目的:观察大黄灵仙方对肝内胆管细胞炎症模型大鼠MAPK/NF-κB信号通路中IKKα、ASK1、MKK3以及CX3CL1关键因子的表达水平的影响,探讨其缓解肝内胆管细胞炎症的改善作用及可能机制.方法:45只SD大鼠按照完全随机方法分为9组,每组大鼠5只,空白组、模型组、大黄灵仙颗粒组、NF-κB组、p38MAPK组、NF-κB+p38MAPK组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组.除空白组外,余下各组大鼠均在胆总管注射5 mg/kg LPS制备肝内胆管炎症模型.第7天灌胃结束后取大鼠胆管树,采用HE染色观察其炎性程度,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测IKKα、ASK1、MKK3以及CX3CL1蛋白及mRNA表达量.结果:HE病理结果显示,模型组的肝内胆管组织和细胞炎症明显,加入大黄灵仙颗粒和信号阻断剂后肝内胆管炎症状态较前改善,总病理评分差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,大黄灵仙颗粒组、p38MAPK组、NF-κB组、NF-κB+p38MAPK组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的ASK1、CX3CL1蛋白及mRNA表达量下降,MKK3 mRNA表达量上升以及p38MAPK组IKKα和NF-κB+大黄灵仙颗粒组MKK3 蛋白表达量上升(P＜0.05).与大黄灵仙颗粒组比较,p38MAPK组、NF-κB组、NF-κB+p38MAPK组、p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的 ASK1、CX3CL1 mRNA表达量下降,p38MAPK+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+大黄灵仙颗粒组、NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的MKK3 mRNA表达量上升(P＜0.05).与大黄灵仙颗粒组相比,p38MAPK组的IKKα蛋白表达量下降,NF-κB+大黄灵仙颗粒组的ASK1、MKK3蛋白表达量上升(P＜0.05),而NF-κB+p38MAPK+大黄灵仙颗粒组的CX3CL1 蛋白表达量下降(P＞0.05).结论:大黄灵仙方可缓解LPS诱导的大鼠肝内胆管炎症反应,促进胆管细胞的修复,从而达到降低PIS发生及术后复发的目的,其作用机制可能与抑制NF-κB/MAPK信号通路中的IKKα、ASK1、MKK3以及CX3CL1关键炎症因子的活化有关.

Seed dormancy is nature's strategic pause in the plant life cycle,a purposeful interlude during which a seed,poised on the cusp of potential growth,bides its time in a state of quiescence.This period of dormancy is a crucial adaptation,allowing the seed to withstand unfavorable environmental conditions and syn-chronize germination with optimal circumstances for growth and survival(Née et al.,2017).Dormancy is orchestrated by a complex interplay of genetic,physiological,and environmental factors,including phytohormones like abscisic acid and gibberellins(GAs),as well as specific regulators like DELAY OF GERMINATION1 and others(Née et al.,2017;Liu et al.,2020).

Seeds establish dormancy to delay germination until the arrival of a favorable growing season.In this study,we identify a fate switch comprised of the MKK3-MPK7 kinase cascade and the ethylene response factor ERF4 that is responsible for the seed state transition from dormancy to germination.We show that dormancy-breaking factors activate the MKK3-MPK7 module,which affects the expression of some α-EX-PANSIN(EXPA)genes to control seed dormancy.Furthermore,we identify a direct downstream substrate of this module,ERF4,which suppresses the expression of these EXPAs by directly binding to the GCC boxes in their exon regions.The activated MKK3-MPK7 module phosphorylates ERF4,leading to its rapid degradation and thereby releasing its inhibitory effect on the expression of these EXPAs.Collectively,our work identifies a signaling chain consisting of protein phosphorylation,degradation,and gene transcrip-tion,by which the germination promoters within the embryo sense and are activated by germination signals from ambient conditions.

目的 探讨KCNQ1OT1基因敲除联合鸦胆子素D对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制.方法 CCK8、划痕和Transwell侵袭实验分别检测鸦胆子素D和siKCNQ1OT1对MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR检测鸦胆子素D、siKCNQ1OT1对MDA-MB-231细胞中KCNQ1OT1表达的影响;Western blot法检测EMT相关蛋白及CDC42、p-MKK7、MKK7蛋白的表达情况.结果 鸦胆子素D和siKCNQ1OT1处理的MDA-MB-231 细胞活力、迁移和侵袭能力受到显著抑制,且二者联用时抑制作用更强( 均P < 0 . 0 5 ) ; 鸦胆子素D 处理后KCNQ1OT1在MDA-MB-231细胞中的表达下调(均P<0.05);鸦胆子素D联合siKCNQ1OT1处理组MDAMB-231细胞中CDC42、p-MKK7、N-cadherin和Vimentin的表达显著下调,E-cadherin的表达上调(均P<0.05).结论 鸦胆子素D联合siKCNQ1OT1抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,其分子机制可能与CDC42/MKK7信号通路的阻断有关.

