目的:了解江苏省腹泻患者临床分离耶尔森菌的分布特点及分子特征。方法:2017-2021年，在小肠结肠炎耶尔森菌国家级主动监测点江苏省徐州市铜山区和盐城市东台市，采集腹泻患者粪便标本，进行耶尔森菌菌株分离；同时，收集全省哨点医院疑似耶尔森菌菌株。提取分离菌株DNA进行全基因组重测序，并上传至EnteroBase数据库进行耶尔森菌种型鉴定，原始数据经清洁和处理后进行16S核糖体RNA（16S rRNA）基因多态性分析；通过美国国家生物技术信息中心（NCBI）和病原菌毒力因子数据库（VFDB）扫描5种毒力基因（ail、ystA、ystB、yadA、virF）携带情况，同时构建K-mer树并进行基因组特征分析。结果:2017-2021年，共采集腹泻患者粪便标本2 058份，经分离鉴定，得到57株耶尔森菌；同时，通过哨点医院收集到2株耶尔森菌。经EnteroBase数据库比对，51株菌为小肠结肠炎耶尔森菌，4株菌为 Yersinia proxima，阿利克西奇耶尔森菌、马赛耶尔森菌、中间耶尔森菌及 Yersinia canariae各1株。16S rRNA基因多态性分析显示，全部菌株被聚类为3个大组，可区分小肠结肠炎耶尔森菌和其他耶尔森菌。51株小肠结肠炎耶尔森菌中，49株为毒力基因Ⅲ型（ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-），2株为毒力基因Ⅱ型（ail+、ystA+、ystB-、yadA-、 virF-）；8株其他耶尔森菌均为毒力基因Ⅳ型（ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-）。K-mer分析可区分小肠结肠炎耶尔森菌和其他耶尔森菌，JS-XZ-2020001菌株与其他小肠结肠炎耶尔森菌距离较远，血清型为O8的小肠结肠炎耶尔森菌分布较集中。 结论:江苏省腹泻患者临床分离耶尔森菌以小肠结肠炎耶尔森菌为主，其他耶尔森菌少量并存，同时发现了 Yersinia proxima和 Yersinia canariae两个耶尔森菌新种型。小肠结肠炎耶尔森菌的毒力基因携带以Ⅲ型为主。16S rRNA基因多态性分析和K-mer分析均可有效区分小肠结肠炎耶尔森菌和其他耶尔森菌。

目的:在乙型肝炎病毒(HBV)阳性肝癌鸡胚移植模型中,探讨一氧化氮供体JS-K对肿瘤细胞生长的影响.方法:将HBV阳性肝癌细胞HepG2.2.15接种于9日龄受精鸡胚中,按照处理方式不同分为5组:阴性对照组,JS-K低、中、高剂量组(1、5、10 μg/个),索拉非尼(Sora)组(400μg/个),每组各3只.2 d后按分组给药,给药采用直接滴加于移植瘤上的方式,1次/d,连续8 d.实验结束后取出鸡胚移植瘤,观察各组移植瘤大小,拍照并称重,采用HE染色法观察各组JS-K对肿瘤细胞的影响;采用免疫印迹法检测肿瘤组织中迁移相关蛋白Vimentin及N-Cadherin的表达情况.结果:与对照组相比,不同剂量JS-K作用后,鸡胚移植瘤体积均明显减小,其中JS-K高剂量组肿瘤体积最小(P＜0.05);HE染色可见JS-K作用后瘤细胞数量明显减少;JS-K低剂量组鸡胚移植瘤波形蛋白Vimentin表达水平高于其他组,N-cadherin表达水平低于其他组(P＜0.05).结论:JS-K对HBV阳性肝癌鸡胚移植瘤具有抑瘤作用,该效应可能与抑制鸡胚移植瘤细胞迁移有关.

目的:探讨一氧化氮(NO)前体化合物(JS-K)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)H157 和 CAL-27 细胞增殖与凋亡的影响,并分析相关机制.方法:采用细胞活力与平板克隆实验检测JS-K 对 OSCC细胞增殖能力的影响.采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,以及半胱氨酸蛋白酶 3/7(Caspase-3/7)活性测定评估JS-K 对 OSCC细胞周期与凋亡的影响.检测JS-K干预后OSCC细胞中ROS生成情况.采用亚细胞分离技术与Western blot探索JS-K诱导 OSCC细胞周期停滞与细胞凋亡的机制.结果:JS-K 通过 p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制OSCC细胞的增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞.此外,JS-K 激活的 p38 MAPK 信号通路导致 OSCC 细胞中ROS增加,并诱导细胞周期阻滞在 G2/M期.结论:JS-K 通过 p38 MAPK 信号通路调控 ROS,诱导 OSCC细胞周期阻滞在 G2/M期并凋亡,最终抑制 OSCC细胞增殖.JS-K可能为一种治疗 OSCC的潜在药物.

