目的 研究核因子E2 相关因子2(nuclear E2-related factor 2,Nrf2)靶点及线粒体质量控制系统调控姜三七挥发油(essential oil from Stahlianthus involucratus rhizomes,EOSIR)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用机制.方法 用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导HUVECs建立细胞损伤模型,siRNA转染沉默Nrf2 因子的表达,将培养好的细胞分为对照组、模型组、EOSIR组、转染组、转染阴性对照组,利用蛋白质印迹法(Western-blot)及定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Nrf2 及其下游因子的蛋白及mRNA的表达;Griess法检测一氧化氮含量;酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析人内皮素(endothelin 1,ET-1)、人前列环素(prostacyclin,PGI2)的含量;线粒体质量检测实验中将细胞分为空白组、ox-LDL诱导组、低剂量EOSIR组、中剂量EOSIR组、高剂量EOSIR组、阿司匹林阳性对照组,透射电镜观察HUVECs线粒体形态;Western-blot检测线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 1,Mfn2)、线粒体动力相关蛋白(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体内膜融合蛋白(optic atro-phy 1,Opa1)、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferatoractivated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)及轻链3A/B蛋白(LC3A/B)、泛素结合蛋白(p62)表达.结果 EOSIR组的Nrf2 及其下游因子的表达水平、NO、PGI2 的含量较模型组均显著升高,ET-1 水平较模型组相比显著降低,转染沉默Nrf2 后,EOSIR对上述指标的改善作用被抑制;透射电镜观察线粒体形态,EOSIR干预组自噬小体数量较模型组明显减少,线粒体形态恢复正常,同时,EOSIR组显著改善了ox-LDL引起的线粒体相关蛋白表达的变化(P<0.05).结论 EOSIR可能通过激活Nrf2 靶点及调控线粒体质量控制系统发挥对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的保护作用,延缓动脉粥样硬化的进程.

目的:探讨电针对脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织氧化应激的影响，并探明其潜在机制。方法:将45只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、电针组，采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注模型。电针组选取百会穴、膈俞穴、肾俞穴进行针刺治疗，每天1次，连续治疗7 d。各组小鼠进行神经功能缺损评分，HE染色观察脑组织损伤情况，试剂盒检测脑匀浆液中活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）的水平，免疫组化法检测脑内Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap-1）、核因子E2相关因子（Nrf2）、抗氧化反应元件（ARE）蛋白的表达。结果:电针治疗后，脑缺血再灌注损伤小鼠神经功能缺损评分与治疗前相比显著降低[（2.95±0.53）vs（1.43±0.39）， P<0.05]，神经元病理损伤明显改善，与模型组相比ROS、MDA水平下降[（110.71±16.92）vs（67.91±10.31）,（11.06±2.33）vs（6.29±0.57）, P<0.05]，SOD、GSH水平上升[（18.27±3.14）vs（25.71±2.77）,（4.20±0.58）vs（6.27±0.81）， P<0.05]，Keap-1阳性表达降低[（0.623±0.087）vs（0.504±0.056）， P<0.05]，Nrf2和ARE阳性表达显著增加[（0.260±0.031）vs（0.571±0.066）,（0.384±0.039）vs（0.611±0.071）, P<0.05）。 结论:电针能通过激活Keap-1/Nrf2/ARE信号通路调节脑组织氧化应激因子水平，改善脑缺血再灌注损伤小鼠神经损伤行为。