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)通过调控MKK7/JNK通路改善阿尔茨海默病大鼠神经元损伤中的作用机制.方法:采用24月龄的雄性老年大鼠42只,随机分为正常组,假手术组,模型组,阳性药组(0.15 mg/kg石杉碱甲),以及TSG低剂量组(0.033 g/kg)、TSG中剂量组(0.1 g/kg)、TSG高剂量组(0.3 g/kg),每组6只.模型组、TSG各剂量组采用立体定位Aβ25-35溶液构建老年痴呆模型,于造模28 d后经被动回避实验筛选造模成功的大鼠.筛选后阳性药物组、TSG各剂量组按照对应剂量灌胃给药,给药28 d后进行实验.采HE染色镜下观察每组大鼠大脑内海马区神经元细胞形态学变化;IHC 检测各组大鼠脑组织 MKK7、JNK蛋白的表达情况;qRT-PCR检测各大鼠脑组织内MKK7、JNK mRNA的表达情况.结果:(1)HE染色观察,与正常组,假手术组相比,模型组神经细胞数量减少且排列紊乱无规则,细胞膜发生皱缩,细胞核溶解变形.与模型组比较,阳性药组以及TSG各组神经细胞数量增多且排列相对整齐.(2)TUNEL染色阳性细胞比值结果:与正常组、假手术组相比,模型组凋亡细胞数量明显上调;与模型组相比,阳性药物组、TSG各组染色凋亡细胞减少(P<0.05).(3)免疫组化测定结果表明:与正常组和假手术组相比,模型中MKK7、JNK在大鼠脑中的蛋白表达含量显著增加(P<0.05);与模型组比较,阳性药及TSG各剂量组蛋白表达量均有不同程度降低(P<0.05).(4)qRT-PCR结果显示,与正常组、假手术组相比,模型组大鼠脑组织中MKK7、JNK mRNA水平明显上升(P<0.05);与模型组相比,各组给药大鼠脑组织中MKK7、JNK mRNA的表达含量均明显下调(P<0.05).结论:二苯乙烯苷对神经元的损伤修复有一定的作用效果,其作用机制可能与下调MKK7、JNK激酶的mRNA转录及蛋白的表达有关.

目的 观察甘草酸对缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及甘草酸低、中、高剂量组5组,各10只.后四组制备缺血/再灌注大鼠模型,假手术组只穿线不结扎左冠状动脉降支,甘草酸低、中、高剂量组在缺血前半小时分别于股静脉注射30、60、90 mg/kg的甘草酸,假手术组与模型组注射同体积生理盐水.取各组心肌组织,采用TUNEL染色法测算心肌细胞凋亡率,Westernblotting法检测MKK/JNK信号通路蛋白[丝分裂原活化蛋白激酶4/7(MKK4/7)、c-Jun氨基末端激酶1/2/3(JNK1/2/3)、磷酸化MKK4/7(p-MKK4/7)、磷酸化JNK1/2/3(p-JNK1/2/3)]及凋亡相关蛋白[天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)8、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3]的表达,同时观察心肌组织病理改变情况.结果 与假手术组相比,模型组细胞凋亡率高,p-MKK4/7、p-JNK1/2/3、Caspase-8、Bax、Caspase-3表达高而Bcl-2表达低(P均＜0.05).与模型组相比,甘草酸中剂量组及甘草酸高剂量组细胞凋亡率低,p-MKK4/7、pqNK1/2/3、Caspase-8、Bax、Caspase-3表达低而Bcl-2表达高(P均＜0.05).模型组较假手术组大鼠心肌组织中出现较多变性坏死心肌细胞,有较多炎性细胞浸润;甘草酸低、中、高剂量组较模型组心肌细胞水肿程度轻且炎性细胞少.结论 甘草酸可减少缺血/再灌注大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织损伤;其机制可能为抑制MKK/JNK信号通路中MKK4/7和JNK1/2/3磷酸化,降低Caspase-8、Bax、Caspase-3表达,升高Bcl-2表达.

目的 探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)及c-Jun氨基末端蛋白激酶1(JNK1)在2型糖尿病合并肝细胞癌(简称肝癌)患者癌组织中的表达及意义.方法 选择2型糖尿病合并肝癌患者18例(DMHC组)、单纯肝癌患者30例(HCC组),取两组手术切除的癌组织及相应的癌旁正常组织,采用Western blotting法检测其RAGE、MKK7及JNK1表达;分析两组癌组织RAGE、MKK7、JNK1表达与患者临床病理参数的关系,以及三者的相互关系.结果 DMHC组和HCC组癌组织RAGE、MKK7、JNK1的相对表达量均高于相应的癌旁正常组织(P均＜0.05),且DMHC组癌组织MKK7、JNK1的相对表达量均高于HCC组癌组织(P均＜0.05).HCC组低分化者RAGE、MKK7、JNK1的相对表达量均高于高分化者,DMHC组低分化者MKK7、JNK1的相对表达量均高于高分化者(P均＜0.05).DMHC组和HCC组癌组织RAGE、MKK7、JNK1表达均呈正相关(P均＜0.05).结论 RAGE表达升高可能参与肝癌的发生、发展;2型糖尿病患者MKK7、JNK1表达升高可能促进肝癌的发生、发展;MKK7和JNK1可能在一定水平上受RAGE的调控.

