目的:选取人慢性髓系白血病(CML)细胞K562为实验对象，利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建稳定敲除舌癌耐药相关蛋白1(TCRP1)基因的CML细胞系K562/TCRP1-KO，通过细胞增殖、细胞凋亡、药物敏感性等功能试验比较K562/TCRP1-KO与对照细胞(K562/cas9-CTL)的表型差异，初步探讨TCRP1基因参与CML发病的可能机制。方法:在特定位点设计针对TCRP1的小向导RNA(sgRNA)，寡核苷酸片段退火后与线性化的Cas9表达载体重组，慢病毒包装系统转染293T细胞，收集纯化病毒感染K562细胞，嘌呤霉素加压筛选阳性多克隆，有限稀释法进一步筛选出单克隆K562/TCRP1-KO，Sanger测序和Western blot检测成功敲除的稳定细胞株，同时构建转染lentiCRISPR载体的K562细胞作为对照细胞株(K562/cas9-CTL)，采用细胞计数法、CCK8法及伊马替尼(IM)梯度稀释法、流式细胞术分别对K562/TCRP1-KO和K562/cas9-CTL进行细胞增殖、药物敏感性及细胞凋亡分析。结果:成功构建了用于TCRP1敲除的sgRNA-Cas9重组质粒载体，转染293T细胞后，利用有限稀释法成功筛选到TCRP1敲除的单克隆细胞株。与K562/cas9-CTL细胞相比，K562/TCRP1-KO细胞的增殖能力显著减弱，IM药物敏感性显著增强，细胞凋亡进程显著加快(均 P<0.05)。 结论:利用CRISPR/Cas9成功构建了TCRP1敲除的CML细胞株，TCRP1可能作为癌症相关基因影响CML细胞的增殖、IM耐药能力及凋亡进程。

目的:探讨糖原合成酶激酶3（GSK3）抑制剂对伊马替尼诱导的慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:1 μmol/L伊马替尼分别联合不同浓度的GSK3抑制剂氯化锂（1.0、2.0、4.0 mmol/L）、SB216763（0.5、1.0、5.0 μmol/L）及TWS119（0.5、1.0、5.0 μmol/L）作用于K562细胞，分别以1 μmol/L伊马替尼为相应对照组。用CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹法检测细胞内Wnt-β-catenin通路相关蛋白水平的变化。结果:1 μmol/L伊马替尼分别联合浓度梯度的SB216763、氯化锂、TWS1193组与对照组间K562细胞存活率差异均有统计学意义（均 P<0.01）。1 μmol/L伊马替尼+1.0 μmol/L SB216763组、1 μmol/L伊马替尼+ 5.0 μmol/L SB216763组细胞存活率分别为（73.6±3.0）%、（77.0±3.6）%，均较对照组细胞存活率[（68.0±2.8）%]高（均 P<0.05）；1 μmol/L伊马替尼+0.5 μmol/L SB216763组细胞存活率为（70.0±2.2）%，与对照组比较差异无统计学意义（ P>0.05）。1 μmol/L伊马替尼+2.0 mmol/L氯化锂组、1 μmol/L伊马替尼+4.0 mmol/L氯化锂组细胞存活率分别为（75.5±3.6）%、（83.4±3.9）%，均较对照组细胞存活率[（69.5±2.1）%]高（均 P<0.05）；1 μmol/L伊马替尼+1.0 mmol/L氯化锂组[（72.3±6.0）%]与对照组间细胞存活率差异无统计学意义（ P>0.05）。1 μmol/L伊马替尼分别联合0.5、1.0、5.0 μmol/L TWS119组细胞存活率分别为（70.0±1.1）%、（72.1±0.8）%、（73.8±0.7）%，均较对照组[（67.9±7.5）%]高（均 P<0.01）。1 μmol/L伊马替尼+5.0 μmol/L SB216763、1 μmol/L伊马替尼+4.0 mmol/L氯化锂、1 μmol/L伊马替尼+5.0 μmol/L TWS119三组细胞凋亡率分别为（18.16±3.59）%、（20.11±2.98）%、（16.27±2.36）%，均较对照组[（28.26±2.20）%]低，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。与单独伊马替尼作用K562细胞相比，伊马替尼分别联合3个GSK3抑制剂作用的K562细胞中t-GSK3β、t-GSK3α蛋白表达水平无差异，p-GSK3β、p-GSK3α、β-catenin蛋白表达水平升高。 结论:GSK3抑制剂可减弱伊马替尼对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和凋亡的作用，可能是通过调控Wnt-β-catenin通路相关蛋白水平实现的。

