目的:探讨胡椒碱对1，2-二甲基肼(DMH)/右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导实验性结肠癌肿瘤细胞生长和增殖的影响及其具体机制。方法:将36只小鼠分为对照组、模型组和胡椒碱组，每组12只。对照组给予生理盐水灌胃；模型组和胡椒碱组通过DMH/DSS复合法建立实验性结肠癌模型后分别给予生理盐水和胡椒碱3.6 mg/(kg·d)灌胃。观察肿瘤负荷和体积，HE染色法观察小鼠结肠的组织学变化，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAS/PI3K/AKT相关通路蛋白的表达。结果:模型组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著低于对照组(均 P<0.05)，Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著高于对照组(均 P<0.05)。胡椒碱组体重增加值及cleaved PARP、cleaved caspase-3表达水平均显著高于模型组(均 P<0.05)；Bcl-2、Bax、pan-RAS、p-MEK、p-ERK、PI3K、p-AKT、NF-κBp65、c-Myc、cyclin D1蛋白表达水平均显著低于模型组(均 P<0.05)。 结论:胡椒碱对DMH/DSS诱导的实验性结肠癌发生具有抑制作用，其抑制作用可能涉及到RAS/PI3K/AKT信号轴。

目的:探讨5-氨基乙酰丙酸(ALA)诱导卟啉代谢物[尿卟啉原(UP)Ⅰ和粪卟啉原(CP)Ⅲ]在大肠癌大鼠尿液中的积聚。方法:采用二甲基肼建立大鼠大肠癌模型。收集30只大肠癌大鼠(大肠癌组)和30只正常大鼠(正常组)的尿液。每只灌胃给药5-ALA(50 mg/kg)，2、4、6、8 h后留取尿液。用高效液相色谱法检测尿液中卟啉代谢产物UP Ⅰ和CP Ⅲ的含量，比较其含量在各组大鼠中的差异。结果:在口服5-ALA前，大肠癌组和正常组尿液中UP Ⅰ和CP Ⅲ的含量差异无统计学意义( P>0.05)，口服5-ALA后大肠癌组尿液中UP Ⅰ和CP Ⅲ的含量较正常组明显升高( P<0.05)，4 h测得大肠癌组尿液中UP Ⅰ和CP Ⅲ含量达最高值。根据4 h检测结果绘制ROC曲线，UP Ⅰ诊断大肠癌的阈值为50.43 μmol/g，灵敏度为96.7%，特异度为63.3%；CP Ⅲ诊断大肠癌的阈值为108.85 μmol/g，灵敏度为66.7%，特异度为86.7%。 结论:5-ALA诱导卟啉代谢物在大肠癌大鼠尿液中的积聚显著，尿液中卟啉代谢物可能为一种新的大肠癌肿瘤标志物，可为结直肠癌的诊断提供实验依据。

目的 基于TGF-β1/Smads通路及炎性因子探讨湿生扁蕾呫吨酮(GPX)联合益生菌干预结肠炎癌转化的机制.方法 将90只大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组[饮用右旋糖酐硫酸钠(DSS)3 d]和给药组.其中,模型组又分为炎症期组、炎癌前期组[注射二甲基肼(DMH)4周]、炎癌中期组(注射DMH 13周)、炎癌末期组(注射DMH 21周);给药组是在炎癌末期组的基础上边建模边给药且根据所给药物再分组,即饮用DSS 3 d,在饮用DSS的第1天就开始灌胃各组药物,每日1次,持续8周,分别为GPX 69.3 mg/kg(GPX组)、益生菌400 mg/kg(益生菌组)、GPX 69.3 mg/kg+益生菌400 mg/kg(联合组)、沙利度胺13.5 mg/kg(沙利度胺组).对各组疾病活动指数(DAI)、结肠长度和湿质量指数进行比较;观察大鼠结肠瘤体特征;HE染色观察结肠病理变化;Western blot和酶联免疫吸附试验分别检测转化生长因子(TGF)-β1,Smad4,Smad7和白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达.结果 与炎癌末期组比较,各给药组结肠长度增加,结肠壁厚、湿质量指数与瘤体最大直径降低,TGF-β1和Smad4蛋白表达水平升高,Smad7、IL-6、TNF-α水平降低,GPX组与联合组DAI得分降低(P＜0.05),GPX组、益生菌组和联合组的肠黏膜层结构和形态改善,结肠隐窝结构与杯状细胞数量增加;与益生菌组和GPX组比较,联合组结肠壁厚、结肠湿质量指数、瘤体数量降低,TGF-β1和Smad4蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平降低(P＜0.05).结论 GPX和益生菌联用可抑制结肠炎癌转化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路和抑制IL-6、TNF-α表达有关.