患者,男性,50岁.因无明显诱因出现左侧腰部酸胀及疼痛10余天入院.专科检查左肾区轻度叩击痛,输尿管区无明显压痛.入院后在全麻下行"左侧输尿管镜检查+经输尿管镜左输尿管扩张术+左输尿管活检术+经输尿管镜输尿管支架置入术",术中见左侧输尿管开口区域隆起呈息肉状和滤泡状增生,触之易出血,壁内段狭窄,狭窄段长约5 mm,并可见大量黄白色物附着及2 mm的细小钙化灶,周围黏膜充血水肿,余未见特殊,钳取少许狭窄段组织送病理活检.[1]Sipe JD,Cohen AS.Review:history of the amyloid fibril[J].J Struct Biol,2000,130(2-3):88-98.[2]U-N.里德,M.维尔纳,H-E.舍费尔.里德病理学[M].武忠弼,译.上海:上海科学技术出版社,2007:44-48.[3]Sipe JD,Benson MD,Buxbaum JN,et al.Nomenclature committee of the international society of amyloidosis.Amyloid fibril protein nomenclature:2012 recommendations from the nomenclature committee of the international society of amyloidosis[J].Amyloid,2012,19(4):167-170.[4]Monge M,Chavveav D,Cordonnier C,et al.Localized amyloidosis of the genitourinary tract:report of 5 new cases and review of the literature[J].Medicine(Baltimore),2011,90(3):212-222.[5]Hanna DN,Levy JA,Marshall JS.Amyloidosis and acute hemorrhage of the kidney,ureter,and bladder[J].Can J Urol,2017,24(4):8934-8936.[6]Wes termark P.Localized AL amyloidosis:a suicidal neoplasm?[J]Ups J Med Sci,2012,117(2):244-250.[7]Ezawa N,Katoh N,Oguchi K,et al.Visualization of multiple organ amyloid involvement in systemic amyloidosis using 11C-PiB PET imaging[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging,2018,45(3):452-461.[8]García Rojo E,González Padilla DA,Castelo Loureiro A,et al.New case of secondary bladder amyloidosis with massive hematuria-role of intravesical instillations with dimethyl sulfoxide[J].Transl Androl Urol,2019,8(5):548-555.[9]Fushimi T,Takei Y,Touma T,et al.Bilateral localized amyloidosis of the ureters:clinicopathology and therapeutic approaches in two cases[J].Amyloid,2004,11(4):260-264.

目的 研究JS-K对人结肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度JS-K处理HCT116细胞48 h后,采用MTS法检测JS-K对HCT116细胞增殖活性的影响;PI单染流式细胞术检测JS-K对HCT116细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测JS-K对HCT116细胞凋亡的影响;Texas Red-X鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架形态;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2家族基因mRNA表达.结果 JS-K对人结肠癌细胞HCT116增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05).JS-K诱导HCT116细胞被阻滞在G2/M期(P<0.05).JS-K可致HCT116细胞发生晚期凋亡(P<0.05).JS-K可改变HCT116细胞骨架形态、微丝结构与分布.随着JS-K浓度增加,促凋亡基因Bax、Bik、Bim、Puma mRNA相对表达量上调,抗凋亡基因Mcl-1 mRNA相对表达量下调(P<0.05).结论 JS-K对人结肠癌HCT116细胞增殖有明显抑制作用,通过调节Bcl-2家族基因表达,阻滞细胞G2/M期,促进细胞发生晚期凋亡.

目的 探讨偶氮鎓二醇盐衍生物O2(2,4-二硝基苯基)1-〔(4-乙氧羰基)哌嗪-1-yl〕偶氮-1-鎓-1,2-二醇(JS-K)对大鼠原发性肝癌的影响.方法 Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(ip,生理盐水10 mL·kg-1,连续16周)、模型组〔ip,二乙基亚硝胺(DEN)50 mg·kg-1,前4周每周2次,4周后每周1次,连续16周〕、JS-K 0.25和0.50 mg·kg-1组〔(ip,DEN 50 mg·kg-1)+(尾静脉注射,JS-K 0.25或0.50 mg·kg-1),每周2次,在DEN注射后第2天给药,连续16周〕.计数大鼠肝肿瘤结节数并称量瘤质量;比色法测定血清γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸含量;HE染色观察肝组织病理变化;ELISA检测血清甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)和异常凝血酶原(APT)含量;Gomori银染法检测肝组织网状纤维水平;免疫组化法检测肝组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达;Western印迹法检测肝组织中促细胞丝裂原细胞外激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白表达水平.结果 给药16周后,与正常对照组相比,模型组肝肿瘤结节数和瘤质量显著增加,血清γ-GT和AKP活性及羟脯氨酸含量明显升高(P<0.01);肝小叶结构破坏区域增加,细胞出现多核、核固缩、核内空泡等现象;AFP,AFP-L3和APT水平明显升高(P<0.05,P<0.01);网状纤维塌陷、融合、包裹形成假小叶;肝组织ERK,MEK和P90RSK磷酸化水平均明显升高(P<0.01).与模型组相比,JS-K各给药组大鼠肝肿瘤结节数和瘤质量显著减少(P<0.05,P<0.01);血清中γ-GT和AKP活性及羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01);肝小叶结构相对较好,癌细胞分化程度高;AFP,AFP-L3和APT含量明显降低(P<0.05,P<0.01);网状纤维阳性表达区显著减少(P<0.01),大鼠肝组织ERK,MEK和P90RSK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01).结论 偶氮鎓二醇盐衍生物通过抑制MEK/ERK通路干预肝纤维化进程,从而对大鼠原发性肝癌具有一定的抑制作用.