目的:比较不同扩增体系NK细胞生物学特性的差异以及治疗异基因造血干细胞移植后（allo-HSCT）白血病复发的疗效。方法:分别采用CD3/CD52单抗扩增法和饲养层细胞扩增法诱导供者来源NK细胞大量扩增，检测扩增前后NK细胞表型、因子分泌、细胞毒的变化规律；选取16例allo-HSCT后复发白血病患者，8例输注CD3/CD52单抗扩增NK细胞，8例输注饲养层细胞扩增NK细胞，观察患者的治疗反应和长期生存情况。结果:①与CD3/CD52单抗扩增体系相比，饲养层细胞扩增体系NK细胞纯度较高、NK细胞表面活化性受体DNAM-1及NKp30表达较高、抑制性受体CTLA-4表达较低，而两种NK细胞NKG2D/CD25/CD69/Trail/PD-1/TIM-3/TIGIT表达差异无统计学意义。②两种扩增体系NK细胞Ki-67指数均明显增加，以饲养层细胞扩增NK细胞尤为明显；饲养层细胞扩增NK细胞穿孔素及颗粒酶B表达水平均明显高于CD3/CD52单抗扩增NK细胞。③16例allo-HSCT后复发白血病患者NK细胞输注过程中均未观察到明显不良反应。NK细胞输注后中位随访时间为2554（917~2583）d，CD3/CD52单抗扩增组中3例患者无白血病存活，5例死亡；饲养层细胞扩增组中6例患者长期存活，2例死亡。5例患者在NK细胞输注前存在移植物抗宿主病，NK细胞输注后移植物抗宿主病未加重甚至缓解。结论:CD3/CD52单抗扩增与饲养层细胞扩增体系NK细胞的生物学特性具有明显差异；NK细胞输注对allo-HSCT后复发白血病患者的疗效仍需要进一步验证。

目的:探讨B7H3和纤维连接蛋白（FN）相互作用对人慢性髓性白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。方法:采用流式细胞术检测K562细胞中B7H3分子的表达，构建B7H3过表达细胞。采用免疫共沉淀技术检测B7H3与FN的相互作用。添加外源FN后，通过细胞实验检测细胞黏附和细胞凋亡的变化。Western blot法检测凋亡相关蛋白及PI3K/AKT信号通路的变化。结果:① K562细胞低表达B7H3分子，慢病毒转染后得到稳定表达B7H3的细胞系K562 OE-B7H3及其对照细胞系K562 NC-B7H3细胞。②B7H3与FN之间存在相互作用（ P=0.036）。③B7H3与FN的相互作用促进细胞黏附（ P<0.05），抑制细胞凋亡（ P<0.05）。④B7H3与FN相互作用激活PI3K/AKT信号通路（ P<0.05）。 结论:B7H3与FN相互作用促进了细胞黏附，可能通过激活PI3K/AKT信号通路抑制K562细胞的凋亡。

