目的:三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)是一种临床上常见的神经病理性疼痛.电压门控性钾通道(voltage-gated potassium channel,Kv)已被证实参与TN的发生、发展,但具体机制仍不明确.微RNA(microRNA,miR)可通过调节三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)上Kv通道的表达及神经元兴奋性,参与神经病理性疼痛.本研究旨在探索TN模型中TG上Kv1.1和miR-21-5p的关系,评估miR-21-5p是否对Kv1.1有调控作用,为TN的治疗提供新的靶点.方法:将48只SD大鼠随机分为6组:1)假手术组(sham组,n=12),大鼠仅在术侧切口缝合,不结扎神经;2)Sham+agomir NC组(n=6),sham大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射agomir NC;3)Sham+miR-21-5p agomir 组(n=6),sham大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射miR-21-5p agomir;4)TN组(n=12),采用铬肠线慢性缩窄性眶下远端神经损伤(chronic constriction injury of the distal infraorbital nerve,dIoN-CCI)法构建TN大鼠模型;5)TN+antagomir NC组(n=6),TN大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射antagomir NC;6)TN+ miR-21-5p antagomir组(n=6),TN大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射miR-21-5p antagomir.检测术后各组大鼠面部机械痛阈变化.采用蛋白质印迹法和实时反转录聚合酶链反应检测术后大鼠术侧TG中Kv1.1和miR-21-5p的表达情况.利用双荧光素酶报告基因确定Kv1.1和miR-21-5p是否存在靶标关系,即miR-21-5p是否可以直接影响KCNA1的3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR).通过免疫荧光法测定,对脑立体定位注射的效果进行评价,随后分别将miR-21-5p的类似物(agomir)和agomir NC通过脑立体定位仪注射至sham组大鼠TG内,使miR-21-5p过表达;向TN组大鼠TG内分别注射miR-21-5p的抑制剂(antagomir)和antagomir NC,抑制miR-21-5p表达.观察给药前后大鼠行为学变化,检测干预后大鼠TG内miR-21-5p和Kv1.1表达的变化.结果:与基础痛阈值相比,TN组大鼠在术后第5至15天,面部机械痛阈值显著降低(P<0.05),sham组大鼠面部机械痛阈值稳定在正常水平,证明dIoN-CCI模型构建成功.与sham组相比,TN组TG中Kv1.1 mRNA和蛋白质表达均下调(均P<0.05),miR-21-5p的表达上调(P<0.05).双荧光素酶报告结果显示:与转染mimic NC和野生型KCNA1(KCNA1 WT)组相比,共转染6 nmol/L或20 nmol/L的rno-miR-21-5p mimics的KCNA1 WT组的荧光素酶活性显著降低(P<0.001);与6 nmol/L rno-miR-21-5p mimics共转染组相比,较大剂量(20 nmol/L)的rno-miR-21-5p mimics共转染组的荧光素酶相对活性显著降低(P<0.001).免疫荧光法结果显示通过脑立体定位可以将药物准确注入TG.TN组抑制miR-21-5p表达后,大鼠面部机械痛阈升高,TG中Kv1.1 mRNA及蛋白质的表达水平升高;sham组过表达miR-21-5p后,大鼠面部机械痛阈降低,TG中Kv1.1 mRNA及蛋白质的表达降低.结论:Kv1.1和miR-21-5p均参与TN的发生、发展,miR-21-5p可以通过结合KCNA1 3'-UTR来调控Kv1.1的表达,进而影响TN.

目的 研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用.方法 以健康6～8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化.应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况.应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca2+及2 mmol/L Ca2+ K-H液中对NE收缩曲线的作用.结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca2+液中所致的血管收缩[(3.45-±0.24)mN vs(0.11±0.02) mN,P＜0.01].Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca2+ K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28 ±0.53)mN vs(2.75 ±0.49)mN,P＜0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca2+液中的收缩张力[对照组vsPAP-1组:(7.08 ±0.58)mN vs(5.90 ±0.80)mN,P＜0.05].Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca2+液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用.结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应.其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流.

目的:上皮细胞迁移是胃肠黏膜损伤修复的重要环节,观察白术、黄芪糖复合物对小肠上皮IEC-6细胞迁移多胺信号通路钾通道相关指标的影响,为探讨益气健脾中药白术、黄芪胃肠黏膜损伤修复机制提供参考.方法:划痕法复制细胞迁移模型;非损伤微测法检测细胞K+外流;Westem Blot法检测Kv1.1蛋白表达;HE染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构.结果:白术、黄芪糖复合物具有以下作用:50μg/nl均可促进细胞迁移;100μg/ml均能增加细胞K+外流;白术(50μg/ml)、黄芪(100μg/nl)糖复合物能提高钾通道蛋白Kv1.1蛋白表达;200μg/ml剂量均能逆转钾通道抑制剂4-氨基比啶(4-AP)所致的细胞迁移抑制;100、200μg/ml剂量均能改善4-AP所致的Kv1.1蛋白表达抑制和细胞空泡化.结论:白术、黄芪促进胃肠黏膜损伤修复的作用与其影响小肠上皮细胞迁移多胺信号通路钾通道相关指标有关.