目的:研究高氧暴露和小分子干扰RNA(siRNA)对A549细胞中细胞核转录相关因子2(Nrf2)、NAD(P)H：醌氧化还原酶1(NQO1)表达的影响，探讨其在高氧肺损伤中的作用及其与细胞凋亡的关系。方法:将体外培养A549细胞随机分为4组：Ⅰ组为无干扰空气组；Ⅱ组为无干扰高氧组；Ⅲ组为Nrf2 siRNA转染空气组；Ⅳ组为Nrf2 siRNA转染高氧组；将Ⅱ组、Ⅳ组持续暴露于常压高浓度氧(950 mL/L O 2，50 mL/L CO 2)中；Ⅰ组、Ⅲ组仍置于50 mL/L CO 2培养箱中。通过预实验从目的基因靶点siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3(分别加入对应脂质体复合物)中筛选出抑制Nrf2效率最高的Nrf2 siRNA，应用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot分别检测4组Nrf2、NQO1的mRNA及蛋白表达水平，应用免疫荧光和激光共聚焦显微镜分析干扰Nrf2后A549细胞中Nrf2、kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、抗氧化物反应元件蛋白的分布，观察各组细胞凋亡情况。 结果:1．Nrf2 siRNA可抑制Nrf2表达，siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组Nrf2 mRNA表达均被抑制，其中siRNA-1组的抑制效率最高(80.57%)。2.Ⅱ组Nrf2、NQO1 mRNA的相对表达量分别为4.553±0.498和5.866±0.582，与Ⅰ组相比，mRNA及蛋白表达量显著增高，细胞凋亡率[(21.67±0.75)%]增加，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。3.Ⅳ组Nrf2、NQO1 mRNA的相对表达量分别为0.937±0.057和0.789±0.058，与Ⅱ组相比，mRNA及蛋白表达显著减弱，细胞凋亡率[(35.83±0.42)%]进一步增高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:高氧暴露和siRNA导致A549细胞中Nrf2和NQO1表达异常，提示Nrf2和NQO1参与高氧肺损伤的发病过程；Nrf2、NQO1可能在高氧所致肺损伤及细胞凋亡中发挥保护作用。

目的:探讨Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1 （Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1 ）/核因子E2相关因子2 (nuclear factor-E2-related factor 2, Nrf2）/抗氧化反应元件（antioxidant response element, ARE）信号通路在脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R ）损伤中对线粒体分裂的调控。方法:将提取的大鼠原代海马神经元采用随机数字表法分为4组：正常组（C组）、氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）组、OGD/R+Nrf2抑制剂组（OGD/R+N组）和OGD/R+赋形剂组（OGD/R+V组）。透射电子显微镜观察线粒体形态，蛋白免疫印迹法检测线粒体动力相关蛋白（dynamin-related protein 1, Drp1 ）、线粒体分裂蛋白1 （mitochondrial fission protein 1, Fis1）、Keap1、Nrf2的表达，免疫荧光技术观察Nrf2的核转位，流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果:与C组比较，OGD/R组Keap1水平降低，Nrf2核内蛋白水平升高，Drp1、Fis1水平升高，免疫荧光观察Nrf2在OGD/R的过程中发生核转位，细胞凋亡率增加（ P<0.05）；与OGD/R组比较，OGD/R+N组Nrf2核内蛋白水平降低，Keap1水平升高，细胞凋亡率增加（ P<0.05）；OGD/R+V组与OGD/R组比较，Keap1、Drp1、Fis1、Nrf2核内蛋白水平及细胞凋亡率差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:在脑I/R中，Keap1/Nrf2/ARE信号通路能调控线粒体分裂、减少细胞凋亡、减轻脑损伤。