目的:探讨RAF抑制剂SB590885、JAK抑制剂AZD1480、PI3K-mTOR双靶点抑制剂BEZ235等BCR-ABL下游通路抑制剂体外对慢性粒细胞白血病（CML）细胞的作用及BEZ235对CML细胞增殖、凋亡及伊马替尼敏感性的影响。方法:用不同浓度药物处理K562细胞，采用MTS法检测K562细胞的增殖抑制率，计算各药物48 h半数抑制浓度（IC 50）；采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率，流式细胞术PI单染色法检测细胞周期。以不同浓度药物处理K562细胞、伊马替尼耐药的T315I突变的人CML KBM7R细胞、伊马替尼耐药的CML患者原代细胞，采用MTS法检测细胞增殖抑制率，分别计算各药物48 h的IC 50。分别单用1.0 μmol/L BEZ235、1.0 μmol/L伊马替尼或两者联合处理KBM7R细胞或CML患者原代细胞，采用流式细胞术PI单染色法检测KBM7R细胞周期，流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测CML患者原代细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测KBM7R细胞p-AKT、cleaved Caspase-3、Cyclin D1蛋白的表达情况。 结果:SB590885、AZD1480、BEZ235均能抑制K562细胞的增殖，三者处理K562细胞48 h的IC 50分别为（11.49±3.14）、（4.83±1.26）、（0.37±0.21）μmol/L。SB590885、AZD1480、BEZ235均能促进K562细胞的凋亡，与未经药物作用的对照组比较，细胞凋亡率均升高（均 P<0.01）。SB590885和BEZ235诱导细胞G 0/G 1期阻滞（均 P<0.05），AZD1480诱导细胞G 2/M期阻滞（ P<0.05）。BEZ235可抑制K562、KBM7R细胞以及患者原代细胞的增殖，其48 h的IC 50分别为（0.37±0.21）、（0.43±0.27）、（0.49±0.24）μmol/L。与单用伊马替尼组相比，0.2 μmol/L BEZ235与不同浓度伊马替尼联用可增加对K562、KBM7R细胞和患者原代细胞的增殖抑制，降低伊马替尼的IC 50，其中，伊马替尼单用和联合BEZ235处理48 h后，K562细胞的伊马替尼IC 50分别为（0.14±0.05）、（0.09±0.04）μmol/L（ t=1.351， P=0.249），KBM7R细胞分别为（3.93±2.29）、（0.44±0.22）μmol/L（ t=2.837， P=0.047），原代细胞分别为（3.12±1.53）、（0.39±0.23）μmol/L（ t=3.925， P=0.042）。未经药物作用的对照组、单用1.0 μmol/L BEZ235、单用1.0 μmol/L伊马替尼及两药联合处理24 h后患者原代细胞凋亡率分别为（4.9±1.4）%、（13.1±3.2）%、（8.8±2.0）%、（40.6±6.0）%，差异有统计学意义（ F=71.031， P<0.01）。与单用伊马替尼相比，BEZ235联合伊马替尼处理12 h的KBM7R细胞p-AKT、Cyclin D1蛋白的表达降低，cleaved Caspase-3蛋白的表达升高。 结论:BCR-ABL下游通路抑制剂可有效抑制K562细胞的增殖，促进细胞凋亡。BEZ235能够抑制K562细胞、伊马替尼耐药的T315I突变的KBM7R细胞以及伊马替尼耐药的CML患者原代细胞的增殖，促进细胞凋亡，与伊马替尼具有协同作用。

目的:探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法:取对数生长期K562/ADR细胞，分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h，CCK-8法检测细胞增殖情况，计算细胞增殖率，获得两药半数抑制浓度（IC 50）。以10 μmol/L木香烃内酯、10 μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。 结果:木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。多柔比星对K562/ADR细胞的IC 50为（13.50±0.86）μmol/L，木香烃内酯为（7.30±0.55）μmol/L，差异有统计学意义（ t=7.044， P=0.002）。流式细胞术检测结果显示，10 μmol/L木香烃内酯和10 μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[（19.68±3.21）%比（2.96±0.87）%、（9.34±2.89）%、（9.18±2.13）%]，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。与10 μmol/L木香烃内酯单用组和10 μmol/L多柔比星单用组相比，两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调，bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。 结论:木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用，促进多柔比星诱导细胞凋亡，其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。

