Background::The transforming growth factor β1 (TGF-β1)-induced epithelial-mesenchymal transition (EMT) has been proven associated with the pathogenesis of asthmatic airway remodeling, in which the Wnt/β-catenin pathway plays an important role, notably with regard to TGF-β1. Recent studies have shown that 1α, 25-dihydroxyvitamin D 3(1α, 25(OH) 2D 3) inhibits TGF-β1-induced EMT, although the underlying mechanism have not yet been fully elucidated. Methods::Alveolar epithelial cells were exposed to 1α, 25(OH) 2D 3, ICG-001, or a combination of both, followed by stimulation with TGF-β1. The protein expression of E-cadherin, α-smooth muscle actin, fibronectin, and β-catenin was analyzed by western blotting and immunofluorescence analysis. The mRNA transcript of Snail was analyzed using RT-qPCR, and matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) activity was analyzed by gelatin zymogram. The activity of the Wnt/β-catenin signaling pathway was analyzed using the Top/Fop flash reporters. Results::Both 1α, 25(OH) 2D 3 and ICG-001 blocked TGF-β1-induced EMT in alveolar epithelial cells. In addition, the Top/Fop Flash reporters showed that 1α, 25(OH) 2D 3 suppressed the activity of the Wnt/β-catenin pathway and reduced the expression of target genes, including MMP-9 and Snail, in synergy with ICG-001. Conclusion::1α, 25(OH) 2D 3 synergizes with ICG-001 and inhibits TGF-β1-induced EMT in alveolar epithelial cells by negatively regulating the Wnt/β-catenin signaling pathway.

目的:探讨ICG-001对大鼠孤独症样行为及海马锥体神经元树突棘形态发育的影响。方法:健康雌性Wistar大鼠自然受孕，出生子代大鼠依据随机数字表法分为4组：生理盐水对照组、ICG-001对照组、丙戊酸钠(VPA)组和ICG-001处理组。每组12只。运用三箱社交、埋珠、旷场和高架十字迷宫实验检测大鼠社交、重复刻板和焦虑样行为。应用免疫荧光检测大鼠海马CA1区神经特异核蛋白(NeuN)阳性神经元数目。高尔基染色法观察大鼠海马锥体神经元树突棘密度和形态改变。Western blot检测大鼠海马磷酸化LIM激酶1(LIMK1)、肌动蛋白结合蛋白(Cofilin)、纤维状肌动蛋白(F-actin)和脑发育调节蛋白A(Drebrin A)蛋白表达。采用单因素方差分析统计学差异，以 Tukey法进行组间比较。 结果:1．三箱社交行为实验：生理盐水对照组、ICG-001对照组、VPA组和ICG-001处理组与新奇大鼠接触时间分别为(219.42±5.38) s、(218.67±10.12) s、(126.58±5.02) s、(218.58±6.63) s,偏好指数分别为0.43±0.05、0.43±0.04、0.22±0.01、0.42±0.04；与VPA组相比，ICG-001处理组接触时间及偏好指数均显著增加(均 P<0.05)。2.埋珠实验：4组大鼠埋珠数量分别为(9.13±0.52)个、(9.08±0.64)个、(15.13±0.82)个、(9.42±0.86)个；与VPA组相比，ICG-001处理组埋珠数量显著减少( P<0.05)。3.旷场实验：4组大鼠的中央区域停留时间分别为(82.33±1.83) s、(81.32±4.19) s、(45.51±3.02) s、(81.44±3.19) s；与VPA组相比，ICG-001处理组中央区域停留时间明显增加( P<0.05)。4.