目的:探讨绞股蓝皂苷ⅩⅦ调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路抗脑缺血/再灌注（I/R）的机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及25、50和100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ组，每组8只。绞股蓝皂苷ⅩⅦ组分别给予绞股蓝皂苷ⅩⅦ 25、50、100 mg/kg灌胃（灌胃量0.01 mL/g），连续给药14 d；其余两组给予相同剂量生理盐水灌胃。然后采用改良线栓法制备大鼠脑I/R模型；假手术组大鼠采用相同方法手术，但不产生实质性栓塞。再灌注后24 h，评估各组大鼠神经功能缺损评分；采集大鼠腹主动脉全血检测血清活性氧（ROS）、血红素加氧酶-1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）、超氧化物歧化酶（SOD）、醌NADH氧化还原酶1（NQO1）、丙二醛（MDA）水平；随后取完整大脑组织并分离大脑皮质脑梗死周围半暗带组织，观察大鼠脑组织大体情况及脑梗死体积，光镜下观察脑组织病理学变化，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA表达，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的蛋白表达。结果:再灌注后24 h，与假手术组比较，I/R模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高，脑组织梗死体积明显增大，血清NQO1、SOD和γ-GCS水平均明显降低、血清MDA、HO-1和ROS水平均明显升高，脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达均明显升高。与I/R模型组比较，50 mg/kg与100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ能明显降低脑I/R大鼠的神经功能缺损评分（分：1.50±0.53、1.37±0.52比2.75±0.46），缩小脑组织梗死体积〔（19.8±5.1）%、（21.4±6.4）%比（42.3±5.8）%〕，明显提高血清NQO1、SOD、HO-1和γ-GCS水平〔NQO1（ng/L）：186.05±10.38、220.75±16.22比131.36±5.95，SOD（kU/L）：63.23±5.30、72.70±8.62比36.75±6.55，HO-1（ng/L）：60.57±7.93、60.35±4.72比42.72±4.95，γ-GCS（kU/L）：8.81±0.53、8.72±0.69比6.80±0.56〕，明显降低血清MDA和ROS水平〔MDA（μmol/L）：5.94±0.66、5.61±0.53比10.88±1.34，ROS（kU/L）：69.11±4.23、67.12±4.52比104.43±7.54〕，同时可明显提高脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达〔Nrf2 mRNA（2 -△△Ct）：1.90±0.13、2.13±0.18比1.48±0.11，Keap1 mRNA（2 -△△Ct）：1.78±0.11、1.85±0.10比1.43±0.10，Nrf2/β-actin：0.73±0.04、0.79±0.03比0.60±0.03，Keap1/β-actin：0.71±0.01、0.76±0.03比0.61±0.01〕，比较差异均有统计学意义（均 P<0.01）；25 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ无明显作用。 结论:绞股蓝皂苷ⅩⅦ （50 mg/kg和100 mg/kg）可能通过Nrf2/ARE信号通路调节NQO1、SOD、HO-1、γ-GCS、ROS及MDA起到抗脑I/R损伤的作用。

目的:观察老年脑卒中患者基质金属蛋白酶(MMP)-3启动子区-1612基因多态性和脑卒中发病风险及与炎性反应、氧化应激的相关性。方法:回顾性分析2019年3月至2021年3月本院诊疗的老年脑卒中发病患者129例作为研究组，同时选择110例健康体检者作为对照组，检测 MMP-3启动子区-1612基因多态性、炎性反应及氧化应激指标，并分析 MMP-3基因多态性与各指标的相关性。 结果:与对照组相比，研究组的高血压、糖尿病、吸烟史比例明显增高( χ2＝16.05、17.19、14.19，均 P<0.05)，且空腹血糖及低密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸水平也增高( t＝6.22，3.64，2.69，均 P<0.05)。与 MMP-3-5A/6A及6A/6A基因型患者相比， MMP-3基因5A/5A基因型患者血清炎症指标高迁徙率蛋白1(HM-BG1)、分形素趋化因子(FKN)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-17(IL-17)含量增高( t＝16.40、23.06、10.64、15.39、21.02；20.01、28.03、13.42、20.09、27.40，均 P<0.05)，同时血清氧化应激相关分子Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、抗氧化应答元件(ARE)、醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素加氧酶-1(HO-1)表达也增加(均 P<0.05)，而上述指标在 MMP-3-5A/6A和6A/6A基因型患者之间无明显差异( P>0.05)。5A/5A基因型和6A/6A基因型分别仅含970bp 1个条带和120bp 1个条带，而5A/6A基因型含97bp、120bp 2个条带；研究组中的5A/6A基因型数目与对照组差异无统计学意义( P>0.05)，研究组中的5A/5A基因数目高于对照组[69(53.49%)比35(31.82%)， χ2＝11.34， P<0.05]。 MMP-3基因的多态性与脑卒中发生之间呈正相关( r＝0.25， P<0.05)。 MMP-3-1612基因多态性( OR＝7.21，95% CI：1.13~1.83， P＝0.01)及空腹血糖升高( OR＝1.27，95% CI：1.18~2.06， P<0.001)、高同型半胱氨酸( OR＝1.05，95% CI：1.07~1.58， P<0.01)、高血压( OR＝5.41，95% CI：1.14~4.46， P<0.01)、低密度脂蛋白胆固醇升高( OR＝4.03，95% CI：1.03~2.35， P＝0.02)、冠心病( OR＝1.17，95% CI：1.47~3.19， P<0.01)以及糖尿病( OR＝8.52，95% CI：1.32~4.71， P<0.01)等均可增加脑卒中发生风险。 结论:老年脑卒中患者 MMP-3启动子区-1612基因多态性和发病风险、炎性反应和氧化应激密切相关，MMP-3基因多态性是脑卒中发生的危险因素之一。

