目的:探讨甲状腺素(T 4)能否通过整合素α vβ 3影响分化型甲状腺癌(DTC)细胞增殖、转移潜能及其分子机制。 方法:体外培养甲状腺乳头状癌TPC－1、K1及甲状腺滤泡状癌(FTC)133细胞株，采用免疫荧光和流式细胞术分析细胞表面整合素α vβ 3的表达水平。给予T 4、四碘甲状腺乙酸(Tetrac)、精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸(RGD)多肽单独或联合处理DTC细胞后，应用细胞计数试剂盒－8(CCK－8)法及Transwell小室迁移和侵袭实验检测细胞增殖和转移潜能的变化。通过小干扰RNA(siRNA)转染模型验证整合素α v或β 3亚基沉默能否逆转T 4对DTC细胞的作用。利用Western blot法检测下游信号蛋白磷酸化细胞外信号调节激酶(p－ERK)1/2、总细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的表达水平。应用丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1/2的抑制剂GSK1120212阻断ERK1/2磷酸化，检测其对T 4处理细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用Tukey法。 结果:TPC－1、K1和FTC133细胞整合素α vβ 3表达均呈阳性，相对平均荧光强度(MFI)分别为61.93±18.61、16.89±2.43和32.36±0.83，阳性细胞百分比分别为(94.38±1.30)%、(74.11±3.87)%和(50.67±1.78)%( F值：13.36和217.30， P值：0.006和<0.001)。T 4组TPC－1、K1和FTC133细胞的增殖、迁移和侵袭能力较对照组明显增强(96 h， F值：62.67~297.50， q值：13.15~20.73，均 P<0.001)；T 4+Tetrac和T 4+RGD多肽处理组DTC细胞的增殖、迁移和侵袭能力较T 4组明显减低(96 h， q值：8.61~17.54，均 P<0.001)。利用siRNA敲减整合素α v或β 3亚基可明显抑制T 4对3种DTC细胞的促增殖、迁移和侵袭作用(72 h， F值：7.75~70.98， q值：4.77~15.21，均 P<0.05)。Western blot结果显示，T 4处理导致DTC细胞ERK1/2磷酸化水平明显升高，且T 4诱导的ERK1/2信号通路激活可被Tetrac、RGD多肽、整合素α v或β 3亚基敲减所阻断。GSK1120212可以明显逆转T 4诱导的细胞增殖、迁移和侵袭(96 h， F值：47.53~151.40， q值：10.32~16.65，均 P<0.001)。 结论:T 4通过与整合素α vβ 3结合，激活ERK1/2通路促进DTC细胞的增殖和转移能力。

目的:探讨zeste同源物2的增强子（EZH2）和人类mutL同源物1（hMLH1）在神经胶质瘤中的作用。方法:设计合成靶向抑制EZH2和hMLH1和hMLH1特异的小干扰RNA（siRNA），转染U-87细胞，分为对照组和敲低组，通过5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）增殖实验分析两组的增殖能力。采用 t检验进行组间比较。 结果:神经胶质瘤组织和细胞中EZH2（7.97±0.14、6.00±0.18、6.24±0.11， t＝83.80、47.18、83.55）和hMLH1（6.15±0.08、3.93±0.17、4.25±0.12， t＝103.700、29.800、45.510）的mRNA水平明显高于对照组（ P<0.01）。U-87胶质瘤细胞的siRNA转染导致细胞增殖能力降低，对照组（68.2±14.8），EZH2敲低组（33.5±13.1），hMLH1敲低组（43.1±10.0）。敲低EZH2和hMLH1表达后增强转染细胞凋亡（ t＝3.041、2.934， P<0.05）。沉默后磷酸化丝裂原细胞外激酶1（p-MEK1）/丝裂原细胞外激酶1（MEK1）和磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1）/细胞外信号调节激酶（ERK1）的比例下调，p-MEK（ t＝5.590、6.548， P<0.05）和p-ERK1的水平降低（ t＝10.730、9.260， P<0.05）。与单独转染EZH2-siRNA和hMLH1-siRNA比较，EZH2-siRNA和hMLH1-siRNA共转染的U-87细胞中，抑制作用增强（ t＝6.425、7.273， P<0.05）。 结论:对EZH2和hMLH1的抑制可能通过激活MEK/ERK途径影响神经胶质瘤的生长和细胞死亡。

