目的 本研究旨在验证一种自主研发的新型便携式体外膜肺氧合(ECMO)系统(西京高级生命支持系统JC-Ⅲ型)在大动物体内的安全性和有效性.方法 共计10只健康小尾寒羊通过颈动脉-颈静脉插管方式进行静脉-动脉体外膜肺氧合(VA-ECMO)支持,以评价JC-Ⅲ型ECMO系统的性能.通过持续输注肝素实现全身抗凝,转机过程中每2 h记录1次活化凝血时间(ACT),维持ACT在200～250 s之间;离心泵转速设定在3 000～3 500 r/min.分别于ECMO启动前和启动后24 h监测血红蛋白、血细胞计数、凝血、肝肾功能、心肌损伤等指标变化情况,实验结束后解剖泵头和氧合器,探查血栓形成情况.结果 VA-ECMO手术成功率为100％,ECMO转机24 h,流量波动于1.9～2.5 L/min,未发生溶血、泵头血栓、膜肺血栓.ECMO转机前后血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素、肌酐、高敏肌钙蛋白Ⅰ、N末端B型脑钠肽前体等指标差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 本在体动物实验证实了西京高级生命支持系统JC-Ⅲ型的安全性和有效性.

目的 探究微囊蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)通过调节铁死亡介导的线粒体稳态来对2型糖尿病(T2DM)伴发高血压大鼠肾功能损伤的改善作用.方法 于2021年5月至2022年5月采用自发性高血压大鼠(SHR)建立T2DM大鼠模型,将大鼠按随机数字表法分为对照组、SHR+T2DM组、pCDNA3.1(+)-NC组和pCDNA3.1(+)-Cav-1组,每组10只.测定大鼠收缩压、空腹血糖值(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白(GHbA1C)浓度、评价胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血肌酐、尿素氮含量,并计算尿清蛋白与肌酐比值(UACR)HE染色检测肾组织病理学变化;检测肾组织中亚铁离子(Fe2+)、丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;二氢乙锭(DHE)荧光染色法检测肾组织中活性氧水平;线粒体膜电位荧光探针(JC-1法)检测肾组织中线粒体膜电位(MMP)水平;蛋白质印迹法检测肾组织中谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、x-CT蛋白表达.结果 SHR+T2DM组收缩压(189.46±7.51)mmHg、FBG(23.46±1.28)mmol/L、FINS(1.62±0.15)mU/L、HOME-IR(1.52±0.13)、GHbA1C(689.31±45.81)nmol/L、血肌酐(83.69±4.25)mmol/L、尿素氮(19.32±2.54)mmol/L、UACR(76.51±8.09)、Fe2+(0.45±0.05)mg/g、丙二醛(58.32±3.26)nmol/L、活性氧含量23.46±1.84均高于对照组[(110.34±5.26)mmHg、(5.12±0.94)mmol/L、(0.68±0.07)mU/L、0.31±0.04、(310.48±23.26)nmol/L、(32.08±3.61)mmol/L、(6.89±1.86)mmol/L、8.31±0.94、(0.13±0.02)mg/g、(15.68±2.15)nmol/L、1.31±0.23],SOD活性(11.56±1.62)U/mg、MMP水平0.25±0.03、GPX4(0.35±0.04)和x-CT蛋白0.51±0.06表达均低于对照组[(35.61±2.17)U/mg、0.62±0.08、1.00±0.10、1.00±0.09](P<0.05);和SHR+T2DM组相比,pCDNA3.1(+)-Cav-1组收缩压(136.27±6.09)mmHg、FBG(10.37±1.05)mmol/L、FINS(0.91±0.10)mU/L、HOME-IR(0.64±0.08)、GHbA1C(426.17±25.94)nmol/L、血肌酐(51.36±3.87)mmol/L、尿素氮(10.71±2.18)mmol/L、UACR(38.62±4.18)、Fe2+(0.18±0.03)mg/g、丙二醛(21.39±2.64)nmol/L、活性氧含量5.47±1.06均明显降低,SOD活性(29.83±1.94)U/mg、MMP水平0.51±0.06、GPX4(0.86±0.09)和x-CT蛋白0.91±0.08表达升高(P<0.05).结论 Cav-1可通过抑制铁死亡来维持线粒体功能的稳态,进而对T2DM合并SHR大鼠的肾组织发挥保护作用.