目的:鉴定分子遗传学水平上与葡萄膜黑色素瘤(UM)转移和预后相关的潜在标志物。方法:收集肿瘤基因组图谱数据库中2007—2019年80例UM样本的信息，根据是否发生转移分为转移组18例和非转移组62例。采用R软件中的maftools函数包分析UM样本中的基因突变种类、变异类型、单核苷酸变异(SNV)类型和基因突变比例，计算肿瘤突变负荷；采用R软件中的edgeR软件包分析转移组和非转移组间的差异表达基因(DEGs)；采用KOBAS工具对DEGs的京都基因与基因组百科全书通路进行富集，筛选出预后相关基因。采用survival函数包建立Cox回归模型验证基因突变情况和DEGs的预后评价。结果:UM基因突变中以错义突变为主，主要变异类型为SNV，UM基因突变负荷低。与非转移组相比，转移组中存在562个DEGs，在基因集富集分析中，3条与眼部疾病和癌症相关的通路显著富集，分别为玻璃体视网膜变性、癌症相关蛋白多糖和PI3K-Akt信号通路。转移组 BAP1、 FOXO3和 ITPR2基因表达量分别为2 982.50(1 251.50，5 637.00)、1 223.00(914.75，2 706.25)和2 201.50(570.75，4 814.00)，与非转移组的5 225.00(2 281.25，8 784.00)、2 293.50(1 254.25，3 693.75)和474.00(153.00，1 437.75)比较，转移组 BAP1和 FOXO3表达量显著下调， ITPR2表达量显著上调，差异均有统计学意义( Z＝-1.786、-1.982、-3.065，均 P<0.10)。采用Cox模型单因素分析显示， BAP1基因突变、 FOXO3基因表达下调和 ITPR2基因表达上调与不良预后显著相关(均 P<0.10)。 结论:BAP1基因突变、 FOXO3基因下调和 ITPR2基因上调可作为UM转移和预后的潜在生物标志物。

目的:探讨肿瘤患者凝血功能异常时凝血因子活性变化及临床意义。方法:收集2020年1月至2021年6月在河南省肿瘤医院住院接受治疗的肿瘤患者的临床资料。采用血栓弹力图（TEG）监测其凝血功能，凝血功能呈异常状态的196例肿瘤患者为试验组，呈正常状态的36例肿瘤患者为对照组。根据TEG检测结果的总体凝血指标（CI）值将试验组分为两组：高凝试验组（ n=104）：CI值>3；低凝试验组（ n=92）：CI值<-3。每个试验组再根据TEG结果的R值、K值、α角、MA值分成3个亚组，即高凝一组（ n=37）、高凝二组（ n=34）、高凝三组（ n=33）；低凝一组（ n=33）、低凝二组（ n=30）、低凝三组（ n=29）。同期测定并比较试验组和对照组所有患者凝血因子（F）Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ和血管性血友病因子（vWF）的活性。 结果:与对照组比较，高凝一组FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅪ和vWF活性升高，分别为（1 105±281）、（1 352±326）、（1 628±397）、（1 795±314）、（1 389±288）和（1 908±486）U/L（均 P<0.01）；高凝二组FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FX和vWF活性升高，分别为（1 068±189）、（1 194±205）、（1 529±394）、（1 562±241）、（1 150±196）和（1 722±415）U/L（均 P<0.05）；高凝三组FⅦ、FⅩ和vWF活性升高，分别为（1 411±196）、（1 212±327）和（1 713±457）U/L（均 P<0.01）。低凝一组FⅤ、FⅧ、FⅨ、FⅫ和vWF活性降低，分别为（732±96）、（695±64）、（1 216±191）、（832±128）和（1 088±117）U/L（ P<0.05）；低凝二组FⅤ、FⅦ、FⅧ和FⅫ活性降低，分别为（714±102）、（1 125±108）、（783±95）和（912±111）U/L（ P<0.01）；低凝三组FⅪ、FⅫ和vWF活性降低，分别为（812±92）、（827±179）和（916±76）U/L（ P<0.01）。 结论:肿瘤患者凝血功能异常时仅有部分凝血因子活性发生明显改变。高凝状态时，FⅡ和FⅩ的活性较高，成为抗凝治疗的重要因素，FⅤ、FⅧ活性升高易引发深静脉血栓；低凝状态时，FⅤ和FⅧ活性显著下降，常引发出血或渗血。