高架十字迷宫实验：4组大鼠在开臂停留时间分别为(107.75±7.23) s、(106.08±7.50) s、(63.42±1.91) s、(106.67±7.07) s；与VPA组相比，ICG-001处理组在开臂停留时间显著增加( P<0.05)。5.免疫荧光实验：4组大鼠海马CA1区NeuN阳性神经元数量分别为(41.83±1.17)×10 4/μm 2、(41.00±0.77)×10 4/μm 2、(27.17±0.95)×10 4/μm 2、(40.00±0.90)×10 4/μm 2；与VPA组相比，ICG-001处理组NeuN阳性神经元数量明显较多( P<0.05)。6.高尔基染色实验：4组大鼠海马CA1区锥体细胞树突棘密度分别为(0.74±0.04)个/μm、(0.73±0.03)个/μm、(0.49±0.03)个/μm、(0.70±0.02)个/μm，其中蘑菇型顶树突棘所占百分比(0.49±0.02)%、(0.49±0.02)%、(0.33±0.02)%、(0.43±0.02)%，瘦长型顶树突棘所占百分比(0.27±0.02)%、(0.26±0.02)%、(0.34±0.01)%、(0.26±0.01)%。与VPA组相比，ICG-001处理组海马CA1区锥体细胞顶树突棘密度明显增加( P<0.05)，蘑菇型树突棘增多和瘦长型顶树突棘减少(均 P<0.05)。7.Western blot实验：4组大鼠海马磷酸化LIMK1/LIMK1比值分别为100.33±2.30、99.34±2.28、57.76±4.10、99.13±1.90，磷酸化Cofilin/Cofilin比值分别为100.18±2.43、100.18±1.70、57.12±1.88、99.53±1.69，F-actin/球状肌动蛋白(G-actin)比值分别为100.07±0.86、99.99±1.72、51.19±1.23、99.28±3.17，Drebrin A蛋白相对表达量分别为100.79±1.19、100.12±2.04、52.86±3.26、99.97±2.44；与VPA组相比，ICG-001处理组显著上调了海马中磷酸化LIMK1、Cofilin、F-actin和Drebrin A表达(均 P<0.05)。 结论:ICG-001可能通过调控LIMK1/Cofilin信号通路，促进F-actin形成和上调Drebrin A表达，增强树突棘形态发育，进而改善大鼠孤独症样行为。

目的:观察靶向调控转化生长因子(TGF)-β1下游β-连环蛋白(β-catenin)/T细胞因子(TCF)与β-catenin/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号的竞争抑制对颈动脉斑块内新生血管生成及斑块稳定性的影响。方法:收集CEA术后斑块组织( n＝21)，对斑块组织进行苏木精-伊红(HE)染色后据病理特征分出易损和稳定斑块，后对各组织中CD31、VE-Cadherin的表达部位及水平进行免疫组织化学(IHC)染色分析；ApoE －/－小鼠(T、TI、I、N 4组， n＝12)制作颈动脉狭窄模型，设T组TGF-β1(每天50 μg/kg)＋生理盐水(5 mg/kg)；TI组TGF-β1(50 μg/kg)＋ICG-001(5 mg/kg)；I组生理盐水(50 μg/kg)＋ICG-001(5 mg/kg)；N组生理盐水(5.05 mg/kg)并每天相应处理连续2周，取颈动脉组织，对各组织行HE染色后据病理特征分出易损和稳定斑块，后用IHC染色及半定量评估各组织中CD31、VE-Cadherin的表达部位及水平。组间比较采用两独立样本 t检验或单因素方差分析。 结果:T组和TI组易损斑块率分别为60.00%、33.33%，均较N组的72.73%低；VE-Cadherin在T组与N组表达分别为0.156±0.007、0.191±0.005，差异有统计学意义( F＝1.615， P<0.05)，与TI组表达(0.133±0.010)比较差异有统计学意义( F＝0.068， P<0.05)；CD31在TI组和T组表达分别为0.119±0.004、0.136±0.010，差异有统计学意义( F＝3.451， P<0.05)。IHC切片可见稳定斑块中CD31、VE-Cadherin标记含量低，且TI组含量低于其他各组。 结论:特异性阻断TGF-β下游的β-catenin/TCF可反向增强β-catenin/FoxO1对颈动脉粥样硬化斑块内新生血管的抑制作用，进而有利于稳定斑块。

目的 研究白及多糖对高脂高糖环境下人脐静脉内皮细胞的影响,揭示白及多糖促进糖尿病足溃疡早期愈合的分子机制.方法 用葡萄糖、棕榈酸干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)模拟糖尿病体内高糖、高脂环境的血管内皮损伤模型,CCK-8法检测棕榈酸、白及多糖、通路抑制剂ICG-001最佳作用浓度及白及多糖细胞毒性,镜下观察最佳浓度葡萄糖、棕榈酸、白及多糖、ICG-001干预后的细胞生长状态,跨内皮细胞电阻实验检测细胞生长情况,免疫荧光法检测β-连环蛋白(β-catenin)在细胞中的核易位情况,Western blot法检测细胞中β-catenin、糖原合成激酶3β(GSK-3β)、c-Myc蛋白表达情况,RT-PCR法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达情况.