目的 探讨藻红蛋白(PE)对HeLa细胞生长和凋亡的影响及其机制.方法 从龙须菜中获得高纯度PE,用PE 0、5、10、20、40 mg/L处理宫颈癌HeLa细胞,采用MTT法检测细胞生长,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡,流式细胞术测定细胞凋亡,细胞膜电位探针JC-1染色检测线粒体膜电位,实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞凋亡相关基因和蛋白表达情况.结果与PE 0mg/L比较,PE 10、20、40 mg/L呈浓度依赖性地抑制HeLa细胞生长,增加晚期凋亡率和总凋亡率,上调Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA表达和剪切型Caspase-3蛋白表达(P＜0.05).与PE 0 mg/L比较,PE 20、40 mg/L处理24 h后细胞核凋亡率升高,PE 10、20和40 mg/L处理48 h后细胞核凋亡率升高,且48 h比24 h更明显(P＜0.05).与PE 0、10 mg/L比较,PE 20、40 mg/L处理后HeLa细胞线粒体膜电位降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调,CytC蛋白表达上调,且PE 40 mg/L较PE 20 mg/L更明显(P＜0.05).结论PE能呈浓度依赖性地抑制HeLa细胞生长,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低细胞线粒体膜电位和调控线粒体凋亡通路相关蛋白的表达有关.

目的:评价胰高血糖素样肽-1和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽双受体激动剂DA-JC4对老龄大鼠术后神经炎症反应的影响。方法:清洁级健康SD大鼠45只，雌雄不拘，21～23月龄，体重530～630 g，采用随机数字表法分为3组( n＝15)：假手术组(S组)、外科手术组(O组)和DA-JC4组(G组)。O组和G组水合氯醛麻醉下行剖腹探查术。G组分别于术毕即刻、术后24和48 h时腹腔注射DA-JC4 10 nmol/kg(溶于1 ml无菌生理盐水)。术后第3天采用Western blot法测定海马Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、IL-1β和TNF-α的表达水平。术后第14-18天行Morris水迷宫实验测试认知功能。 结果:与S组比较，O组术后第15-18天、G组术后第18天逃离潜伏期延长，O组和G组穿越原平台次数减少，目标象限停留时间缩短，海马活化的caspase-3、Bax、LC3Ⅱ、HMGB1、IL-1β和TNF-α表达上调，Bcl-2、LC3Ⅱ和Beclin-1表达下调( P<0.05)；与O组比较，G组术后第15-18天逃离潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，目标象限停留时间延长，海马活化的caspase-3、Bax、HMGB1、IL-1β和TNF-α表达下调，Bcl-2、LC3Ⅱ和Beclin-1表达上调( P<0.05)。 结论:DA-JC4减轻老龄大鼠术后认知功能障碍的机制可能与抑制神经炎症反应有关。

目的:探讨短链脂肪酸（SCFA）对缺氧诱导的胰腺星状细胞（PSCs）氧化应激和活化的调控作用。方法:常氧及缺氧培养PSCs建立常氧组和缺氧组，SCFA工作液（10 mmol/L乙酸钠、0.5 mmol/L丙酸钠及0.5 mmol/L丁酸钠）和生理盐水分别预处理PSCs后进行缺氧培养建立缺氧SCFA组和缺氧对照组。采用CCK-8法检测各组PSCs生长活力，采用DCFH-DA荧光探针法检测PSCs活性氧（ROS）的相对水平，JC-1荧光探针检测线粒体膜电位的变化，蛋白质免疫印迹法检测PSCs周期相关蛋白cyclin A和cyclin D、缺氧标志蛋白HIF1α、活化标志蛋白α-SMA及抗氧化蛋白NRF2和HO-1的表达。结果:缺氧组PSCs在培养48 h时的相对活力显著高于常氧组（1.23±0.05比0.99±0.04），而缺氧SCFA组在培养36 h和48 h时的相对活力均显著低于缺氧对照组（0.69±0.01比0.86±0.03，0.86±0.02比1.25±0.05）。缺氧组ROS相对水平显著高于常氧组（1.74±0.11比1.00±0.10），而缺氧SCFA组ROS相对水平显著低于缺氧对照组（1.39±0.14比1.66±0.11）。缺氧组JC-1聚合体的荧光信号明显高于常氧组（1.36±0.05比1.00±0.11），而缺氧SCFA组JC-1聚合体的荧光信号明显低于缺氧对照组（1.11±0.03比1.32±0.06）。缺氧组cyclin A、cyclin D、HIF1α、α-SMA、NRF2和HO-1表达量显著高于常氧组（1.19±0.01比0.63±0.02，0.93±0.02比0.83±0.03，1.18±0.07比0.41±0.02，1.19±0.14比0.66±0.04，1.22±0.11比0.61±0.04，1.28±0.12比0.68±0.02），而缺氧SCFA组cyclin A、cyclin D、α-SMA、NRF2和HO-1的表达量显著低于缺氧对照组（0.79±0.04比1.15±0.03，0.88±0.01比0.95±0.03，0.87±0.01比1.18±0.05，0.84±0.01比1.22±0.04，0.92±0.02比1.27±0.06）。以上差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。 结论:SCFA显著改善缺氧状态下PSCs的氧化应激状态，维持线粒体膜电位的稳定，抑制缺氧诱导的PSCs活化。