心-面-皮肤综合征(cardio-facio-cutaneous syndrome，CFCS)是一种罕见的遗传综合征，与丝裂原活化蛋白激酶(RAS-mitogen-activated protein kinase，RAS-MAPK)信号传导通路异常激活有关，由BRAF、MAP2K1、MAP2K2、KRAS基因生殖系突变所致，呈常染色体显性遗传。CFCS患者表现为多系统异常，包括颅面部畸形、先天性心脏病、皮肤异常、胃肠道异常、生长迟缓、神经认知障碍、癫痫等，与其他RAS通路病患者有许多重叠的临床表型。CFCS患者可通过典型的临床表现和基因检测明确诊断，早期诊断有助于评估相关基因型的严重并发症风险，改善患者预后。MEK抑制剂可有效改善部分CFCS动物模型的异常表型，但目前尚无有效的临床治疗方法，明确诊断后需行多学科评估与对症治疗。

目的:探讨胡椒碱对1，2-二甲基肼(DMH)/右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导实验性结肠癌肿瘤细胞生长和增殖的影响及其具体机制。方法:将36只小鼠分为对照组、模型组和胡椒碱组，每组12只。对照组给予生理盐水灌胃；模型组和胡椒碱组通过DMH/DSS复合法建立实验性结肠癌模型后分别给予生理盐水和胡椒碱3.6 mg/(kg·d)灌胃。观察肿瘤负荷和体积，HE染色法观察小鼠结肠的组织学变化，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAS/PI3K/AKT相关通路蛋白的表达。结果:模型组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著低于对照组(均 P<0.05)，Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著高于对照组(均 P<0.05)。胡椒碱组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著高于模型组(均 P<0.05)；Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著低于模型组(均 P<0.05)。 结论:胡椒碱对DMH/DSS诱导的实验性结肠癌发生具有抑制作用，其抑制作用可能涉及到RAS/PI3K/AKT信号轴。

目的:分析阑尾腺癌患者Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源(KRAS)基因突变特点及其与Ras-Raf-丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路活性的关系。方法:选取丽水市中心医院2014年1月至2020年1月收治、经手术切除的41例阑尾腺癌患者为观察组，随机抽取50例同期手术的阑尾炎患者为对照组。统计其临床与随访资料，并采用Snapshot法测定患者组织KRAS基因的突变情况，采用蛋白免疫印迹(WB)试验测定癌组织MAPK/ERK信号通路关键蛋白的表达。比较KRAS突变与非KRAS突变阑尾腺癌患者临床特征和预后。结果:观察组的KRAS基因突变率高于对照组(41.5% vs 10.0%)，p-ARAF/ARAF、p-MEK1/MEK1、p-ERK1/ERK1蛋白表达水平也高于对照组，组间差异有统计学意义(均 P<0.05)。观察组KRAS突变患者的p-ARAF/ARAF、p-MEK1/MEK1、p-ERK1/ERK1蛋白表达水平明显高于非KRAS突变者，KRAS突变患者Ⅳ期比例、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)199及CA125的阳性率高于非KRAS突变患者，总生存期和无进展生存期短于非KRAS突变患者，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:阑尾腺癌KRAS突变率较高，KRAS突变导致的MAPK/ERK信号通路激活可能在阑尾腺癌致病机制中发挥作用，具有深入研究的价值。