目的 观察不同状态下培养的乳鼠心肌细胞上清液对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)心肌动作电位相关离子通道基因表达的影响.方法 分别取大鼠骨髓MSCs和乳鼠心肌细胞进行体外培养.实验分为MSCs组、5-氮胞苷(5-Aza)诱导组、正常诱导组、缺氧诱导组和心肌细胞组,MSCs组为正常培养的MSCs,5-Aza诱导组为心肌定向诱导剂5-Aza干预的MSCs,正常诱导组为正常心肌细胞上清液干预的MSCs,缺氧诱导组为缺氧状态下的心肌细胞上清液干预的MSCs,心肌细胞组为不予干预的正常心肌细胞.采用RT-PCR法检测各组细胞膜上钠通道(SCN2a)、钾通道(Kv2.1、Kv1.4、Kir1.1、EAG1)和钙通道基因(CCHL2α)mRNA表达的变化.结果 MSCs组细胞膜上表达与心肌动作电位相关的离子通道基因.与MSCs组相比,其余各组SCN2a、Kv2.1、Kir1.1、EAG1、CCHL2αmRNA表达均升高(P<0.05或<0.01),且缺氧诱导组、心肌细胞组Kv1.4 mRNA表达升高(P<0.05或<0.01),但5-Aza诱导组、正常诱导组、缺氧诱导组各种离子通道基因表达两两比较差异无统计学意义.结论 乳鼠正常心肌细胞上清液和缺氧心肌细胞上清液可诱导大鼠MSCs心肌动作电位相关离子通道基因表达增加,心肌微环境有利于大鼠MSCs发生心肌电生理变化.

1型发作性共济失调(episodic ataxia type 1 ,EA1)是一种较为少见的由KCNA1基因突变引起的显性遗传病.随着全外显子测序等技术的广泛应用,使得与EA1发病相关的更多KCNA1基因位点被发现.国外近些年对该病的临床表现及发病机制进行了较为详细的研究,但我国针对该病的研究较少.现就EA1的常见临床症状及治疗方法进行介绍,并对近些年来与EA1相关致病基因的研究进展进行综述.

目的 总结以癫痫为首发表现的KCNA1基因突变所致1型发作性共济失调(EA1)的临床表型、基因型特点和治疗方法.方法 回顾性分析1例以癫痫为首发表现的KCNA1基因突变所致EA1患儿的临床资料,以及家系外周血全外显子基因测序(WES)结果,检索中英文数据库中有关以癫痫为首发表现的KCNA1基因突变病例,总结其临床特征及基因突变谱.结果 (1)本例患儿于1岁4个月起病,以反复抽搐为主要表现,头颅MRI检查无异常,左乙拉西坦治疗效果好,既往生长发育正常,频繁癫痫发作后出现认知倒退及共济失调表现.WES结果提示KCNA1基因c.877G>T杂合错义突变,其母亲及外公同样携带有该杂合变异,父亲及外婆未携带;母亲有癫痫发作史,其余家庭成员无相关表现.(2)共检索到14例国外报告的以癫痫为首发表现的KCNA1基因突变病例,其中11例明确癫痫发作后数月或数年伴发发作性共济失调或神经性肌强直,8例出现发育落后.结论 (1)本文报告的KCNA1基因c.877G>T突变尚未见报告,补充了该基因突变位点数据库.(2)以癫痫为首发症状的EA1不易被发现.因此,对先出现婴幼儿期癫痫,后出现短暂性共济失调、肌强直、运动发育落后等症状,且头颅影像学无明显异常的患儿,需考虑EA1的可能,建议及时行基因测序协助诊断.(3)现有的抗癫痫药对于KCNA1基因突变导致的癫痫均有一定疗效.

目的 建立胶束电动毛细管色谱法(micellar electrokinetic chromatography,MEKC)同时测定6种中药口服液体制剂中的10种添加剂.方法 以40％乙腈水溶液作为提取溶剂,经涡旋混匀、高速离心过滤后进行MEKC分析.采用未涂渍的标准熔融石英毛细管柱(75 μmx68.5cm,有效长度60cm)作为分离通道,以50mmol·L-1硼酸盐缓冲液(pH 8.4,含20 mmol·L-1十二烷基硫酸钠)为运行缓冲液,分离电压20 kV,柱温25℃,检测波长为200 nm.结果 10种待测物在相应的质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.996 9～0.999 7;检出限为0.05～0.15 μg·mL-1,定量限为0.16～0.50 μg·mL-1,平均回收率为84.3％～100.6％(RSD为1.1％～5.1％).样品测定结果显示,30个中药口服液体制剂检出苯甲酸钠和羟苯乙酯,其余未检出.苯甲酸的检出率为100％,含量为0.09％～0.3％.羟苯乙酯的检出率为33％,含量为0.03％～0.05％.结论 该方法样品前处理简单,具有专属性好、准确、高效等优点,可用于中药口服液体制剂中10种添加剂成分的含量测定.