目的:探索长链非编码RNA B230352I09基本生物学特征及其在心肌损伤过程中的作用。方法:利用UCSC网站（http://genome.ucsc.edu）分析lncRNA B230352I09的生物学特征；通过catRAPID预测B230352I09可能结合蛋白；使用实时荧光定量（RT）PCR方法检测lncRNA B230352I09在小鼠出生后7 d内不同时间点（0、1、3、7ｄ）的心脏组织中的表达情况；lncRNA B230352I09在新生小鼠器官分布表达情况；lncRNA B230352I09在心肌损伤小鼠心脏中的表达规律。培养原代心肌细胞，构建缺氧模型，采用Hoechst染色试剂盒检测lncRNA B230352I09过表达对缺氧心肌细胞凋亡的影响；DCFDA探针法检测lncRNA B230352I09过表达对缺氧心肌细胞ROS含量影响；JC-1荧光探针检测缺氧心肌细胞线粒体膜电位变化。结果:LncRNA B230352I09在小鼠基因组定位于7号染色体:123031415-123066439 forward strand，全长663 bp。与该lncRNA相邻基因为Rbbp6。通过catRAPID预测lncRNA结合蛋白显示Rbbp6可能为B230352I09的作用靶标。随着心脏发育，lncRNA B230352I09表达水平呈逐渐下降趋势。lncRNA B230352I09在新生1 d小鼠心、脑、肾、肝组织中均有表达；进一步取心脏组织提取心肌细胞检测发现lncRNA B230352I09在非心肌细胞中的表达量明显少于心肌细胞[(1.0±0.03) vs. (9.2±3.29)， P=0.013]。lncRNA B230352I09在心肌损伤后表达水平随时间呈现逐渐下降趋势，而相对正常发育小鼠lncRNA B230352I09表达量增多，但差异无统计学意义。Hoechst染色发现lncRNA B230352I09可抑制缺氧后心肌细胞凋亡；检测心肌细胞ROS的含量显示，和缺氧组比较，lncRNA B230352I09过表达组心肌细胞ROS生成明显减少([(3.8±0.71) vs. (1.65±0.56)， P=0.015])；使用JC-1荧光探针检测线粒体的膜电位，结果显示lncRNA B230352I09过表达组心肌细胞线粒体膜电位较缺氧组明显增高。 结论:LncRNA B230352I09在心脏组织中主要表达于心肌细胞；在小鼠心肌损伤过程中具有保护作用，主要通过减少心肌细胞凋亡、减少ROS生成、保护心肌细胞线粒体膜电位发挥作用。

