目的:初步探讨嗜酸乳杆菌改善创伤性脑损伤(TBI)小鼠肠道平滑肌收缩功能的作用及可能机制。方法:按照随机数字表法将90只C57BL/6雄性小鼠分为假伤组、TBI组、TBI＋嗜酸乳杆菌组，每组30次。TBI组、TBI＋嗜酸乳杆菌组采用改良的Feeney自由落体撞击法建立TBI后肠动力不足模型，假伤组只开颅骨骨窗不进行打击。假伤组及TBI组灌胃0.5 ml嗜酸乳杆菌培养基，TBI＋嗜酸乳杆菌组灌胃0.5 ml嗜酸乳杆菌混悬液(约含菌1×10 10CFU)。各组每天灌胃1次，其余时间自由饮食水。分别在伤后1，3，7 d取末端回肠组织(距离盲肠1.5 cm)，免疫组化染色检测磷酸化20 kDa肌球蛋白轻链(p-MLC20)水平，ELISA法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性及L型电压依赖性钙离子通道α1C亚基(Cav1.2)、三磷酸肌醇受体(IP3R)、兰尼碱受体3(RyR3)蛋白表达。 结果:(1)TBI组1，3，7 d的p-MLC20水平为(530.6±101.5)ng/ml、(566.8±86.9)ng/ml、(635.2±129.6)ng/ml,较假伤组的(813.7±148.9)ng/ml、(802.6±151.2)ng/ml、(805.5±139.9)ng/ml显著降低( P均<0.05)；而TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的p-MLC20水平为(790.7±59.4)ng/ml、(769.8±85.4)ng/ml、(731.8±82.9)ng/ml，显著高于TBI组( P均<0.05)。(2)TBI组1, 3, 7 d的MLCK活性为(29.4±5.0)U/L、(31.2±3.4)U/L、(30.7±2.4)U/L，明显弱于假伤组的(44.9±6.1)U/L、(44.6±1.7)U/L、(45.1±3.7)U/L( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的MLCK活性为(35.2±3.1)U/L、(38.7±3.9)U/L、(34.7±2.9)U/L，较TBI组明显增强( P均<0.05)。(3)TBI组1, 3, 7 d的Cav1.2表达量为(1.7±0.4)ng/L、(2.3±0.4)ng/L、(2.9±0.5)ng/L，明显低于假伤组的(5.8±0.6)ng/L、(5.6±0.6)ng/L、(5.7±0.7)ng/L ( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的Cav1.2水平为(2.8±0.6)ng/L、(4.7±0.6)ng/L、(4.9±0.5)ng/L，较TBI组明显升高( P均<0.05)。TBI组1, 3, 7 d的IP3R表达量为(12.4±2.5)μg/L、(15.7±3.0)μg/L、(16.3±3.1)μg/L，明显低于假伤组的(30.3±3.0)μg/L、(31.9±2.6)μg/L、(32.1±1.7)μg/L( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1 d的IP3R表达量为(13.1±1.9)μg/L，与TBI组的(12.4±2.5)μg/L比较，差异无统计学意义( P>0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组3 d和7 d的IP3R表达量为(18.4±2.4)μg/L、(22.9±2.8)μg/L，较TBI组明显升高( P均<0.05)。TBI组1，3，7 d的RyR3表达量为(30.8±4.4)pg/ml、(29.1±3.6)pg/ml、(27.9±2.9)pg/ml，明显低于假伤组的(43.5±3.2)pg/ml、(44.9±2.9)pg/ml、(44.2±2.0)pg/ml ( P均<0.05)；TBI＋嗜酸乳杆菌组1，3，7 d的RyR3表达量为(33.3±2.5)pg/ml、(30.4±2.3)pg/ml、(30.2±2.4)pg/ml，与TBI组比较，差异无统计学意义( P均>0.05)。 结论:嗜酸乳杆菌可提高TBI小鼠肠道平滑肌p-MLC20水平，增强MLCK活性，促进Cav1.2、IP3R、RyR3表达，从而保证钙依赖性通路信号的正常传导，可能是其改善TBI小鼠肠道平滑肌收缩的机制之一。