结果 确定葡萄糖最佳浓度为25 mmol/L、棕榈酸为300 μmol/L、白及多糖为300 μg/mL、ICG-001为10 μmol/L,使用最佳浓度葡萄糖和棕榈酸诱导建立血管内皮损伤模型.葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L组、葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L+ICG-001组细胞处于生长抑制状态,黏附性下降,细胞活力明显降低;葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L+白及多糖组、葡萄糖+棕榈酸300μmol/L+ICG-001+白及多糖300 μg/mL组细胞碎片及形态异常的细胞数量明显减少,黏附性较前加强,细胞活力明显增高.葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L组电阻TEER值、胞浆胞核中β-catenin蛋白相对表达量、细胞核中c-Myc蛋白相对表达量及细胞中VEGF、bFGF mRNA相对表达量均明显低于正常对照组(P均＜0.05),细胞质中GSK-3β蛋白相对表达量明显高于正常对照组(P＜0.05),β-catenin在胞浆胞核表达的荧光强度较弱,葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L+白及多糖组上述指标均逆转.葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L+ICG-001组电阻TEER值、胞浆胞核中β-catenin蛋白相对表达量、细胞核中c-Myc蛋白相对表达量及细胞中bFGF mRNA相对表达量均明显低于葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L组(P＜0.05),β-catenin在胞浆胞核表达的荧光强度均较弱,葡萄糖+棕榈酸300 μmol/L+ICG-001+白及多糖组上述指标均逆转.结论 白及多糖可通过激活Wnt/β-catenin通路,促血管生成,从而达到修复糖尿病足溃疡创面的作用.

目的:观察电针对宫腔粘连(IUA)大鼠子宫内膜Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路与上皮间质转化(EMT)相关蛋白的影响,探讨其修复IUA子宫内膜的可能机制.方法:雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、ICG-001组,每组10只.采用机械搔刮联合脂多糖感染双重损伤法制备IUA模型.电针组针刺"关元",电针双侧"足三里""三阴交",20 min/次,1次/d;ICG-001组腹腔注射β-catenin抑制剂ICG-001(5 mg/kg),1次/2 d;以上干预均连续进行3个动情周期.每组5只大鼠干预后取材,HE染色法观察IUA大鼠子宫内膜形态、子宫内膜厚度及腺体数目变化,Masson染色法观察子宫内膜组织纤维化程度,免疫组织化学法检测子宫内膜组织转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、糖原合酶激酶 3β(GSK-3 β)、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的阳性表达,Western blot法检测子宫内膜组织中GSK-3β、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量;每组剩余5只大鼠,干预后与雄鼠合笼,记录各组大鼠子宫胚胎着床数目.结果:HE染色示模型组子宫内膜组织部分坏死或缺失,电针组有所恢复,且较ICG-001组更好.与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜组织腺体数目与子宫内膜厚度,子宫内膜组织中E-cadherin和GSK-3β蛋白表达与阳性表达降低(P<0.000 1,P<0.001,P<0.01),子宫内膜纤维化面积比值,子宫内膜组织中TGF-β1、α-SMA、FN、CTGF、Col-Ⅰ阳性表达,N-cadherin、Vimentin及β-catenin蛋白表达与阳性表达升高(P<0.000 1,P<0.001,P<0.01),胚胎着床数目减少(P<0.000 1);与模型组相比,电针组与ICG-001组大鼠子宫内膜组织腺体数目与子宫内膜厚度,子宫内膜组织E-cadherin与GSK-3β蛋白表达及阳性表达升高(P<0.001,P<0.05,P<0.01),子宫内膜纤维化面积比值,子宫内膜组织TGF-β1、α-SMA、FN、CTGF、Col-Ⅰ阳性表达,N-cadherin、Vimentin、β-catenin蛋白表达与阳性表达降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05),胚胎着床数目增多(P<0.001);与电针组相比,ICG-001组以上指标差异均无统计学意义.结论:电针可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路逆转EMT进程,降低内膜组织纤维化程度,从而促进IUA子宫内膜修复.