目的:探讨鹦鹉热衣原体SINC蛋白对宿主细胞凋亡的影响，及丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase，MAPK/ERK)信号通路在其中的调控作用。方法:用重组SINC蛋白刺激HeLa细胞，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的蛋白质表达水平及ERK1/2的磷酸化程度，Hoechst 33258染色检测SINC蛋白刺激对HeLa细胞凋亡的影响。用50 μmol/L MEK1/2抑制剂U0126预处理HeLa细胞，流式细胞术检测不同浓度SINC蛋白刺激后细胞凋亡率的变化，Western blot检测Bax和Bcl-2的蛋白质表达水平。结果:Western blot检测结果显示，用10 μg/ml SINC蛋白刺激HeLa细胞18 h后，Bax表达下调，Bcl-2表达上调，Bax/Bcl-2比值最低；p-ERK1/2与ERK1/2的比值明显上调；Hoechst 33258染色检测发现5、10、15 μg/ml SINC蛋白刺激后，HeLa细胞内凋亡小体数量明显减少。加入抑制剂U0126后，Bcl-2表达下调，cleaved PARP表达量显著增加；流式细胞术显示细胞凋亡率明显增高。结论:SINC蛋白通过激活MAPK/ERK信号通路抑制HeLa细胞发生凋亡。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）C9ORF139靶向微小RNA（miR）-24-3P/TAOK1调控急性髓系白血病（AML）细胞增殖的作用和机制。方法:AML细胞株（人急性早幼粒白血病细胞株HL-60以及人单核白血病细胞株THP-1）购自中国科学院，分为4组：A组为阴性对照（siNC）组，B组为干扰C9ORF139（siC9ORF139）组，C组为siC9ORF139+miR-24-3P抑制剂组，D组为miR-24-3P+TAOK1过表达（oe-TAOK1）组。采用实时荧光定量逆转录（qRT）-PCR检测4组AML细胞株HL-60、THP-1中的表达水平。细胞计数试剂盒-8（CCK8）法检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞的凋亡情况，Transwell实验检测4组细胞的迁移、侵袭能力，Western印迹法检测p-丝氨酸/苏氨酸激酶（p-raf）、p-丝裂原活化蛋白激酶（p-MEK）、p-细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）表达。构建荧光素酶报告基因质粒，验证C9ORF139、miR-24-3P、TAOK1的结合能力。裸鼠皮下肿瘤细胞接种分为HL-60（A组）和HL-60（B组）。结果:敲减细胞中C9ORF139基因并培养120 h后，在HL-60及THP-1细胞中，B组细胞增殖能力（0.62±0.02、0.82±0.02）、迁移能力（0.22±0.03、0.05±0.01）、侵袭能力（0.20±0.02、0.13±0.03）均低于A组（1.30±0.02、1.83±0.07；0.99±0.02、0.99±0.02；1.00±0.01、1.00±0.01）（均 P<0.05）。共转染miR-24-3抑制剂后，细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组（均 P<0.05）。共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒后，细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组（均 P<0.05）。当干扰细胞中C9ORF139基因后，与A组凋亡水平（0.31±0.27、2.49±0.33）相比，B组（28.56±8.07、17.74±1.91）均较高（均 P<0.05）；当共转染miR-24-3P抑制剂后，C组细胞凋亡水平（2.34±0.09、3.06±0.06）均低于B组（均 P<0.05）；在共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒组中，D组细胞凋亡水平（2.16±1.29、4.80±0.37）均低于B组（均 P<0.05）。在HL-60、THP-1细胞中，当C9ORF139未突变时，miR-24-3P组荧光素酶活性均低于miR-NC组（均 P<0.05）。当C9ORF139序列中与miR-24-3P结合位点突变后，miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义（ P>0.05）。当TAOK1未突变时，miR-24-3P组荧光素酶活性低于miR-NC组（ P<0.05）；当TAOK1序列中与miR-24-3P结合位点突变后，miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义（ P>0.05）。当干扰HL-60细胞中C9ORF139基因并培养72 h后，B组Raf、MEK及ERK分子磷酸化表达水平均低于A组（均 P<0.05）。第14天，A组肿瘤体积高于B组［（284.49±57.61）比（125.70±18.64）mm 3， P=0.017］。HL-60 A组肿瘤重量高于B组［（847.80±159.36）比（408.40±113.16）mg， P=0.001］。 结论:lncRNA C9ORF139通过调控miR-24-3P上调TAOK1促进AML细胞的增殖、侵袭、迁移，C9ORF139表达具有促进AML裸鼠皮下肿瘤生长的作用。