目的:探讨微小RNA(microRNA，miR)-155对人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化的心房肌细胞L-型钙通道α1c(Cav1.2)钙电流(I Ca-L)、基因及蛋白表达的影响。 方法:诱导并鉴定H7hESCs(购自中国科学院)分化获得的人心房肌细胞(分化第8～10天可获得)，向心肌细胞转染含有miR-155前体序列或反义序列的慢病毒，分为对照组、miR-155模拟物(Mimics)组、miR-155抑制子(Inhibitors)组。于72 h后，运用膜片钳、实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)以及蛋白质印迹法(Western blot)检测I Ca-L、mRNA及蛋白的变化。组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:成功获得心房肌细胞，转染miR-155模拟物后，miR-155表达高于对照组(25.52±3.63比1.00±0.00， t＝11.713， P<0.05)，差异有统计学意义。转染miR-155抑制子后，miR-155表达低于对照组(0.59±0.07比1.00±0.00， t＝10.933， P<0.05)，差异有统计学意义。膜片钳结果发现miR-155上调组I Ca-L明显低于对照组(-9.79±3.70比-14.27±3.95， t＝2.611， P<0.05)，差异有统计学意义，RT-qPCR及Western blot证实，miR-155上调组Cav1.2的mRNA表达量(0.45±0.06比1.00±0.00， t＝17.226， P<0.05)及蛋白表达量(0.71±0.07比1.00±0.00， t＝7.708， P<0.05)均低于对照组，差异均有统计学意义。 结论:对于hESCs诱导的心房肌细胞，上调miR-155可导致Cav1.2蛋白表达水平下降，I Ca-L电流减小，可能参与心房肌细胞的电重构。

目的 观察定颤方对交感型阵发性心房颤动(atrial fibrillation,AF)大鼠电生理和心肌细胞肾上腺素能β1 受体(β1-adrenergic receptor,β1-AR)信号通路的影响,探索其"脉神同调"治疗AF的潜在机制.方法 48 只SD大鼠随机分为空白组、模型组、定颤方组(10.67g/kg)和胺碘酮组(52.89mg/kg),每组12 只,连续灌胃给药14 d.实验第12 天起,除空白组,其余组大鼠每日腹腔注射异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)1.5mg/kg,连续3d.第14 天时,除空白组外,其余各组大鼠均行经食道心房Burst刺激进行AF 诱发,观察各组大鼠有效不应期、AF 诱发率和 AF 持续时间.采用 ELISA 测定各组大鼠血清去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平;Western blot和RT-qPCR检测心房肌组织中β1-AR、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、L型钙通道(L-type calcium channel,Cav1.2)蛋白和 mRNA 表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠 NE,β1-AR 蛋白和 mRNA,PKA mRNA水平升高(P<0.01),Cav1.2 蛋白和mRNA水平降低(P<0.05);与模型组比较,定颤方组和胺碘酮组大鼠AF诱发次数明显减少(P<0.01),AF持续时间显著缩短(P<0.05),β1-AR蛋白和mRNA、PKA mRNA表达显著下降(P<0.05),Cav1.2 蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.01),定颤方组大鼠血清NE水平明显减少(P<0.05).结论 定颤方能够有效抑制AF的发生和维持,其机制与调节NE、β1-AR及钙离子通道有关,可能通过抑制交感神经活性、促进钙稳态发挥"脉神同调"治疗AF的作用.

目的:探讨大果木姜子油通过调控miR-328基因抗心律失常H9c2细胞的可能机制.方法:慢病毒转染构建miR-328过表达H9c2细胞株,再运用生物机能实验系统构建H9c2细胞和miR-328过表达H9c2细胞心律失常模型.将H9c2细胞分为正常对照组、模型组、大果木姜子油组、miR-328过表达组和miR-328过表达+大果木姜子油组.根据分组条件培养结束后,qPCR检测H9c2细胞中miR-328相对表达量;ELISA检测炎性因子IL-1β、IL-6、TGF-β含量;比色法检测SOD活性和MDA浓度;DCFH荧光探针检测ROS水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测H9c2细胞L型钙通道相关蛋白表达.结果:成功构建H9c2细胞和miR-328过表达H9c2细胞心律失常模型.与正常对照组比较,模型组和miR-328过表达组细胞TGF-β、SOD活性及CaM、CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、miR-328及CaV1.2蛋白表达和IL-1β、IL-6、MDA、ROS水平显著升高(P＜0.01).经大果木姜子油干预后,心律失常模型细胞形态改善,上述指标均被显著逆转(P＜0.01).结论:大果木姜子油可改善心律失常H9c2细胞,其作用机制可能与调控miR-328基因降低炎症因子水平、调节氧化应激、抑制细胞凋亡及调节L型钙通道相关蛋白表达有关.

