目的:研究lncRNA LINC00473对缺氧诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤的影响和机制。方法:PC12细胞分成Control组、Model组（缺氧处理）、Vector组（转染阴性对照载体，缺氧处理）、LINC00473组（转染LINC00473过表达载体，缺氧处理）、LINC00473+LY294002组（转染LINC00473过表达载体，PI3K/AKT信号抑制剂LY294002和缺氧处理），MTT检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，免疫印迹检测Bax、Bcl-2、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达，TBA法检测MDA水平，DCFH-DA法检测ROS水平，比色法检测培养液上清中LDH水平。结果:与Control组比较，Model组PC12细胞存活率降低[（100.00±10.26）% vs（62.53±5.13）%， P<0.05]，细胞凋亡率升高[（4.23±0.21）% vs（18.36±1.47）%， P<0.05]，细胞中Bax蛋白表达水平升高，Bcl-2蛋白表达水平降低，MDA[（2.11±0.13）mmol/mg vs （3.24±0.24）mmol/mg， P<0.05]、ROS水平升高（1.00±0.11 vs 2.41±0.16， P<0.05），培养液上清中LDH水平也升高[（456.33±41.28）U/L vs （587.92±53.16）U/L， P<0.05]，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低。过表达LINC00473能够减轻缺氧诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤；PI3K/AKT信号抑制剂LY294002能够逆转过表达LINC00473对缺氧诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤的抑制作用。 结论:LINC00473通过激活PI3K/AKT信号抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤。

目的 探讨龙胆苦苷对胃癌细胞HGC-27 增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 HGC-27 细胞分为对照组(正常培养)和不同剂量龙胆苦苷组(分别用含10、20、40 μmol/L龙胆苦苷的培养液培养24 h),MTT法检测细胞增殖,Tr-answell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中 LINC00473 和 miR-6838-5p 表达.转染LINC00473 小干扰RNA或miR-6838-5p模拟物至HGC-27 细胞,MTT法、Transwell实验观察细胞增殖、迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验验证LINC00473 和miR-6838-5p的调控关系.转染LINC00473 过表达载体至HGC-27 细胞,然后用40 μmol/L龙胆苦苷干预 24 h,MTT法、Transwell实验观察细胞增殖、迁移和侵袭.结果 与对照组比较,龙胆苦苷显著降低了HGC-27细胞OD值、迁移数和侵袭数及LINC00473 表达(P<0.05),显著增加了miR-6838-5p表达(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05).敲减LINC00473 或表达miR-6838-5p后,GC-27 细胞OD值、迁移和侵袭数均显著降低(P<0.05).LINC00473 靶向负调控miR-6838-5p.过表达LINC00473 显著逆转了龙胆苦苷对HGC-27 细胞OD值、迁移数和侵袭数及miR-6838-5p表达的影响(P<0.05).结论 龙胆苦苷可能通过调控LINC00473/miR-6838-5p轴抑制了胃癌细胞HGC-27 增殖、迁移和侵袭.

目的:分析LINC00473在胃癌中的表达情况、临床意义及对人胃癌细胞增殖水平的影响.方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间LINC00473的表达差异;利用 Kaplan-Meier曲线进行患者生存分析;MTT方法检测胃癌细胞增殖水平、流式细胞术检测凋亡率的改变.结果:与癌旁组织比较,LINC00473在胃癌组织中的表达明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.05);生存分析发现,LINC00473表达与胃癌患者OS和DFS时间相关,LINC00473高表达的胃癌患者,OS和DFS时间明显缩短(P＜0.05).转染LINC00473 siRNA至胃癌细胞后,结果发现与阴性质粒转染组比较:转染siRNA-LINC00473的胃癌细胞,LINC00473表达明显降低;LINC00473表达下调后细胞增殖水平减慢,凋亡率增加.结论:LINC00473是一个新的胃癌生物标记物,可作为潜在的治疗新靶点.