目的:探讨黑色素瘤中长链非编码RNA（lncRNA）MTATP6P1的表达及其靶向miRNA-411-5p（miR-411-5p）对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:从肿瘤相关lncRNA数据库（TANRIC数据库，更新时间2021年7月）中收集461例黑色素瘤组织和癌旁组织（距肿瘤边缘2 cm以上）样本，比较两组MTATP6P1的表达。采用生物信息学软件lncRNA Disease v2.0预测MTATP6P1可能存在结合位点的微RNA（miRNA）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测黑色素瘤细胞A-375、WM266-4、VMM5A、A2058和正常人表皮黑色素细胞PIG1中MTATP6P1的相对表达量，将MTATP6P1相对表达量最低的细胞分为MTATP6P1组（转染MTATP6P1过表达质粒）和NC组（转染空白质粒），进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞增殖能力；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell实验检测细胞侵袭能力；双荧光素酶报告基因实验检测MTATP6P1和miR-411-5p的靶向关系；蛋白质印迹法检测细胞内ERK信号通路相关蛋白的表达。结果:黑色素瘤组织和癌旁组织中MTATP6P1相对表达量分别为9.82±0.58和11.56±0.16，黑色素瘤组织中MTATP6P1表达水平低于癌旁组织（ t＝9.56， P＝0.009）。正常人表皮黑色素细胞PIG1以及黑色素瘤细胞A-375、WM266-4、VMM5A、A2058中MTATP6P1相对表达量分别为1.01±0.13、0.12±0.02、0.66±0.04、0.39±0.07、0.49±0.05，黑色素瘤细胞中MTATP6P1相对表达量均低于PIG1细胞（均 P<0.05），取相对表达量最低的A-375细胞进行后续实验。MTATP6P1组和NC组A-375细胞MTATP6P1相对表达量分别为14.83±1.67和1.02±0.30（ t＝8.13， P<0.001）。培养16、24、32、40 h后，MTATP6P1组细胞增殖能力均低于NC组（均 P<0.05）。MTATP6P1组和NC组A-375细胞划痕愈合率分别为（26±7）%和（55±4）%，MTATP6P1组划痕愈合率低于NC组（ t＝3.48， P＝0.009）。MTATP6P1组和NC组A-375侵袭细胞数分别为（32±12）个和（116±17）个，MTATP6P1组侵袭细胞数低于NC组（ t＝4.11， P＝0.006）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，MTATP6P1与miR-411-5p存在靶向关系。MTATP6P1组和NC组A-375细胞中miR-411-5p相对表达量分别为1.04±0.16和5.37±0.68，MTATP6P1组miR-411-5p表达水平低于NC组（ t＝6.20， P<0.001）。MTATP6P1组A-375细胞中ERK信号通路蛋白p-Ras、p-Raf、p-MEK1、p-RSK、AP-1表达均低于NC组。 结论:MTATP6P1可通过靶向miR-411-5p抑制黑色素瘤A-375细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

目的:探索研究DNAJB6在部分肝移植肝再生的作用及分子机制。方法:采用DA大鼠作为供体，Lewis大鼠作为受体，构建部分肝移植肝再生模型。按照部分肝移植不同时间点分为6组(每组6对)，分别为灌注前、劈裂肝完成灌注后、门静脉开放后、关腹前、术后第3、7天组。采用C57小鼠构建部分肝切除残余肝再生模型，根据肝切除不同时间点分为6组(每组6只)，分别为对照组、1 d、2 d、3 d、4 d和5 d组。利用基因表达数据库的肝再生数据分析和肝再生动物标本找到肝再生的关键基因。通过转染干扰RNA构建DNAJB6低表达的人源肝细胞。通过蛋白印迹检测细胞增殖核抗原(PCNA)和细胞增殖实验研究DNAJB6与肝再生的关系。通过蛋白印迹检测核蛋白和经典细胞增殖信号通路节点蛋白研究DNAJB6调节部分肝移植肝再生的可能分子机制。结果:部分肝切除残余肝再生结果显示，DNAJ家族基因在再生肝基因芯片中差异表达，其中DNAJB6在再生肝基因芯片中低表达。与此同时，DNAJB6在部分肝移植和部分肝切的再生肝组织中低表达。DNAJB6沉默后，细胞PCNA表达水平升高且增殖速率加快。然而，细胞核提取没有检测到β-catenin胞核/质间改变，且Wnt4蛋白水平也未发生变化。虽然，Ras/MAPK下游的p38和JNK2活化水平没有发生变化，但ERK活化水平升高。结论:在再生肝组织中，肝细胞可能通过降低DNAJB6的表达水平抑制Ras/MEK/ERK信号通路以促进肝再生。

