目的 采用一测多评法同时测定木香顺气丸中的橙皮苷、厚朴酚、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷、和厚朴酚、去氢木香内酯、苍术素、木香烃内酯、甘草苷等成分.方法 色谱柱为SVEATM A585V3 C18 Opal(250 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-甲醇-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,苍术素的测定波长为336 nm、其余均为220 nm.以橙皮苷为参照物,计算其他9种组分的相对校正因子并测得含量.结果 10组分在各自试验浓度范围内的线性关系良好(r≥0.9994),平均加样回收率为97.2％～102.5％(n=6),RSD为1.10％～2.00％;与外标法比较,一测多评法的结果一致.结论 所用方法简单、准确,适用于木香顺气丸的质量控制.

目的:探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法:取对数生长期K562/ADR细胞，分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h，CCK-8法检测细胞增殖情况，计算细胞增殖率，获得两药半数抑制浓度（IC 50）。以10 μmol/L木香烃内酯、10 μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。 结果:木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。多柔比星对K562/ADR细胞的IC 50为（13.50±0.86）μmol/L，木香烃内酯为（7.30±0.55）μmol/L，差异有统计学意义（ t=7.044， P=0.002）。流式细胞术检测结果显示，10 μmol/L木香烃内酯和10 μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[（19.68±3.21）%比（2.96±0.87）%、（9.34±2.89）%、（9.18±2.13）%]，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。与10 μmol/L木香烃内酯单用组和10 μmol/L多柔比星单用组相比，两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调，bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。 结论:木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用，促进多柔比星诱导细胞凋亡，其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。

目的:建立疏肝止痛片指纹图谱和多成分含量测定方法.方法:基于HPLC法建立疏肝止痛片指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析(CA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA).同法测定疏肝止痛片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、延胡索乙素、芍药苷、橙皮苷、木香烃内酯、去氢木香内酯、甘草苷及甘草酸铵9个成分的含量.结果:建立的疏肝止痛片HPLC指纹图谱标定了 32个共有峰,指认9个成分,15批样品的相似度＞0.960.CA和OPLS-DA将疏肝止痛片样品分为2类,且OPLS-DA筛选出12个对疏肝止痛片质量差异影响较大的成分.建立的9个成分含量测定方法稳定可靠,绝大部分样品未出现离散数据(平均值的70％～130％以外),表明15批疏肝止痛片质量较稳定.结论:HPLC指纹图谱结合多成分含量测定的方法快速、简便,重复性好,可用于疏肝止痛片的质量控制和评价.

目的 探究五味沙棘散对卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的过敏性哮喘大鼠的保护作用及机制.方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松(0.5 mg/kg)组和五味沙棘散(0.5、2.0 g/kg)组,建立OVA诱导的大鼠早期支气管哮喘模型,苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察支气管病理情况及纤维化程度;免疫组化检测支气管间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的表达和分布;ELISA检测血清中免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)和白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)水平;亚甲基蓝法和WSP-1 荧光探针法测定血清中硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)水平.建立CdCl2 诱导的支气管上皮BEAS-2B细胞损伤模型,MTT法检测细胞活性;Hoechest 33342 染色法观察细胞核形态变化;MitoSOX染色检测细胞线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)水平;Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、核因子红细胞系 2 相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor,Nrf2)和Kelch样ECH关联蛋白 1(Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)蛋白表达.结果 五味沙棘散能够减少支气管黏膜上皮细胞脱落和黏液分泌(P＜0.001),降低胶原纤维的沉积和Cx43 的表达及分布(P＜0.05、0.01、0.001),降低血清中IgE、IL-13水平(P＜0.05),升高血清中H2S水平(P＜0.05、0.01).五味沙棘散含药血清呈剂量相关性地抑制CdCl2 诱导的BEAS-2B细胞凋亡及mtROS水平(P＜0.01、0.001),上调Caspase-3和Nrf2 蛋白表达(P＜0.05、0.01),下调Keap1 蛋白表达(P＜0.01).结论 五味沙棘散对OVA诱导的哮喘大鼠和CdCl2 诱导的支气管上皮细胞凋亡均具有保护作用,其机制可能与调控Nrf2/Keap1 信号通路有关.