目的 探讨LINC00473在人胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 采用实时荧光定量PCR检测胃癌细胞中LINC00473的表达水平;转染靶向LINC00473的siRNA片段或LINC00473过表达载体以构建敲减或过表达的胃癌细胞系;通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力以及EMT相关蛋白标志物表达水平的变化.结果 与GES-1细胞相比,LINC00473在胃癌细胞中的表达水平明显降低(P<0.05).与siNC转染对照组相比,敲减LINC00473表达后,靶细胞的增殖能力(F=163.10,P<0.01)、克隆形成(t=3.29,P<0.05)和迁移能力(t=4.68,P<0.05)明显增加;E-cadherin表达减弱(t=4.08,P<0.05),N-cadherin(t=5.06,P<0.01)、Snail(t=7.69,P<0.01)和Vimentin(t=3.82,P<0.05)蛋白的表达水平升高.与Vector转染对照组相比,上调LINC00473表达后靶细胞的增殖能力(F=186.00,P<0.01)、克隆形成(t=3.22,P<0.05)和迁移能力(t=5.52,P<0.01)明显下降;E-cadherin表达升高(t=2.90,P<0.05),N-cadherin(t=7.44,P<0.01)、Snail(t=2.78,P<0.05)和Vimentin(t=4.64,P<0.01)蛋白的表达水平降低.结论 敲减LINC00473的表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移的能力,可能通过调控EMT参与胃癌细胞的迁移.

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织长链非编码RNA(lncRNA)LINC00473表达变化及其临床意义.方法 选择NSCLC组织及其配对的癌旁正常组织各58例份,采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00473表达.以NSCLC组织lncRNA LINC00473相对表达量的中位数为界,将患者分为lncRNA LINC00473高表达者与低表达者,比较不同lncRNA LINC00473表达者术后生存时间.取传3代、对数生长期、生长状态良好的肺癌A549细胞,随机分为si-LINC00473组、si-Scramble组,分别转染si-LINC00473、si-Scramble.收集两组转染48 h细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00473表达;分别采用CCK-8法、AnnexinV-FITC/PI双染法、Transwell迁移实验检测细胞增殖、凋亡和迁移能力.结果 NSCLC组织与癌旁正常组织lncRNA LINC00473相对表达量分别为1.89±0.132、1.16±0.076,二者比较P<0.05.lncRNA LINC00473高表达者36例、低表达者22例,二者术后生存时间分别为(26.77±5.82)、(41.96±8.75)个月,二者比较P<0.05.si-LINC00473组、si-Scramble组lncRNA LINC00473相对表达量分别为0.26±0.07、1.14±0.15,两组比较P<0.05.与si-Scramble组比较,si-LINC00473组细胞增殖和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高(P均<0.05).结论 NSCLC组织lncRNA LINC00473高表达;敲低lncRNA LINC00473表达,可抑制NSCLC细胞增殖和迁移能力并能促进其凋亡.lncRNA LINC00473有可能成为NSCLC基因治疗的潜在靶点.

目的 探讨LINC00473调控miR-210/10-11易位酶2(TET2)分子轴对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞生物学特性的影响.方法 人晶状体上皮细胞SRA01/04传代培养后,采用100μmol·L-1 H2 O2处理24 h.将SRA01/04细胞分为Con组、H2 O2组、H2 O2+pcDNA3.1组、H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473组、H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00473+miR-210组、H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473+si-NC组、H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473+si-TET2组.细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.双荧光素酶报告基因实验检测LINC00473与miR-210、miR-210与TET2的靶向结合关系.结果 Con组与H2 O2组、H2 O2+pcDNA3.1组与H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473组、H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473+miR-NC组与pcDNA3.1-LINC00473+miR-210组、H2 O2+pcD-NA3.1-LINC00473+si-NC组与H2 O2+pcDNA3.1-LINC00473+si-TET2组相比,细胞存活率、细胞凋亡率、克隆形成数、MDA含量、SOD和GSH-Px活性差异均有统计学意义(均为P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC和WT-LINC00473共转染组SRA01/04细胞荧光素酶活性(0.36±0.03)较miR-210 mimics和WT-LINC00473共转染组(0.96±0.10)显著降低(P<0.05);miR-NC和WT-TET2共转染组SRA01/04细胞的荧光素酶活性(0.33±0.03)较miR-210 mimics和WT-TET2共转染组(0.94±0.09)显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);LINC00473靶向作用miR-210并下调其表达水平,miR-210可负调控TET2的表达水平.结论 LINC00473通过下调miR-210/TET2分子轴减轻对H2 O2对人晶状体上皮细胞增殖、凋亡和氧化损伤的影响.