目的:探索长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）LINC01133对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSC）成牙骨质分化潜能的影响及其作用机制。方法:收集2021年9月至2022年1月第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科17~30岁10例就诊患者因正畸需要或因阻生拔除的牙齿共12颗，从离体牙上提取hPDLSC，分别转染靶向LINC01133小干扰RNA（small interfering RNA-LINC01133，si-LINC01133）或阴性对照小干扰RNA（small interfering RNA-negative control，si-NC），以转染si-LINC01133为实验组，转染si-NC为阴性对照组。利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）检测si-LINC01133的沉默效率；通过蛋白质印迹法检测hPDLSC成牙骨质分化相关蛋白包括骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP）、牙骨质附着蛋白（cementum attachment protein，CAP）、牙骨质蛋白1（cementum protein-1，CEMP-1）的表达；利用流式细胞术和线粒体超氧化物指示剂MitoSOX检测细胞线粒体活性氧产量；通过JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位水平；利用蛋白质印迹法检测线粒体呼吸链复合体蛋白包括NADH脱氢酶［泛醌］1β亚单位8（NADH dehydrogenase［ubiquinone］1 beta subcomplex subunit 8，NDUFB8）、琥珀酸脱氢酶亚单位A（succinate dehydrogenase complex flavoprotein subunit A，SDHA）、泛醌-细胞色素c还原酶核心蛋白1（ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1，UQCR1）、细胞色素c氧化酶亚单位4亚型1（cytochrome c oxidase subunit 4 isoform 1，COXⅣ）、ATP合成酶F1亚单位α（ATP synthase F1 subunit alpha，ATP5A）的表达水平。结果:hPDLSC的LINC01133表达水平被si-LINC01133有效沉默（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.385±0.128）（ t=10.72， P<0.01），沉默效率超过60%。LINC01133沉默后，hPDLSC BSP表达水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.664±0.179）（ t=4.62， P<0.01）；CAP表达水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.736±0.229）（ t=2.83， P<0.05）。LINC01133沉默后，hPDLSC线粒体活性氧产量显著上升（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：1.458±0.185） （t=4.96， P<0.05）；线粒体膜电位水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.209±0.029）（ t=53.99， P<0.01）；NDUFB8表达水平显著上升（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：1.683±0.397）（ t=3.45， P<0.05）；SDHA表达水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.428±0.228）（ t=5.02， P<0.05）。实验组UQCR1、COXⅣ和ATP5A的表达水平与阴性对照组相比差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:LINC01133可能通过调控hPDLSC线粒体功能，进而影响hPDLSC成牙骨质分化潜能。

目的:评价艾司氯胺酮对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及其与线粒体应激的关系。方法:实验Ⅰ　SPF级雄性C57BL/6小鼠18只，8～12周龄，体质量28～30 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和艾司氯胺酮＋脑缺血再灌注组(E＋IR组)。采用大脑中动脉栓塞1 h，再灌注24 h的方法制备脑缺血再灌注损伤模型；E组造模前20 min腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg。采用Zea Longa评分及平衡木实验(Feeney评分)评估小鼠神经功能；TTC染色法测定脑梗死体积。实验Ⅱ　将原代皮层神经元采用随机数字表法分为3组( n＝42)：对照组(C组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)和艾司氯胺酮＋OGD/R组(E＋OGD/R组)。采用氧糖剥夺1 h，复氧复糖24 h的方法制备OGD/R模型。E＋OGD/R组加入25 μmol/L艾司氯胺酮处理40 min后制备模型。采用CCK-8法检测神经元活力，透射电镜下观察神经元超微结构，检测ROS、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和MDA的水平，JC-1试剂盒检测线粒体膜电位，TUNEL染色法测定神经元凋亡率，Western blot法测定Bax、细胞色素C(Cyt C)、cleaved-caspase-9、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达。 结果:实验Ⅰ　与S组相比，IR组Zea Longa评分、Feeney评分和脑梗死体积升高( P<0.01)；与IR组相比，E＋IR组Zea Longa评分、Feeney评分和脑梗死体积降低( P<0.01)。实验Ⅱ　与C组相比，OGD/R组神经元活力和GSH-px活性降低，神经元凋亡率、ROS、MDA水平、线粒体膜电位和cleaved-caspase-3/caspase-3比值升高，Bax、Cyt C和cleaved-caspase-9表达上调( P<0.01)；与OGD/R组相比，E＋OGD/R组神经元活力和GSH-px活性升高，神经元凋亡率、ROS、MDA水平、线粒体膜电位和cleaved-caspase-3/caspase-3比值降低，Bax、Cyt C和cleaved-caspase-9表达下调( P<0.01)。 结论:艾司氯胺酮可减轻小鼠脑缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制神经元线粒体应激，改善线粒体功能，抑制线粒体途径的神经元凋亡有关。