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抗体对二甲基肼诱导的大鼠大肠异常隐窝病灶(ACF)、癌瘤数目及大肠癌变过程中MIF表达的影响.方法 二甲基肼诱导建立大鼠大肠癌癌变模型,观察MIF抗体对ACF及癌瘤数量的抑制作用,并采用ELISA及免疫组化方法检测MIF抗体对早期癌变肠黏膜及癌瘤形成后MIF表达的影响.结果 MIF抗体干预后可明显抑制ACF及癌瘤的数量(P＜0.01).大鼠大肠癌模型中MIF的表达明显高于癌前病变ACF模型中MIF的表达(P＜0.01),应用MIF抗体可明显抑制大鼠ACF及大肠癌模型中MIF表达.结论 MIF抗体可明显抑制大鼠大肠黏膜癌变,可能与抑制ACF数量及MIF表达有关,MIF抗体有望成为大肠癌预防和治疗的新靶点.

测定了26个不同产地脱脂乳木果仁甲醇提取物的总酚含量(TPC)、抗氧化、细胞毒、EB病毒早期抗原(EBV-EA)抑制等活性,并评价了TPC与各生物活性间的相关性.采用紫外分光光度法测定TPC;采用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除法、2,2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法和铁离子还原法(FRAP)3种方法评价提取物抗氧化活性;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法评价提取物对人白血病细胞HL60,肺癌细胞A549和乳腺癌细胞SK-BR-3的细胞毒性;间接免疫酶法评价提取物对EBV-EA抑制活性.结果表明:不同产地乳木果仁总酚含量相差较大(25.8～265.7 mg/g,以没食子酸计);部分产地提取物或有较好的抗氧化活性[DPPH:IC 503.4～54.9μg/mL,ABTS:1.11～4.09 mmol/g(以Trolox计),FRAP:1.24～1.93 mmol/g(以Trolox计)]、较强的细胞毒性(对不同细胞)(IC 5025.1～95.5μg/mL)和EBV-EA抑制活性(100μg/mL:85.8％ ～94.9％),其中TPC只与抗氧化活性有显著的相关关系(r=0.750～0.837,P<0.01).