药物耐药导致胃癌(gastric cancer,GC)细胞对化疗的敏感性降低,而热疗(hyperthermia,HT)可以增加化疗的敏感性并引起细胞内基因发生特异性表达.然而,热疗增强细胞SGC-7901/DDP对顺铂(cisplatin,diaminedichloroplatinum,DDP)敏感性的分子机制研究尚缺乏报道.在本研究中,利用MTT实验和流式细胞术分析了对照组、DDP组、HT组和DDP联合HT组细胞SGC-7901/DDP的增殖与凋亡情况.采用高通量微阵列分析和实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析热疗增敏的分子机制.结果 显示,与DDP组相比,HT组与DDP联合HT组的细胞增殖被显著抑制(P＜0.001),而与DDP联合HT组细胞相比,HT组细胞增殖受抑制更为显著(P＜0.05);与DDP组相比,HT组、DDP联合HT组细胞发生早期凋亡的比例显著增加(P＜0.001),且DDP联合HT组明显高于HT组(P＜0.05),表明HT增强了顺铂对细胞SGC-7901/DDP的敏感性.相比对照组,在DDP联合HT干预后,LINC00161和TCONS_00018082上调(P＜0.01),LINC00473和TCONS_00015171下调(P＜0.01);另外,DDP联合HT组比对照组中的差异表达mRNA显著富集在凋亡信号通路、TGF-β信号通路和Notch信号通路(P＜0.05).本研究提示,热疗可能通过调控上述lncRNA和相关通路增强细胞SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性.

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00473在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展中的作用,研究其潜在的分子生物学机制.方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选出在HCC中报道较少且表达较高的LINC00473.应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测20例肝癌患者组织中LINC00473的表达水平,分析LINC00473的表达水平与患者年龄、TNM分期等临床病理参数的相关性,并检测正常肝脏细胞L02和HepG2、Huh-7、SMMC-7721、Bel-7402、HCC-LM3、HCC-LM96种肝癌细胞中LINC00473的表达水平,选取表达量最高的细胞进行细胞功能实验.沉默LINC00473的重组质粒转染肝癌细胞,在24 h、48 h通过5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine,EDU)细胞增殖实验检测;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 TCGA数据库中发现,LINC00473在肝癌患者的癌组织中表达量显著高于癌旁组织(P<0.05).在本地组织样本中,相对于癌旁组织,LINC00473在HCC癌组织中表达水平显著上调,差异有统计学意义(P<0.05).LINC00473表达水平同患者年龄(P<0.05)、TNM分期(P<0.05)、美国癌症联合委员会(AJCC)临床分期(P<0.05)、甲胎蛋白(AFP)(P=0.001)相关,而与患者肿瘤大小、肝炎病史无明显相关性(P>0.05).在正常肝脏细胞L02中LINC00473的表达水平显著低于肝癌细胞(P<0.05).LINC00473在HepG2中表达最高.抑制LINC00473实验结果显示,抑制LINC00473能够抑制HepG2细胞的增殖,具有抑制细胞侵袭能力,并有效促进HepG2细胞的凋亡.结论 LINC00473在HCC中表达上调并参与肝癌细胞的增殖、侵袭和凋亡过程,初步揭示了LINC00473在HCC发生、发展中的癌基因作用.

目的 筛选慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)进展到胰腺癌(pancreatic cancer,PC)过程中发挥潜在作用的miRNA及其调控网络.方法 从GEO数据库中下载芯片数据GSE24279和GSE25820,筛选出在CP和PC中差异表达的miRNA(differential expression miRNA,DEM).预测DEM的靶基因和长链非编码RNA(long non-coding RNA),随后进行靶基因富集分析,构建蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)并筛选出枢纽基因和具有特殊生物学功能的模块,通过综合分析DEM,枢纽基因和LncRNA的表达和预后,基于竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ceRNA)的理论,构建miRNA的调控网络.结果 筛选出16个DEM,其靶基因参与共生过程,细胞器组织的正调控,细胞质的核周区域和双链RNA结合.从PPI网络中,筛选出17个枢纽基因和3个模块.综合分析后,将hsa-miR-221-3p,hsa-miR-222-3p,hsa-miR-210-3p及RNPS1,MGRN1作为CP进展为PC中关键节点.41个LncRNA结合关键DEM,其中MIAT,DANT2,TTN-AS1,PAXIP1-AS2和LINC00473具有预后价值.综合以上结果,构建出包含3个DEM,2个基因和5个LncRNA的ceRNA调控网络.结论 研究采用的整合分析方法有助于揭示CP恶变的机制,构建的LncRNA-miRNA-基因调控网络,为预测和治疗由CP进展为PC的患者提供了新的生物学靶点.