目的:确定并观察1个汉族Leber先天性黑矇（LCA）家系的致病基因变异和临床表型。方法:回顾性研究。2022年5月在河南省立眼科医院就诊的LCA10型一家系（1例患者和2名家系成员）纳入研究。详细询问患者病史、家族史并行眼底彩色照相、闪光视网膜电图（F-ERG）检查。采集先证者及其父母的外周静脉血3 ml，提取全基因组DNA。全外显子组测序（WES）、线粒体环基因组（mtDNA）测序以获得致病基因及变异。通过生物信息学分析方法对所有变异位点进行注释，并参考美国医学遗传学和基因组学学会（ACMG）对所有变异位点进行致病等级评估。对候选位点进行Sanger验证，并对致病性证据不足的错义变异行Minigene体外功能验证。结果:先证者，男，7个月。视物追随反应差，指压眼征、畏光、眼球震颤，黄斑中心凹周围区视网膜色素上皮部分脱失。2岁时，F-ERG检查发现，双眼a、b波振幅重度降低，峰时延长，甚至无波形。先证者父母临床表型未见明显异常。WES结果显示，先证者 CEP290基因第40、2号外显子分别存在c.5515_5518del （p.Glu1839Lysfs*11）（V1）移码变异和c.74C>T （p.Ala25Val）（V2）错义变异。mtDNA测序结果为阴性。Sanger验证结果表明，先证者父亲、母亲分别携带杂合移码变异V1、新发错义变异V2，构成复合杂合变异。Minigene体外功能验证结果表明，V2变异使2号外显子产生一个新的剪接供体位点，从而导致2号外显子右侧缺失30个碱基对，蛋白质框内缺失10个氨基酸残基。ACMG评级分别为致病（V1）、可能致病变异（V2）。 结论:CEP290基因c.5515_5518del和新发变异c.74C>T构成复合杂合变异可能是本家系的致病原因，分别导致截短蛋白的产生和前体信使RNA的异常剪接。LCA具有发病年龄小、视功能严重损害和致病变异多样性等特点。

目前，一些遗传性视网膜疾病的突变基因已经得到确认，但仍缺乏有效的治疗方法。成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS)系统可以通过非同源末端连接及同源定向修复的方式编辑人类基因组DNA，其为遗传性视网膜疾病的治疗提供了更多的可能性。CRISPR/Cas9不仅可以纠正遗传性疾病患者来源特异性诱导多能干细胞(iPSCs)的突变基因，随后分化为视网膜相关的细胞，进而实施细胞治疗；其也可以通过载体传递至体内，直接作用于靶细胞实现体内基因编辑。CRISPR/Cas9基因编辑技术在遗传性视网膜疾病中的应用主要集中在视网膜色素变性、遗传性X连锁青少年视网膜劈裂症、Leber先天性黑矇10型等疾病中，其中体外应用CRISPR/Cas9治疗LCA10已经进入临床试验阶段。本文对CRISPR/Cas9基因编辑技术的作用机制、研究进展，以及其在遗传性视网膜疾病中的应用进展进行综述。

目的:观察 CRB1突变型Leber先天性黑矇（LCA）和早发视网膜萎缩（EOSRD）患儿基因型与表型关系特征。 方法:回顾性临床研究。2013年1月至2019年12月于上海交通大学医学院附属新华医院眼科临床及基因诊断的 CRB1突变LCA和EOSRD患儿10例纳入研究。二代测序及致病性分析为 CRB1基因突变，并经一代验证及家系共分离分析予以明确鉴定为 CRB1突变型。患儿均行视网膜电图（ERG ）、眼底检查。同时行光相干断层扫描（OCT）检查6例，荧光素眼底血管造影（FFA）检查1例，广角激光扫描检眼镜（UWF SLO ）检查7例。 结果:10例患儿中，LCA 6例，EOSRD 4例。首次就诊平均年龄3.61岁。ERG明暗适应波形平坦6例，重度下降4例。成功检测到致病性突变位点19个，其中新发现突变位点9个。纯合突变1例，复合杂合突变9例。眼底视网膜呈"铜钱"样、"椒盐"样、"骨细胞"样色素改变分别为4、2、1例，"结晶"样色素改变1例，黄斑区色素瘢痕2例。行UWF SLO检查的7例，眼底中周部均可见不同程度小动脉旁色素上皮保留（PPRPE ）。行OCT检查的6例，视网膜外层萎缩，椭圆体带消失。双眼对称性黄斑囊样水肿、黄斑区劈裂样囊变以及右眼黄斑前膜与视盘及黄斑区粘连各1例；视网膜结构粗糙增厚，中心凹变薄3例。FFA检查，晚期视盘荧光素染色，黄斑区荧光素积聚，各象限沿血管走形呈弥漫性强荧光，周边PPRPE呈"霜枝"样强荧光，呈类葡萄膜炎样改变1例。结论:CRB1突变型患者基因型和表型关系复杂，PPRPE是其特征性共性改变。

目前,一些遗传性视网膜疾病的突变基因已经得到确认,但仍缺乏有效的治疗方法.成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS)系统可以通过非同源末端连接及同源定向修复的方式编辑人类基因组DNA,其为遗传性视网膜疾病的治疗提供了更多的可能性.CRISPR/Cas9不仅可以纠正遗传性疾病患者来源特异性诱导多能干细胞(iPSCs)的突变基因,随后分化为视网膜相关的细胞,进而实施细胞治疗;其也可以通过载体传递至体内,直接作用于靶细胞实现体内基因编辑.CRISPR/Cas9基因编辑技术在遗传性视网膜疾病中的应用主要集中在视网膜色素变性、遗传性X连锁青少年视网膜劈裂症、Leber先天性黑矇10型等疾病中,其中体外应用CRISPR/Cas9治疗LCA10已经进入临床试验阶段.本文对CRISPR/Cas9基因编辑技术的作用机制、研究进展,以及其在遗传性视网膜疾病中的应用进展进行综述.

Leber先天性黑朦(Leber congenital amaurosis,LCA)是一种导致儿童先天性盲的严重遗传性视网膜疾病,占儿童先天性双眼盲的10％～20％,占遗传性视网膜病变类疾病的5％[1].由于其症状和体征的非特异性,很多患者较易被诊断为原发性视网膜色素变性或视锥视杆细胞营养不良症,这也为针对该病的治疗增加了难度.因此,遗传学的基因诊断对于LCA的确诊就显得尤为重要.近期在北京同仁医院眼科中心遇到一个RDH12纯合突变型LCA病例,现报道如下.

CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)基因编辑技术通过精准改变细胞DNA序列,控制细胞命运及表型,是有望从根本上改变疾病治疗的新技术.由于眼球独特的生理构造,基因编辑疗法在治疗眼科疾病方面的应用具有明显的优势.目前,CRISPR基因编辑疗法治疗10型Leber先天性黑矇(Leber congenital amaurosis 10,LCA10)的临床试验已经展开,治疗其他多种眼科疾病的临床试验也即将开始.随着新一代CRISPR基因编辑技术的发展,基因编辑疗法有望为眼科疾病的治疗提供新的手段.