Background::Pulmonary microvascular endothelial cells (PMVECs) were not complex, and the endothelial barrier was destroyed in the pathogenesis progress of acute lung injury (ALI)/acute respiratory distress syndrome (ARDS). Previous studies have demonstrated that hepatocyte growth factor (HGF), which was secreted by bone marrow mesenchymal stem cells, could decrease endothelial apoptosis. We investigated whether mTOR/STAT3 signaling acted in HGF protective effects against oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis in lipopolysaccharide (LPS)-induced endothelial barrier dysfunction and ALI mice.Methods::In our current study, we introduced LPS-induced PMEVCs with HGF treatment. To investigate the effects of mammalian target of rapamycin (mTOR)/signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) pathway in endothelial oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis, mTOR inhibitor rapamycin and STAT3 inhibitor S3I-201 were, respectively, used to inhibit mTOR/STAT3 signaling. Moreover, lentivirus vector-mediated mTORC1 (Raptor) and mTORC2 (Rictor) gene knockdown modifications were introduced to evaluate mTORC1 and mTORC1 pathways. Calcium measurement, reactive oxygen species (ROS) production, mitochondrial membrane potential and protein, cell proliferation, apoptosis, and endothelial junction protein were detected to evaluate HGF effects. Moreover, we used the ALI mouse model to observe the mitochondria pathological changes with an electron microscope in vivo.Results::Our study demonstrated that HGF protected the endothelium via the suppression of ROS production and intracellular calcium uptake, which lead to increased mitochondrial membrane potential (JC-1 and mitochondria tracker green detection) and specific proteins (complex I), raised anti-apoptosis Messenger Ribonucleic Acid level (B-cell lymphoma 2 and Bcl-xL), and increased endothelial junction proteins (VE-cadherin and occludin). Reversely, mTOR inhibitor rapamycin and STAT3 inhibitor S3I-201 could raise oxidative stress and mitochondria-dependent apoptosis even with HGF treatment in LPS-induced endothelial cells. Similarly, mTORC1 as well as mTORC2 have the same protective effects in mitochondria damage and apoptosis. In in vivo experiments of ALI mouse, HGF also increased mitochondria structural integrity via the mTOR/STAT3 pathway. Conclusion::In all, these reveal that mTOR/STAT3 signaling mediates the HGF suppression effects to oxidative level, mitochondria-dependent apoptosis, and endothelial junction protein in ARDS, contributing to the pulmonary endothelial survival and barrier integrity.

目的:探讨X盒结合蛋白1（XBP1）调控硫氧还蛋白互作蛋白-NOD样受体3（TXNIP-NLRP3）通路对小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）缺氧复氧（H/R）模型的影响及其作用机制。方法:根据干预的不同将细胞分为4组：si-NC组：转染小干扰RNA（siRNA）阴性对照（si-NC）；si-XBP1组：转染靶向沉默XBP1的siRNA（si-XBP1）；si-NC+H/R组：转染si-NC后H/R处理；si-XBP1+H/R组：转染si-XBP1后H/R处理。磷脂结合蛋白Ⅴ/碘化丙啶双标染色法检测细胞凋亡，JC-1探针染色法检测线粒体膜电位（MMP），MitoSOX?探针染色法检测线粒体活性氧（mROS），Western印迹和实时定量PCR检测XBP1的蛋白质和mRNA水平以验证干扰效率，Western印迹检测TXNIP、NLRP3和白细胞介素-1β（IL-1β）的蛋白质水平变化，免疫荧光法检测线粒体和TXNIP共定位变化。使用独立样本 t检验比较组间差异。 结果:与si-NC组相比，si-NC+H/R组细胞凋亡率较高，mROS产生较多，MMP较低；与si-NC+H/R组相比，si-XBP1+H/R组细胞凋亡率较低（12.08±0.51比19.01±1.80， P<0.05），mROS产生较少（34.63±0.64比48.17±1.84， P<0.01），MMP较高（1.03±0.11比0.45±0.08， P<0.05）；在H/R时干扰XBP1U（蛋白质：1.31±0.18比0.23±0.02， P<0.01；mRNA：1.12±0.07比0.38±0.01， P<0.001）和XBP1S（蛋白质：1.13±0.17比0.28±0.07， P<0.01；mRNA：8.39±0.63比2.45±0.22， P<0.001）表达后，TXNIP（0.15±0.02比0.04±0.01， P<0.01）、NLRP3（1.13±0.12比0.51±0.12， P<0.05）、IL-1β（1.02±0.04比0.19±0.06， P<0.001）蛋白质的表达更低，同时，线粒体和TXNIP的共定位水平也更低。 结论:抑制XBP1表达能够减轻TCMK-1的H/R损伤，其机制可能是通过抑制TXNIP介导的NLRP3炎症小体的活化。