目的 探讨不同年龄段儿童无创性心功能检查的正常参考值特点,以及成年人数字心阻抗血流图仪(D-ICG)检查的正常参考值,在儿童的临床应用价值.方法 选择2015年10月至2016年3月,于四川大学华西第二医院PICU住院治疗后,病情平稳、心功能正常的53例儿童为研究对象.根据53例受试者年龄,将其分为3组,分别为婴儿期组(n=23,年龄≤1岁),幼儿及学龄前期组(n=15,年龄>1～6岁),学龄期组(n=15,年龄>6～15岁).在受试者睡眠或安静配合状态下,应用D-ICG检测其心脏功能,获得30余项参数,统计学比较3组受试者各项参数的差异,并与成年人正常参考值进行比较.总结不同年龄阶段儿童D-ICG检查各参数特点,以及成年人D-ICG正常参考值在儿童的临床应用价值.结果 ①3组受试者心功能指标:每搏作功(SW)、每搏作功指数(SWI)、每分作功(CW)、心脏作功指数(CWI)、每搏量(SV)、心搏指数(SI)、心排血量(CO)及心排血指数(CI)比较,差异均有统计学意义(P<0.001),且上述指标均随年龄增加而增加.3组受试者基础阻抗(Z0)和射血分数(EF)比较,差异均无统计学意义(P>0.05).②3组受试者4项心功能指标前、后负荷参数:心舒张末期容积(EDV)、主动脉顺应性(AC)、总外周阻力(TPR)及总外周阻力指数(TPRI)比较,差异均有统计学意义(P<0.001),并且EDV及AC均随年龄增加而增加,T PR及T PRI则减少.③收缩功能参数射血前期(PEP)、射血前期指数(PEPI)、心室射血时间(VET)、心室射血时间指数(VETI)、收缩功能指数(PEP/VET)、总电机械收缩期(TEMS)、Q-C间期(Q-C)、心室快速射血指数(C/B-C)、心肌收缩力指数(HI)、室缩波波幅(Cdz/dtmax),以及舒张功能参数室舒波波幅(Odz/dtmax)、房缩波波幅(WAdz/dtmax)、左室顺应性指标(WA/C)、舒张功能指数(O/C)、等容舒张期(A2-O)共计15项指标中,PEP、VET、PEP/VET、TEMS、Q-C、Cdz/dtmax及A2-O 7项心功能指标3组受试者比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其余8项收缩及舒张功能参数3组受试者比较,差异均无统计学意义(P>0.05).④前述提及的29项心功能指标中,SW、SWI、CW、CWI、SV、SI、CO、CI、EDV、AC、TPR、TPRI、PEP、VET及A2-O共计15项,仅学龄期组受试者的检测结果在成年人正常参考值范围内;其余14项指标,3组受试者的检测结果均基本在成年人正常参考值范围内.⑤相关性分析结果显示:体表面积(BSA)分别与心功能指标EDV(r=0.773,P<0.05),SV(r=0.843,P<0.05)及CO(r=0.839,P<0.05)呈高度正相关关系;Cdz/dtmax分别与HI(r=0.861,P<0.05)及SI(r=0.536,P<0.05)呈正相关关系;心率分别与PEP(r=-0.522,P<0.05),VET(r=-0.536,P<0.05),TEMS(r=-0.815,P<0.05),Q-C(r=-0.594,P<0.05)及A2-O(r=-0.451,P<0.05)呈负相关关系,心率与PEP/VET(r=-0.189,P>0.05)无相关关系.结论 各年龄阶段儿童的心功能指标差异较大.成年人无创性心功能检查的Z0、大部分的心脏收缩及舒张功能参数正常参考值,基本适用于儿童;但其余指标,则需确立不同年龄段儿童的正常参考值范围.