目的 研究一氧化氮(NO)供体JS-K经蛋白磷酸酶2A(PP2A)调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制.方法 设立细胞对照组(二甲亚砜<0.01％)、JS-K 2.5,5.0和10.0μmol·L-1组、LY294002(PI3K抑制剂)10μmol·L-1组、冈田酸(OA)(PP2A抑制剂)1 nmol·L-1组、2-(4-羧苯基)-4,4,5,5-四甲基咪唑烷-1-氧-3-氧化钾(羧基-PTIO)50μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组,处理HepG2细胞24 h,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹法检测PP2A蛋白磷酸化水平及PI3K、Akt和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白磷酸化水平.结果 DAPI染色结果显示,与细胞对照组相比,JS-K 2.5～10.0μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组具有细胞染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征的细胞数增加.与JS-K 10.0μmol·L-1组相比,JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组凋亡特征的细胞数增加,JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组凋亡特征的细胞数减少.流式结果显示,与细胞对照组相比,JS-K 2.5～10.0μmol·L-1、JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组细胞凋亡率明显增加(P<0.01).与JS-K 10.0μmol·L-1组相比,JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组细胞凋亡率显著下降(P<0.01).Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,OA 1 nmol·L-1组PP2A蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05),JS-K 2.5,5.0和10.0μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组PP2A蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05,P<0.01);PI3K,Akt和mTOR蛋白磷酸化水平均显著降低(P<0.05,P<0.01).与JS-K 10.0μmol·L-1组相比,JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组PP2A蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.01);JS-K 10.0μmol·L-1+LY29400210μmol·L-1组PI3K、Akt和mTOR蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),JS-K 10.0μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组、JS-K 10.0μmol·L-1+羧基-PTIO 50μmol·L-1组细胞PI3K,Akt和mTOR蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 NO供体JS-K通过在HepG2细胞内释放NO,降低PP2A磷酸化水平而活化PP2A,进一步降低PI3K,Akt和mTOR蛋白磷酸化水平,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路而诱导肝癌细胞凋亡.

目的 研究一氧化氮供体(JS-K)与阿司匹林联合用药协同诱导人肝细胞癌(肝癌)HepG2和SMMC7721细胞凋亡的作用.方法 人肝癌HepG2和SMMC7721细胞分别设立细胞对照组(只加等量二甲亚砜,终浓度<0.01％)、JS-K 5μmol·L-1组、阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组、JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10,20 mmol·L-1组.MTT法检测细胞增殖抑制率并计算联合用药指数(CI);倒置显微镜下观察细胞形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率.2种细胞分为6组:细胞对照、JS-K 5μmol·L-1、阿司匹林20 mmo·L-1、Z-VAD-FMK 50μmol·L-1、JS-K+阿司匹林和JS-K+阿司匹林+Z-VAD-FMK组,给药后处理24 h.DAPI染色观察细胞核形态变化;Western印迹法检测活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达.结果 与JS-K 5μmol·L-1组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组HepG2和SMMC7721细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05,P<0.01),且具有一定的协同作用(CI<1).JS-K 5μmol·L-1组、阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组、JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10和20 mmol·L-1组细胞扁圆,生长迟缓,形态不规则,脱落并悬浮于培养液中.与JS-K 5μmol·L-1组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林5,10,20 mmol·L-1组细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01).DAPI染色结果显示,与JS-K 5μmol·L-1单药组或阿司匹林20 mmol·L-1单药组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林20 mmol·L-1组细胞核染色质高度凝聚、边缘化,核碎裂等凋亡样特征更加明显,活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化PARP蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01).与JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林20 mmol·L-1组比较,JS-K 5μmol·L-1+阿司匹林20 mmol·L-1+Z-VAD-FMK 50μmol·L-1组细胞核染色质高度凝聚、边缘化,核碎裂等凋亡特征减少,活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3和活化PARP蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01).结论 JS-K与阿司匹林联用具有协同抑制HepG2和SMMC7721细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用机制与激活胱天蛋白酶诱导的凋亡级联反应有关.