<0.05)。miR-21可直接靶向结合RECK mRNA的3’-UTR，从而负向调控RECK表达；沉默RECK逆转了miR-21降低对HeLa细胞凋亡、迁移、侵袭、放射敏感性的影响。 结论:抑制miR-21表达能明显抑制HeLa细胞活力、诱导细胞凋亡、降低细胞迁移和侵袭能力、增强细胞放射敏感性，其作用机制与靶向促进RECK基因的表达密切相关。