目的 观察Wnt/β-catenin信号通路在肾缺血再灌注大鼠模型中不同时间的表达及ICG-001阻断Wnt/β-catenin信号通路对慢性肾间质纤维化的作用.方法 将SD大鼠分为4组,假手术组(Sham)、IRI 7 d组、IRI 14 d组及ICG+ IRI组.假手术组不夹闭左侧肾动脉;IRI 7 d组、IRI 14 d组及ICG+ IRI组用无创血管夹夹闭左侧肾动脉,35 min后去除血管夹;ICG+IRI组于术后第2天开始腹腔注射ICG-001.检测4组大鼠肾功能,Western blot检测肾组织β-链蛋白(β-catenin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,免疫组化观察β-catenin表达部位,生化染色测胶原含量,Masson染色观察病理改变.结果 与假手术组相比,IRI7 d组Fibronectin、α-SMA、胶原含量无明显增高,病理无明显肾小管间质纤维化;而IRI 14 d组Fibronectin、α-SMA的蛋白表达水平则明显增高,胶原含量增多,肾功能减退,病理显示肾小管间质纤维化.与假手术组相比,IRI7 d组β-catenin表达增高,IRI 14 d组较IRI7 d组增高更显著.与IRI 14 d组相比,ICG+ IRI组β-catenin、Fibronectin、α-SMA的蛋白表达水平明显降低,胶原含量减少,肾功能好转,病理显示肾小管间质纤维化程度减轻.结论 Wnt/β-catenin信号通路在IRI术后7d已激活,早于肾间质纤维化出现;ICG-001阻断Wnt/β-catenin信号通路可减轻肾缺血再灌注所致慢性肾间质纤维化.

目的 探讨AMPA受体增强剂CX546减轻氯胺酮麻醉后神经元活动损伤的作用机制.方法 将36只小鼠随机分成四组并进行处理,分别为:对照组、麻醉组,氯胺酮+ 10 mg/kg CX546组和氯胺酮+20 mg/kg CX546组.通过自主活动能力测试和强迫游泳实验检测氯胺酮及CX546对小鼠神经行为的影响;分离小鼠原代皮质神经元细胞并进行氯胺酮、CX546和Wnt信号通路抑制剂ICG-001处理,采用Western blot和Real-time PCR检测β-catenin及细胞凋亡相关因子的表达,通过TUNEL实验检测皮质神经元细胞的凋亡率.结果 与对照组相比,麻醉组小鼠的悬浮时间更少(P＜0.01);注射CX546后,悬浮时间明显延长(P＜0.01),且氯胺酮+ 20 mg/kg CX546组比氯胺酮+10 mg/kg CX546组更为明显(P＜0.05).5～30 min内,麻醉组小鼠的自主活动量迅速升高;30～60 min内,各组小鼠的自主活动量都逐渐下降,氯胺酮+20 mg/kg CX546组比氯胺酮+ 10 mg/kg CX546组下降更为明显.氯胺酮导致小鼠神经元细胞β-catenin和Bcl-2表达下降,Bax和caspase 3表达上升,细胞凋亡率增加(P＜0.01);CX546提高受氯胺酮抑制的β-catenin的表达,并阻碍氯胺酮对细胞的促凋亡作用,且1μmol/L浓度的CX546效果较0.5μmol/L的更显著(P＜0.01).与未加ICG-001的氯胺酮处理组相比,ICG-001和氯胺酮处理神经元细胞导致3-catenin和Bcl-2表达下降,Bax和caspase 3表达上升,细胞凋亡率升高(P＜0.01);CX546能让ICG-001和氯胺酮处理的神经元细胞中Bcl-2表达上调,Bax和caspase 3表达下降,但对β-catenin表达及细胞凋亡率无明显改变.结论 CX546保护氯胺酮麻醉后神经元细胞损伤的作用机制,即通过激活Wnt/β-catenin信号从而抑制神经元细胞的凋亡,为CX546用于麻醉后神经元损伤的保护提供新的依据.