目的:通过观察沉默瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(transient receptor potential cation channel,subfamily V member 6,TRPV6)对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响和细胞内钙的浓度变化,以及1,25(OH)2D3、CaCl2及CuCl2在SD大鼠结肠肿瘤模型建立中的影响,探索TRPV6在结肠癌发生过程中的相关作用,为结肠癌的防治寻找新的靶点.方法:通过构建慢病毒颗粒感染结肠癌SW480细胞,采用免疫组织化学法、Western bolt、PCR技术检测TRPV6蛋白及mRNA的表达,MTT法、迁移及凋亡实验观察结肠癌SW480细胞增殖、迁移及凋亡变化,高速离子成像系统测定结肠癌SW480细胞内的Ca2+浓度变化.以二甲基肼(dimethyl hydrazine,DMH)建立SD大鼠结肠肿瘤模型,分为实验组(DMH组)和干预组[(DMH+1,25(OH)2D3组、DMH+CuCl2组)]、对照组,干预组分别予1,25(OH)2D3 (37.5 nmol/kg)、CuCl2(375μmol/kg)对模型进行干预.观察各组大鼠结肠腺瘤及腺癌的发生情况,Western blot检测各组结肠组织中TRPV6蛋白的表达情况.结果:TRPV6-RNAi转染结肠癌SW480细胞后,TRPV6 mRNA及蛋白表达减少,细胞Ca2+浓度水平降低,结肠癌SW480细胞的增殖率、迁移能力下降,细胞凋亡率增加,与空白对照组及阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05).对照组大鼠成瘤率为0,DMH+1,25(OH)2D3组为100%,DMH组为84.62%,DMH+CuCl2组为33.33%.各组大鼠大肠中均有TRPV6蛋白的表达,表达情况为DMH+1,25(OH)2D3组>DMH组>DMH+CuCl2组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:降低结肠癌SW480细胞Ca2+浓度水平可抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移能力,诱导细胞凋亡.1,25(OH)2D3可以增加实验鼠结肠组织TRPV6蛋白表达,促进结肠肿瘤的形成.CuCl2可以使实验鼠结肠组织中的TRPV6蛋白表达降低,并抑制结肠肿瘤的形成.

目的 探讨影响恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 kDa Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25)偶联的因素,优化Pfs25蛋白的偶联反应条件,制备具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.方法 通过对偶联反应时Pfs25蛋白浓度、偶联反应的酸碱度、不同的缓冲液及偶联试剂添加方式的探索,考察不同反应条件对Pfs25蛋白偶联的影响.凝胶过滤层析纯化Pfs25偶联反应产物,双抗体夹心ELISA和SDS-PAGE对凝胶柱洗脱液进行检测,Western blot检测纯化的Pfs25聚体蛋白.结果 Pfs25蛋白偶联反应选择1/15 mol/L Na2 HPO4-KH2 PO4为偶联缓冲液,反应体系在pH 5.6～6.0时偶联效果更好,而Pfs25蛋白反应质量浓度为25 mg/mL时可获得最佳的Pfs25偶联效率(68.67％),凝胶过滤层析法获得Pfs25聚体蛋白,经双抗体夹心ELISA和Western blot检测,形成的Pfs25聚体蛋白保持了与Pfs25蛋白相同的抗体结合能力.结论 优化了Pfs25蛋白最佳偶联反应条件,获得具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白.在形成Pfs25聚体中,以二聚体(Pfs25)2为主要形式,兼有少量三聚体(Pfs25)3和四聚体(Pfs25)4.

目的:构建大肠癌的动物模型,观察高脂饮食干预对结肠肿瘤发生情况的影响,对高脂饮食干预下肠道菌群结构的改变及其与大肠癌发生的关系进行初步探讨.方法:4周龄的雄性Wiser大鼠140只随机分为4组:普通饮食+EDTA对照的非诱导肿瘤组(SDC)、普通饮食+DMH的诱导肿瘤组(SDT)、高脂饮食+EDTA对照的非诱导肿瘤组(HFDC)、高脂饮食+DMH的诱导肿瘤组(HFDT).根据组别的不同分别给予1 3.5％脂肪含量的普通饮食和45％脂肪含量的高脂饮食,诱导肿瘤组大鼠每周腹腔注射1,2-二甲基肼(DMH),剂量为40 mg/kg,连续注射10周,对照组大鼠每周腹腔注射同等剂量的ED-TA+生理盐水.实验结束后将收集的肿瘤组织标本利用QIAamp DNA Mini试剂盒进行基因组DNA抽提,后续基因组DNA鉴定、PCR扩增、荧光定量、16S rRNA V3可变区测序和生物信息学分析;比较高脂饮食与普通饮食干预下组织中菌群结构的差异及其与肿瘤发生情况的关系.结果:饮食干预后的焦磷酸测序结果显示高脂能够导致肠道菌群结构失衡,增加大肠癌的发病风险;经LEfSe分析发现梭状杆菌属Fusobacterium可被归为组间最主要的差异性菌属.结论:高脂饮食能够改变肠道菌群结构,增加多种潜在性致病菌丰度,特别是梭状杆菌属,结合高脂状态下肿瘤的发生情况,提示该菌属在大肠癌的发生发展中起重要的作用.