目的:探讨马尾松针提取物（PMNE）对人毛乳头细胞（HDPC）抗氧化应激的保护作用及机制。方法:以HDPC为研究对象，分别采用0（对照组）、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mmol/L H 2O 2处理HDPC，建立体外HDPC氧化应激的最佳条件；在HDPC中转染核因子E2相关因子2（Nrf2）干扰片段siRNA1、siRNA2、siRNA3或过表达质粒pCMV6-XL5-Nrf2，实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测Nrf2 mRNA及蛋白的表达；H 2O 2条件下检测转染后各组细胞活性及凋亡率。常规培养HDPC并分组处理，对照组：正常培养，不予其他处理；双氢睾酮组：加入0.03 μg/ml双氢睾酮；原花青素组：加入0.03 μg/ml双氢睾酮和6.00 μg/ml原花青素B2处理；不同浓度PMNE组：加入0.03 μg/ml双氢睾酮培养液，同时分别给予1、5、25、100 μg/ml PMNE处理；分别检测各组细胞活性及凋亡率、细胞内活性氧（ROS）相对荧光强度和丙二醛（MDA）含量，Nrf2、醌氧化还原酶1（NQO1）、血红素加氧酶1（HO-1）、Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、转化生长因子（TGF）-β1、Sma和Mad相关蛋白2/3（Smad2/3）、p-Smad2/3的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:HDPC细胞活力为75% ~ 85%时，选择0.4 mmol/L H 2O 2作为体外HDPC氧化应激最适处理浓度。Nrf2-siRNA1、Nrf2-siRNA2、Nrf2-siRNA3组Nrf2 mRNA和蛋白表达均显著低于空白组和对照组（均 P < 0.05），细胞凋亡率（12.50% ± 0.05%、26.07% ± 0.05%、58.44% ± 1.03%）均显著高于空白组（10.38% ± 0.64%）和对照组（13.05% ± 0.12%），均 P < 0.05。Nrf2-siRNA2组的Nrf2蛋白表达量最低，选择Nrf2-siRNA2为最佳干扰片段进行后续实验。Nrf2过表达组Nrf2 mRNA和蛋白表达均显著高于空白组和对照组（均 P < 0.05），其细胞凋亡率明显低于空白组和对照组（均 P < 0.05）。0.4 mmol/L H 2O 2处理条件下，Nrf2过表达组细胞凋亡率显著低于过表达空载组（ t = 3.66， P < 0.001），细胞活性高于过表达空载组（ t = 40.40， P < 0.001）；Nrf2-siRNA2组细胞凋亡率显著高于对照组（ t = 13.13， P < 0.001），而细胞活性显著低于对照组（ t = 67.37， P < 0.001）。PMNE处理实验中，原花青素组和不同浓度PMNE组细胞活性均显著高于双氢睾酮组（均 P < 0.01），而细胞凋亡率显著低于双氢睾酮组（均 P < 0.01）；原花青素和不同浓度PMNE均能显著抑制双氢睾酮诱导的HDPC细胞内ROS和MDA的过度表达（均 P < 0.01）；原花青素组和5、25、100 μg/ml PMNE组Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达显著高于双氢睾酮组（均 P < 0.05），原花青素组和25、100 μg/ml PMNE组Keap1、TGF-β1蛋白表达及Smad2/3磷酸化水平显著低于双氢睾酮组（均 P < 0.05）。 结论:Nrf2在抵抗HDPC的氧化应激损伤中起重要作用，PMNE可能通过激活Nrf2抗氧化反应元件通路而对HDPC产生明显的保护作用。