目的 研究2型糖尿病大鼠心房组织钙离子通道的表达及钙电流的改变情况.方法 30只雄性Wistar成年大鼠随机分为对照组和糖尿病组.其中糖尿病组高脂高糖饮食4周后给予小剂量链脲佐菌素35 mg/kg腹腔注射,建立2型糖尿病模型.8周后取两组大鼠的血清测定血糖、胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白以及高密度脂蛋白,判定两组的代谢情况.将固定后的大鼠心房组织切成冰冻切片,通过免疫荧光双标染色法测定两组的Cav1.2,Cav3.1和Cav3.2的表达情况.采用Langendorff装置进行急性分离成年大鼠心房细胞,通过全细胞膜片钳技术分别测定两组L型和T型钙电流的峰值电流、I-V曲线、稳态激活和失活电流曲线等数据.结果 与对照组相比,糖尿病组有严重的代谢紊乱,Cav1.2的蛋白表达降低,Cav3.1的蛋白表达升高,Cav3.2的蛋白表达未见明显改变.另外,糖尿病组L型钙电流的峰值电流显著降低(P＜o.05)、电流-电压(I-V)曲线下移、稳态激活和失活电流曲线未见明显差异(P＞0.05),T型钙电流的峰值电流显著升高(P＜0.05)、电流-电压(I-V)曲线上移、稳态激活电流曲线未见明显差异(P＞0.05).结论 2型糖尿病大鼠心房肌细胞有着明显的钙通道重构,导致L型钙电流密度下降,T型钙电流密度上升.

目的:通过自发性2型糖尿病大鼠观察糖尿病状态下大鼠的心脏结构和功能变化,同时探讨糖尿病心肌病的发病机制.方法:用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立糖尿病模型,Zucker lean (ZL)大鼠为对照组.利用超声多普勒法检测ZDF大鼠心脏结构和功能的改变;麦胚凝集素染色计算单个心脏细胞面积;Western blot检测心肌细胞肥大标志物 β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、L型钙通道蛋白α1C亚基(L-type calcium channel α1C subunit,CaV1.2)和钙库操纵性钙通道相关功能蛋白Orai1的表达水平.结果:与ZL大鼠相比,ZDF大鼠的血糖和体重明显增加,左心室壁增厚,心脏舒张功能明显减弱,收缩功能轻度增强;ZDF大鼠左室心肌细胞表面积明显增大,心肌细胞肥大相关蛋白β-MHC和ANP的表达水平也明显增加;ZDF大鼠心肌组织中的RAGE和Orai1蛋白表达增高,CaV1.2蛋白表达下降(P<0.05).结论:2型糖尿病大鼠心肌细胞肥大,心室肥厚,心功能代偿性增强,其机制可能与RAGE表达增强和钙调控异常有关.

目的 探讨自发性高血压大鼠冠脉收缩力与正常大鼠的差异.方法 自发性高血压大鼠(SHR)和 Wistar成年大鼠,在显微镜下,操作取出冠状动脉,制备1.8~2.0 mm长的离体冠状动脉环,经血管张力仪测定动脉环的张力变化.研究不同激动剂诱导冠状动脉收缩的变化.结果 发现给予5-羟色胺(5-HT)、血栓素 A2类似物(U46619)、内皮素-1(ET-1)均可诱导冠状动脉浓度依赖性收缩;且 L-型钙通道(Cav1.2)阻断剂硝苯地平(Nifedip-ine)(1 μmol·L-1)孵育后,明显抑制不同激动剂诱导血管收缩张力(P<0.05);此外,与对照组 Wistar大鼠相比, SHR组给予不同激动剂诱导的冠状动脉收缩均明显较低(P<0.05);且硝苯地平(1 μmol·L-1)孵育后,实验组诱导冠状动脉收缩较对照组明显下降(P<0.05).结论 与 Wistar大鼠相比,SHR大鼠冠状动脉的收缩反应性显著减弱,可能与 L型该通道介导的收缩减弱有关.