目的 观察黄芪总皂甙(TSA)调控体外培养大鼠神经干细胞(NSCs)向神经元方向分化的作用及其有效浓度,并研究其Wnt/β-catenin信号通路相关机制.方法 新生24 h大鼠大脑皮层来源NSCs进行原代、传代培养并鉴定,通过CCK-8试剂盒初筛TSA诱导分化的可能有效浓度.取第三代NSCs,设不加TSA的正常组和不同浓度TSA实验组,分化培养7 d后,间接免疫荧光法和Western blotting检测微管相关蛋白2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.另设正常组、最佳浓度TSA组、TSA+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001组和ICG-001组,分化培养7 d后,West-ern blotting检测各组Wnt3/3a、β-catenin和抗神经原素1(Ngn1)蛋白表达.结果 TSA在浓度1×10-4 mol/L、1×10-5 mol/L、1×10-6 mol/L时,NSCs数量显著增加(P<0.001).TSA能增加NSCs分化为神经元的比例,1×10-5 mol/L最佳(P<0.05).TSA能上调Wnt3/3a、β-catenin与Ngn1蛋白的表达(P<0.05).结论 TSA能促进体外培养NSCs向神经元方向分化,与激活Wnt/β-catenin信号通路,从而调控该通路下游促分化靶向蛋白Ngn1的表达有关.TSA最佳促神经元方向分化浓度约为1×10-5 mol/L.

目的 研究建立联合血管内皮生长因子C的非血管化淋巴结移植的免疫缺陷动物模型.方法 将45只SPF级免疫缺陷裸小鼠随机平均分为实验组A、实验组B、正常对照组,每组15只.实验组A、实验组B均进行双侧乳腺脂肪垫切除,双腋下淋巴结清扫,实验组A行单纯淋巴结游离移植,实验组B行联合血管内皮生长因子C的淋巴结游离移植;正常对照组乳腺脂肪垫、双腋下淋巴结均未予处理.术后1、2、6个月,每组5只裸小鼠进行小动物ICG荧光成像动态观察淋巴结再生,HE常规染色评估淋巴结再生情况,淋巴管内皮透明质酸受体-1免疫荧光检查定性定量分析皮肤淋巴管的表达.结果 术后1个月,小动物ICG免疫荧光检查可见实验组B裸小鼠右腋下淋巴结显影(5/5),实验组A裸小鼠右腋下淋巴结均未见显影(0/5);术后2、6个月结果相同.HE染色显示实验组B裸小鼠右腋下再生淋巴结皮质区、副皮质区、髓质区结构清晰,淋巴管结构存在,伴有淋巴细胞浸润现象.右上肢皮肤免疫荧光染色可见实验组B淋巴管内皮透明质酸受体-1表达较实验组A(P<0.001)、对照组(P<0.001)明显增高,差异有统计学意义.结论 联合血管内皮生长因子C的淋巴结碎片化移植可在裸小鼠腋窝进行,术后1个月即可实现淋巴结再生,且再生结构长期稳定,为后续实验提供稳定的动物模型.