细胞凋亡受阻在肿瘤的发生、发展中起着重要作用. 细胞凋亡信号调节激酶 1(ASK1)是高度保守的 MAP3Ks 家族成员之一,ASK1被激活后能够将MKK3/MKK6-p38和MKK4/MKK7-JNK两大激酶通路激活,最终诱导细胞发生凋亡[1].研究发现很多调控因子与Ask1直接结合调控其活性,Ask1去磷酸化则活化,从而导致细胞凋亡发生[2,3]. 有文献报道肿瘤细胞在接受某些外来刺激后(比如细胞毒性化疗药物顺铂), AKT2可以通过磷酸化细胞凋亡激活激酶(ASK1)来促进细胞凋亡[4,5]. 也就是凋亡通路ASK1被激活后能抑制癌细胞活性和诱导癌细胞凋亡,在增强癌细胞对顺铂(DDP)和紫杉醇(TXL)的敏感性中发挥重要作用. ASK1过表达后,是否能促进癌细胞凋亡,以及是否能提高肿瘤西部对化疗的敏感性依然有待研究. 本研究利用脂质体瞬时转染Ask1基因过表达研究Ask1基因在卵巢上皮性癌中的作用,以及Ask1基因过表达对细胞凋亡和增殖的影响,并通过细胞实验和动物实验研究过表达Ask1基因对紫杉醇和顺铂化疗敏感性的影响.

以BIU-87细胞为模型,探讨槲皮黄酮对膀胱癌细胞的抑制作用机制.体外培养人膀胱癌细胞株BIU-87,将不同浓度槲皮黄酮加入处于对数生长期的BIU-87细胞中共培养,采用CCK-8法检测槲皮黄酮对BIU-87细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测分析槲皮黄酮诱导BIU-87细胞的凋亡作用和细胞周期;Western blot技术检测分析了细胞中抗凋亡蛋白Bal-2,Bal-xL的表达量及TAKl/JNK信号通路中蛋白的表达水平.CCK-8实验发现,不同浓度槲皮黄酮处理BIU-87细胞24 h或48h后,药物对BIU-87细胞增殖抑制作用均明显高于对照组(P＜0.05);流式细胞术结果显示,不同浓度槲皮黄酮对BIU-87细胞的凋亡率均显著高于对照组,呈剂量时间依赖性,细胞周期G0/G1期细胞逐渐减少,G2/M期细胞逐渐增多,S期细胞变化不明显;Western blot检测发现槲皮黄酮处理的BIU-87细胞中Bal-2,Bal-xL蛋白表达水平降低,并且p-TAK1,p-MKK4/7,p-JNK表达水平也降低.槲皮黄酮可抑制BIU-87细胞增殖,促进BIU-87细胞凋亡,其机制可能与抑制TAK1/JNK信号通路进一步降低了Bal-2,Bal-xL的表达有关.

目的 探讨桂枝提取物治疗流感病毒性肺炎大鼠的实验效果及其作用机制.方法 选取4～6周龄的Wistar大鼠90只,随机分为空白组(等量生理盐水)、模型组(等量生理盐水)、病毒唑组(病毒唑70 mg/kg,0.2 mL/d灌胃)、实验组A(桂枝提取物2 mL/kg,1次/d)、实验组B各18只(桂枝提取物4 mL/kg,1次/d),采用A/FM1/47(H1N1)甲型流感病毒建立病毒肺炎大鼠模型,自建模当日给予对应的干预措施;检测并对比各组造模后第1天、第3天、第7天的血清炎症因子,对比各组大鼠第7天的肺指数、肺组织中P38、JNK及MKK4蛋白的表达水平.结果 造模后第7天,模型组大鼠的肺指数显著的高于空白组(P＜0.05);病毒唑组和实验组A、B的肺指数显著的低于模型组(P＜0.05);造模后第1、3、7天,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的水平显著的高于空白组(P＜0.05);造模后第1、3、7天病毒唑组和实验组A、B的血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的水平显著的低于模型组(P＜0.05);造模后第7天,模型组大鼠肺组织中P38、JNK及MKK4蛋白表达水平显著的高于空白组(P＜0.05);造模后第1、3、7天病毒唑组和实验组A、B的肺组织中P38、JNK及MKK4蛋白表达水平显著的低于模型组(P＜0.05).结论 桂枝提取物治疗流感病毒性肺炎大鼠能减轻炎症反应、降低肺组织中P38、JNK及MKK4蛋白表达水平,达到治疗流感性肺炎的目的.