目的 利用网络药理学和分子对接法的分析技术,预测大黄素、木香烃内酯、水甘草碱、表儿茶素没食子酸酯、冬凌草甲素等中药活性成分治疗心肌缺血再灌注损伤的作用机制.方法 使用中药系统药理数据库和分析平台(Tradi-tional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、HERB 和 SwissTargetPrediction 数据库寻找5种药物活性成分的作用靶点,并通过Genecards数据库寻找心肌缺血再灌注损伤的疾病靶点,两组靶点相交得到5种活性成分针对于心肌缺血再灌注损伤的潜在治疗靶点组合.接着对上述靶点合集进行功能富集(采用R语言程序,"ClusterProfiler"包),并进一步分析,随后构建活性成分、靶点、通路、疾病和富集结果间的多种关系网络,使用Cyto-scape进行美化.使用String数据库和Cytoscape软件构建靶点蛋白互作网络(protein-protein interaction networks,PPI)集合,并利用Cytoscape的CytoHubba功能筛选关键(hub)靶基因.使用PyMOL和Autodock软件进行分子对接和结果可视化及美化.结果 5种活性成分治疗心肌缺血再灌注损伤的潜在作用靶点共有51个,我们发现在整体的蛋白互作网络中排名前5位的关键基因分别为编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt serine/threonine kinase 1,AKT1)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、半胱天冬酶 3(Caspase 3,CASP3)、血管内皮生长因子 A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、信号转导子和转录激活子3(signal transolucer and activator of transcription 3,STAT3),它们涉及基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)相关富集通路 74 条、基因本体论(gene ontology,GO)生物过程富集条目1007条、GO细胞功能富集条目39条.随后的分子对接结果发现,这5种活性成分各自与关键基因中的一种或多种结合较好.结论 大黄素、木香烃内酯、水甘草碱、表儿茶素没食子酸酯、冬凌草甲素5种中草药药物活性成分可能主要通过AKT1、IL-1 β、CASP3、VEGFA、STAT3等靶点作用于多种通路来发挥治疗心肌缺血再灌注损伤的作用.

目的 探讨木香烃内酯对胃癌细胞恶性表型的影响及可能机制.方法 体外培养胃癌细胞HGC-27,采用不同剂量(2.5、10、40 μmo·l L-1)木香烃内酯干预HGC-27细胞 24 h,或转染circ_0000285小干扰RNA至HGC-27细胞后培养24 h.采用40 μmo·l L-1木香烃内酯干预转染circ_0000285过表达载体的HGC-27细胞24 h.CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,RT-qPCR检测circ_0000285和miR-409-3p表达,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000285和miR-409-3p的调控关系.结果 木香烃内酯可降低HGC-27细胞的OD值、集落形成数、迁移距离、侵袭数,以及Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平,提高细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平,并呈剂量依赖性.木香烃内酯可抑制HGC-27细胞中circ_0000285的表达,促进miR-409-3p表达.干扰circ_0000285表达可降低HGC-27细胞的增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡.circ_0000285可靶向结合并负调控miR-409-3p.过表达circ_0000285可逆转木香烃内酯对HGC-27细胞恶性表型的影响.结论 木香烃内酯可能通过调控circ_0000285/miR-409-3p轴抑制胃癌细胞的恶性生物学行为.

目的:建立川木香标准汤剂的质量控制方法.方法:采用Waters CORTECS T3 超高效液相色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为 0.35 mL·min-1,柱温为 40℃,检测波长在 0～21 min为325 nm、21～37 min为 225 nm,进样体积为 1 μL.采用超高效液相色谱法建立 14 批川木香标准汤剂的指纹图谱,确定指纹图谱共有峰,采用对照品对共有峰进行确证;通过相似度计算和化学计量学方法对不同产地川木香制备的标准汤剂进行分析,并对其中木香烃内酯、去氢木香内酯、绿原酸和 4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸进行定量分析.结果:川木香标准汤剂指纹图谱共标记 14 个共有峰,指认了木香烃内酯、去氢木香内酯、绿原酸和 4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸 4 个成分;相似度评价、聚类分析和主成分分析均将 14 批川木香标准汤剂分成 2 类,正交偏最小二乘法-判别分析从 14 个共有峰中筛选出 7 个差异性标志物;含量测定结果显示,来自四川阿坝的川木香制备的标准汤剂中木香烃内酯和去氢木香内酯的总质量分数最高、绿原酸和 4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的总质量分数最低,而其余 3 个产地川木香差异不大.结论:该方法分析时间短、准确度高、专属性好,能够为川木香标准汤剂及其相关制剂质量标准的制定提供参考.