目的:探讨锌指棕榈酰基转移酶9(ZDHHC9)的表达对乳腺癌增殖、迁移侵袭和凋亡的影响以及其作用机制。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析乳腺癌中ZDHHC9的表达情况及与预后的关系。用慢病毒感染方式在HCC1937细胞、MCF7细胞、SKBR3细胞中敲低ZDHHC9，每种细胞分别设置一个对照组(shNC)和两个敲低实验组(sh1、sh2)，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测、细胞增殖检测(EdU)、平板克隆形成实验检测ZDHHC9对乳腺癌细胞增殖影响，通过划痕实验和小室细胞侵袭实验(Transwell)验证ZDHHC9对迁移和侵袭能力的影响，细胞流式分析检测ZDHHC9对细胞凋亡的影响。蛋白质免疫印迹法(Western blot)实验观察下调ZDHHC9对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路(PI3K/Akt)和细胞外调节蛋白激酶信号通路(ras/raf/MEK/Erk)的影响。采用 t检验方法进行组间比较。 结果:TCGA数据库数据分析ZDHHC9在乳腺癌中高表达，且与不良预后相关。CCK-8实验表明下调ZDHHC9后乳腺癌细胞增殖被抑制(HCC1937-shNC比HCC1937-sh1：2.577±0.012比1.887±0.077， t＝ 15.319， P<0.01；MCF7-shNC比MCF7-sh1：0.905±0.016比0.398±0.053， t＝ 16.034， P<0.01；SKBR3-shNC比SKBR3-sh1：2.322±0.090比1.786±0.022， t＝ 10.067， P<0.01)；平板克隆形成实验提示敲低ZDHHC9后集落形成数量减少[HCC1937-shNC比HCC1937-sh1：(472.333±48.211)个比(362.667±43.108)个， t＝7.637， P<0.01；MCF7-shNC比MCF7-sh1：(176.667±37.448)个比(79.667±27.227)个， t＝3.639， P<0.01；SKBR3-shNC比SKBR3-sh1：(296.333±19.553)个比(210.667±11.676)个， t＝6.515， P<0.01]；划痕实验提示敲低ZDHHC9抑制乳腺癌细胞的迁移(HCC1937-shNC比HCC1937-sh1：0.536±0.046比0.235±0.010， t＝10.969， P<0.01；SKBR3-shNC比SKBR3-sh1：0.429±0.021比0.231±0.060， t＝5.381， P<0.01)；Transwell侵袭实验表明下调ZDHHC9后乳腺癌细胞侵袭能力下降[HCC1937-shNC比HCC1937-sh1：(211.333±11.930)个比(73.667±5.508)个， t＝18.146， P<0.01；SKBR3-shNC比SKBR3-sh1：(159.333±11.590)个比(45.333±7.024)个， t＝14.570， P<0.01]；流式细胞分析提示下调ZDHHC9导致细胞凋亡增加(HCC1937-shNC比HCC1937-sh1：0.121±0.007比0.157±0.004， t＝6.634， P<0.01；SKBR3-shNC比SKBR3-sh1：0.124±0.005 0.142±0.005， t＝6.218， P<0.01)；免疫印迹实验结果显示，敲低ZDHHC9抑制PI3K/Akt通路和ras/raf/MEK/Erk通路的激活被抑制[磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)相对表达量：MCF7-shNC比MCF7-sh1：0.931±0.005比0.707±0.002， t＝24.193， P<0.01；磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)相对表达量：MCF7-shNC比MCF7-sh1：1.418±0.010比1.206±0.053， t＝6.748， P<0.01]。 结论:敲低ZDHHC9抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，促进细胞凋亡。