目的 探讨合生元在1,2-二甲基肼(DMH)致大鼠结肠损伤过程中对结肠病理的影响,并从抗氧化作用探讨其机制.方法 选取30只SD大鼠,按照随机区组的方法分为对照组、DMH组和合生元干预组,每组10只.除对照组外,另外两组以0.4％的DMH溶液进行颈部皮下注射,同时合生元干预组给予5×108 CFU/kg的合生元灌胃;实验第14天,处死所有大鼠,结肠切片用HE染色观察病理改变;按照试剂盒的方法测定血浆内毒素含量、结肠匀浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性、总抗氧化能力(T-AOC)等指标.结果 DMH组和合生元干预组大鼠体质量增长缓慢,在实验第7天和第14天均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);实验第14天,DMH组和合生元干预组大鼠结肠见慢性炎症细胞浸润,结肠湿重分别为(63.21±4.392)g和(64.75±2.83)g,均低于对照组的(70.16±3.51)g,差异均具有统计学意义(P<0.05);合生元干预组大鼠血浆内毒素含量为(40.32±6.33)EU/L,低于DMH组的(52.55±4.62)EU/L,但两组均高于对照组的(30.02±3.08)EU/L,差异均具有统计学意义(P<0.05);检测结肠匀浆MDA、SOD、T-AOC、MPO,结果显示,对照组分别为(1.595±0.13)nmol/mg prot、(31.41±3.86)U/mg prot、(0.545±0.13)U/mg prot、(0.629±0.11)U/mg prot,DMH组分别为(2.024±0.21)nmol/mg prot、(31.51±4.89)U/mg prot、(0.785±0.09)U/mg prot、(0.806±0.12)U/mg prot,合生元干预组分别为(1.987±0.17)nmol/mg prot、(33.28±3.73)U/mg prot、(0.713±0.11)U/mg prot、(0.733±0.10)U/mg prot,其中给予DMH的两组大鼠的MDA、T-AOC均高于对照组,DMH组大鼠的MPO高于对照组和合生元干预组,差异均有统计学意义(P<0.05);但三组大鼠的结肠匀浆SOD含量比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 合生元能够减弱DMH对大鼠结肠的损伤,具有抗脂质过氧化的作用,在DMH诱导的结肠损伤过程中起到一定的保护作用.

采用水蒸气蒸馏法提取紫丁香花蕾精油,用3种不同的抗氧化体系检测了精油的抗氧化活性.测定不同质量浓度的紫丁香花精油溶液对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基的清除效果,并测定了其总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC).结果显示,精油具有较好的DPPH自由基、羟自由基的清除作用,并且与精油浓度呈现出量效关系.精油的T-AOC是19.86±1.74 U/mg,高于化学抗氧化剂2,6-二叔丁基对甲酚(3,5-Di-tert-butyl-4-hydroxytoluene,BHT)(0.38±0.08 U/mg).精油的抗肿瘤活性检测采用胃癌细胞株MGC80-3和HGC-27,3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT)法测定紫丁香花精油对癌细胞的抑制作用.TUNEL法检测精油对胃癌细胞凋亡的影响.MTT法检测结果证明紫丁香花精油可显著抑制两种胃癌细胞生长,其抑制作用与精油浓度呈正相关,MGC80-3和HGC-27细胞经精油处理48 h后的IC50值分别为0.282 mg/mL和0.263 mg/mL.利用TUNEL法检测细胞凋亡情况,结果显示,凋亡细胞数量随精油浓度的提高而显著增多,并且HGC-27细胞对紫丁香花精油更敏感.研究结果表明,紫丁香花精油具有良好的体外抗氧化和抗肿瘤活性,具备进一步药用研究和开发的价值.