目的 研究达立通颗粒主要活性成分在正常和功能性消化不良(FD)模型大鼠胃肠道组织中的分布差异.方法 采用夹尾刺激结合不规律饮食双因素干预方法建立FD模型.12只大鼠(对照、模型各6只)用于FD模型验证,进行胃、小肠排空实验,HE染色后进行胃肠组织病理学观察;36只大鼠(对照、模型各18只)用于胃肠道组织差异分布研究,禁食不禁水18 h,按22.4 g·kg-1剂量(8倍临床等效剂量)ig给予达立通颗粒1次,于给药后1、3、6h收集各组大鼠的胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠.应用超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS)法检测各组织牡荆素-4"-O-葡糖苷、原阿片碱、黄连碱、小檗碱、甜橙黄酮、川陈皮素、桔皮素、去甲基川陈皮素、木香烃内酯、去氢木香内酯、原儿茶酸、伞形花内酯、木犀草苷、橙皮苷、木犀草素、柚皮素、橙皮素、白杨素含量,采用ACQUITY HPLCTM HSS T3(50 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,柱温为40 ℃,0.1％甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL·min-1,进样量为2μL.结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P＜0.001),胃、小肠排空率显著降低(P＜0.001),十二指肠肠黏膜的紧密连接被破坏,但未出现胃肠组织的器质性病变,符合FD的病理特征.建立的UPLC-QTRAP-MS/MS方法中,各化合物线性关系良好,R2R≥0.990 0.对建立的检测方法进行专属性、精密度与准确度、提取回收率、稳定性和基质效应等方面的考察,均符合要求.各成分在对照和模型组大鼠胃肠道组织中浓度差异明显,且在各组织中达到最高浓度的时间点差异较大,模型组出现达峰时间延后的现象;与对照组比较,模型组大鼠胃组织中化合物的暴露水平降低,可能与FD引起胃肠道蠕动减慢有关.橙皮苷、橙皮素、柚皮素、原儿茶酸、去氢木香内酯、川陈皮素、去甲基川陈皮素、小檗碱和桔皮素在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中暴露水平较高,且在对照组和模型组中各时间点下的浓度差异较显著.结论 经方法学验证,所建立的UPLC-QTRAP-MS/MS法灵敏、专属性强、准确性高,适用于大鼠胃肠道组织中达立通颗粒主要活性成分的胃肠组织分布研究.达立通颗粒主要活性成分在正常和FD模型大鼠胃肠组织分布具有显著性差异.

目的:采用HPLC测定催汤丸中木香烃内酯、药根碱、巴马汀、去氢木香烃内酯、盐酸小檗碱、诃子次酸、诃子鞣酸及柯里拉京的含量,为其质量标准建立提供依据.方法:采用月旭C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以乙腈-0.01%甲酸铵溶液为流动相,梯度洗脱;流速为 1.0 mL/min;检测波长为 230 nm;柱温为 35℃.结果:上述 8个成分分别在 2.3～230 μg/mL、0.64～64 μg/mL、1.08～108 μg/mL、0.72～72 μg/mL、1.25～125 μg/mL、0.77～77 μg/mL、0.83～83 μg/mL 0.99～99 μg/mL的浓度范围内与峰面积的线性关系良好,r≥0.9990,含量水平较高的依次是木香烃内酯、诃子次酸、巴马汀和药根碱.结论:该研究建立的多成分测定方法有助于催汤丸质量评价.

目的:研究达立通浸膏给药后大鼠体内主要药物成分及药代动力学特点.方法:建立同时检测延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,应用于测定大鼠血浆和组织中药物浓度及药代动力学特征.结果:建立了同时定量测定延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯方法,单次灌胃给予达立通浸膏后,延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯可以快速吸收进入体内,在血中峰浓度(Cmax)分别为(13.73±7.50)、(27.01±17.69)、(66.73±29.94)ng/mL,曲线下 面积(AUCo-t)分别为(80.43±40.03)、(41.30±28.69)、(303.90±136.69)ng·h·mL-1,消除半衰期(t1/2)分别为(5.82±2.22)、(1.08±0.01)、(4.95±2.53)h.多次给药能明显增加各物质体内暴露水平.各成分在大鼠的主要组织/器官中广泛分布,在胃肠道中暴露水平最高,其次是肝和肾.各成分存在明显的雌雄差异,在雌性大鼠中的暴露量(Cmax和AUC)均显著高于雄性大鼠(P＜0.05).结论:UPLC-MS/MS测定延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯的方法准确、灵敏、可靠.达立通浸膏中延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯可吸收进入血液、广泛分布于体内组织、器官、较快代谢/消除,为达立通浸膏潜在的体内药代标记物.