肝纤维化常发生于大多数慢性肝病，其直接病因是细胞外基质蛋白过度积累。铁死亡(ferroptosis)是一种铁依赖性脂质过氧化驱动的程序性细胞死亡，区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞焦亡的新型细胞程序性死亡方式。活性氧异常产生和铁代谢失衡是铁死亡的发生的中心环节。二价铁或酯氧合酶催化细胞膜上不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，从而诱导细胞死亡。此外，抗氧化体系(谷胱甘肽系统)的调控核心酶谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的降低也与铁死亡发生密切相关。近年来，多项研究表明铁死亡参与肝纤维化进程，包括p62、Keap1/NRF2、p53等信号通路。本文将围绕铁死亡相关信号通路，以及铁死亡介导的肝脏纤维化发生的机制和相应治疗策略展开综述，以期为铁死亡介导的抗肝脏纤维化治疗提供新思路。

脓毒症是感染导致机体宿主反应失调引起的危及生命的器官功能障碍，在全球有较高的发病率与病死率。脓毒症的重要特征是炎症反应，剧烈炎症反应产生的细胞因子会激活中性粒细胞，引起活性氧（ROS）的过量生成，从而造成组织器官损伤，并进一步发展为器官功能障碍和衰竭。铁死亡是近些年发现的一种铁依赖性的全新的细胞死亡方式，其主要机制为二价铁诱导的细胞内脂质过氧化与抗氧化体系〔谷胱甘肽（GSH）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）〕表达量降低。最近众多研究表明，Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Keap1/Nrf2/ARE）信号通路可通过改善氧化应激来缓解脓毒症过程中的细胞铁死亡。本文对Nrf2抑制脓毒症过程中细胞铁死亡的有关分子机制研究进行综述，以期为干预脓毒症进展提供预防和治疗思路。

目的:探讨表儿茶素(EC)通过核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)通路对脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)小鼠的抗炎和抗氧化作用。方法:采用改良Allen’s击打法制备小鼠脊髓损伤模型，采用随机数字表法将小鼠分为对照组(Sham组)、脊髓损伤组(SCI组)、表儿茶素处理组(EC组)，每组6只。通过称重受损脊髓含水量评价受损脊髓的水肿情况；通过小鼠Basso Mouse Scale (BMS)评分，评价损伤小鼠的运动功能；通过悬尾实验和糖水偏嗜试验评价小鼠的抑郁及焦虑状态；使用免疫荧光染色观察神经元的数量；使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-10的表达；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Nrf2蛋白和Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)的表达。组间比较采用 t检验和单因素方差分析。 结果:SCI 3 d，EC组的脊髓含水量明显低于SCI组，差异有统计学意义[(73.91±0.95)%比(77.78±0.95)%， F＝8.611， P<0.05]；BMS评分表明，从第14天开始，EC组小鼠的运动能力改善优于SCI组，差异有统计学意义；SCI 28 d，EC组小鼠糖水偏嗜度高于SCI组，差异有统计学意义[(64.25±2.50)%比(51.98±3.27)%， t＝－7.316， P<0.05]。SCI 28 d，EC组小鼠不动时间明显低于SCI组，差异有统计学意义[(202.83±6.97) s比(260.50±10.62) s， t＝－11.123， P<0.05]；SCI 7 d，EC组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞明显低于SCI组，差异有统计学意义(159.00±9.12比209.50±14.15， t＝7.347， P<0.05)，EC组NeuN阳性细胞数明显高于SCI组，差异有统计学意义(108.17±12.48比54.83±15.55， t＝－6.552， P<0.05)；SCI 7 d，EC组抑炎因子IL-10的表达量明显高于SCI组，差异有统计学意义[(596.48±13.30) pg/ml比(483.55±16.14) pg/ml， t＝13.224， P<0.05)]。同时，EC组促炎因子IL-1β的表达量明显低于SCI组，差异有统计学意义[(44.02±4.28) pg/ml比(87.00±5.75) pg/ml， t＝14.686， P<0.05)]；SCI 7 d，EC组小鼠脊髓组织中的Nrf2蛋白表达量高于SCI组，差异有统计学意义(1.08±0.14比0.78±0.10， t＝－4.245， P<0.05)，EC组小鼠脊髓组织中的Keap1蛋白表达量低于SCI组，差异有统计学意义(1.16±0.13比1.68±0.10， t＝7.650， P<0.05)。 结论:表儿茶素通过Nrf2/ARE通路发挥对脊髓损伤小鼠的抗炎和抗氧化作用。