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)诱导冠状动脉收缩的机制.方法:取雄性Wistar成年大鼠,制备离体冠状动脉环,经血管张力测定仪测定动脉环的张力变化,并探讨给予不同信号通路抑制剂对5-HT诱导的冠状动脉收缩的影响.结果:首先发现给予5-HT2A受体阻断剂沙格雷酯(sarpogrelate,1 μmol/L)可完全消除5-HT引起的冠状动脉浓度依赖性收缩;磷脂酶Cβ(PLCβ)抑制剂U73122(10 μmol/L和50 μmol/L)、Rho相关蛋白激酶抑制剂Y-27632(3 μmol/L和10 μmol/L)和蛋白激酶C δ亚基(PKCδ)抑制剂rottlerin(3 μmol/L和10 μmol/L)孵育后,均可明显抑制5-HT引起的冠状动脉环收缩(P<0.05);此外,L-型钙通道(Cav1.2)阻断剂硝苯地平(1 μmol/L)及细胞内钙池操纵性钙内流(SOCE)抑制剂SKF96365(10 μmol/L和30 μmol/L)和2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB, 50 μmol/L和100 μmol/L)孵育后,5-HT诱导的血管收缩张力较未处理组明显下降(P<0.05);另外,在含硝苯地平(1 μmol/L)的无钙Kerbs-Henseleit(K-H)液中,发现5-HT仍可诱导血管收缩.结论:5-HT通过激活5-HT2A受体诱导冠状动脉收缩,其机制可能与PKC和Rho激酶信号通路,以及钙调控有关.

目的:探讨蝙蝠葛苏林碱(DS)对人胚肾细胞(HEK293)上表达的L-型钙通道Cav1.2的作用.方法:采用脂质体转染法,将L-型钙通道Cav1.2蛋白基因转染到HEK293细胞上,全细胞膜片钳技术记录L-型钙电流ICav1.2,观察DS对L-型钙通道电生理特性的影响.结果:DS在1,3,10 μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性抑制ICav1.2电流,其抑制率分别为(14.68 ± 4.02)%、(32.37 ± 6.63)% 和(59.63 ± 5.23)%;3 μmol·L-1的DS对ICav1.2的抑制率与相同浓度的伊拉地平比较,其抑制强度约为伊拉地平的40%.结论:DS可浓度依赖性抑制HEK293细胞上表达的Cav1.2,其作用强度比特异性L-型钙通道阻断药伊拉地平要弱.

目的:观察舒郁胶囊对强迫游泳应激诱导的经前烦躁障碍(premenstrual dysphoric disorder,PMDD)肝气郁证大鼠的影响,探讨L型钙通道(L-type calcium channel,LTCC)Cav1.2亚型介导的钙调蛋白(CaM)/CaMKⅡ信号通路在PMDD肝气郁证发生中的机制.方法:动情周期规律的大鼠进行3次强迫游泳实验,筛选出48只雌性Wistar 大鼠进入实验,两次非接受期和接受期悬浮不动时间差值绝对值平均值最小的12只为正常组,其余36只分为模型组、舒郁胶囊组(0.408g·kg-1·d-1),氟西汀组(2.7mg·kg-1·d-1).给药组连续给药2个动情周期,模型组和正常组给以等量纯水.采用旷场实验、强迫游泳悬浮不动时间及悬浮不动次数评价模型和药物干预效果.免疫荧光、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠海马脑区中L型钙通道α1C亚型(CACNA1C),CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的分布及表达.结果:CACNA1C蛋白主要分布在细胞膜上,CaMKⅡ蛋白主要分布在的细胞质内;与正常组比较,模型组大鼠体质量、旷场总路程显著下降(P<0.05,P<0.01),强迫游泳悬浮不动时间、悬浮不动次数显著升高(P<0.05,P<0.01),海马脑区细胞排列散乱,CACNA1C和CaMKⅡ表达升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,氟西汀和舒郁胶囊组大鼠体质量、旷场总路程明显升高(P<0.05,P<0.01),强迫游泳悬浮不动时间、悬浮不动次数明显降低(P<0.05,P<0.01),海马脑区细胞排列整齐,CACNA1C和CaMKⅡ表达明显降低(P<0.05,P<0.01).结论:利用强迫游泳可成功诱导出PMDD肝气郁证大鼠模型.舒郁胶囊可能通过Cav1.2介导的CaM/CaMKⅡ信号通路发挥治疗作用,显著改善PMDD肝气郁证大鼠的行为学变化.