目的 建立一种快速、准确、灵敏的多重PCR检测方法,用于同时鉴别6种常见食用肉类(牛、羊、鸡、猪、鹅、鸭),并评估其在肉类食品掺假鉴定中的应用价值.方法 基于GenBank数据库中6个物种的线粒体全基因组序列,筛选具有种内保守性、种间特异性的DNA序列(牛16S rRNA、羊COX-1、鸡Cytb、猪COX-1、鹅NADH2、鸭16S rRNA),并设计物种特异性引物,以此构建一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系.对该体系进行种属特异性、灵敏度和重复性研究,并进行模拟混合样品检测.结果 成功构建了一个可同时鉴别6种常见食用肉类的多重PCR检测体系,该体系在非目标物种的DNA中均未有效扩增;在DNA模板量为0.0625～2 ng/μL时,6个物种的扩增产物均能检见.在鸭肉和牛肉混合比例低至0.5%时,仍能检测到鸭肉成分.结论 本研究构建了一个特异性强、灵敏度高、重复性好的多重PCR检测体系,可准确鉴别6种常见食用肉类食品中的动物源性成分,为我国常见食用肉类及肉制品的掺假鉴定提供了一种简单、实用的检测技术.

目的:探索长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）LINC01133对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSC）成牙骨质分化潜能的影响及其作用机制。方法:收集2021年9月至2022年1月第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科17~30岁10例就诊患者因正畸需要或因阻生拔除的牙齿共12颗，从离体牙上提取hPDLSC，分别转染靶向LINC01133小干扰RNA（small interfering RNA-LINC01133，si-LINC01133）或阴性对照小干扰RNA（small interfering RNA-negative control，si-NC），以转染si-LINC01133为实验组，转染si-NC为阴性对照组。利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）检测si-LINC01133的沉默效率；通过蛋白质印迹法检测hPDLSC成牙骨质分化相关蛋白包括骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP）、牙骨质附着蛋白（cementum attachment protein，CAP）、牙骨质蛋白1（cementum protein-1，CEMP-1）的表达；利用流式细胞术和线粒体超氧化物指示剂MitoSOX检测细胞线粒体活性氧产量；通过JC-1荧光染色法检测线粒体膜电位水平；利用蛋白质印迹法检测线粒体呼吸链复合体蛋白包括NADH脱氢酶［泛醌］1β亚单位8（NADH dehydrogenase［ubiquinone］1 beta subcomplex subunit 8，NDUFB8）、琥珀酸脱氢酶亚单位A（succinate dehydrogenase complex flavoprotein subunit A，SDHA）、泛醌-细胞色素c还原酶核心蛋白1（ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1，UQCR1）、细胞色素c氧化酶亚单位4亚型1（cytochrome c oxidase subunit 4 isoform 1，COXⅣ）、ATP合成酶F1亚单位α（ATP synthase F1 subunit alpha，ATP5A）的表达水平。结果:hPDLSC的LINC01133表达水平被si-LINC01133有效沉默（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.385±0.128）（ t=10.72， P<0.01），沉默效率超过60%。LINC01133沉默后，hPDLSC BSP表达水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.664±0.179）（ t=4.62， P<0.01）；CAP表达水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.736±0.229）（ t=2.83， P<0.05）。LINC01133沉默后，hPDLSC线粒体活性氧产量显著上升（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：1.458±0.185） （t=4.96， P<0.05）；线粒体膜电位水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.209±0.029）（ t=53.99， P<0.01）；NDUFB8表达水平显著上升（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：1.683±0.397）（ t=3.45， P<0.05）；SDHA表达水平显著下降（阴性对照组：1.000±0.000，实验组：0.428±0.228）（ t=5.02， P<0.05）。实验组UQCR1、COXⅣ和ATP5A的表达水平与阴性对照组相比差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:LINC01133可能通过调控hPDLSC线粒体功能，进而影响hPDLSC成牙骨质分化潜能。

目的:研究重症肺炎患儿NADH脱氢酶1(ND1)、NADH脱氢酶3(ND3)和味觉受体2家族成员43(TAS2R43)基因表达情况及与儿童重症肺炎的关系。方法:选取2016年5月至2018年5月驻马店市中心医院儿童重症监护病房住院的儿童重症肺炎患儿30例为重症肺炎组，选取同期在本院体检健康的儿童25例为健康对照组。重症肺炎组男17例，女13例，年龄(5.30±1.69)岁；健康对照组男13例，女12例，年龄(4.96±1.31)岁。使用real-time PCR方法检测 ND1、 ND3和 TAS2R43基因表达量，2 －ΔΔCt法计算 ND1、 ND3和 TAS2R43基因相对表达量。 结果:重症肺炎组 ND1、 ND3及 TAS2R43 mRNA的循环阈(Ct)值分别为20.49±0.45、21.32±0.61和32.20±0.46，健康对照组分别为26.69±0.62、27.50±0.35和26.69±0.49，2组比较差异均有统计学意义( t＝－14.02、－15.25、－14.19，均 P<0.05)。2 －ΔΔCt法计算重症肺炎组 ND1、ND3和 TAS2R43基因相对表达量是健康对照组的51.27、50.56和0.02倍。 结论:ND1、 ND3和 TAS2R43基因在重症肺炎患儿体内有异常表达，这3个基因可能与儿童重症肺炎关系密切。

目的:探讨核因子-E2相关因子2（Nrf2）信号通路在亚砷酸钠（NaAsO 2）致人正常肝细胞（L-02细胞）氧化损伤过程中的作用，为砷致肝损伤的氧化损伤作用机制研究提供实验依据。 方法:体外培养L-02细胞，分别以0（对照）、25、50、75、100、125、150 μmol/L NaAsO 2处理细胞24 h，采用CCK8法检测细胞存活率；根据细胞存活率计算半抑制浓度（IC 50），分别以IC 50的0、1/8、1/4、1/2倍剂量NaAsO 2处理L-02细胞进行分组实验。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测L-02细胞中和细胞核内Nrf2信号通路相关因子Nrf2、血红素氧化酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、谷胱甘肽过氧化物酶1（GPx1）的蛋白表达情况。 结果:CCK8实验结果显示，25、50、75、100、125、150 μmol/L NaAsO 2组的L-02细胞存活率[（69.53 ± 0.06）%、（41.33 ± 0.08）%、（23.65 ± 0.04）%、（26.51 ± 0.04）%、（31.63 ± 0.01）%、（26.24 ± 0.02）%]明显低于对照组[（100.00 ± 0.00）%， P均< 0.05]；细胞存活率的IC 50为40 μmol/L，分组实验的NaAsO 2剂量分别采用0（对照）、5、10、20 μmol/L。Western blot检测结果显示，与对照组比较，5、10、20 μmol/L NaAsO 2组L-02细胞中Nrf2、HO-1及L-02细胞核内HO-1蛋白水平显著升高（ P均< 0.05）；10、20 μmol/L NaAsO 2组L-02细胞中GPx1蛋白水平显著降低（ P均< 0.05），L-02细胞核内Nrf2蛋白水平显著升高（ P均< 0.05）；5 μmol/L NaAsO 2组L-02细胞核内NQO1蛋白水平显著升高（ P < 0.05）。 结论:NaAsO 2对L-02细胞中Nrf2信号通路相关因子的表达有影响，其致L-02细胞氧化损伤的作用机制可能与Nrf2信号通路有关。

目的:观察氟他胺(FLU)对人前列腺癌细胞LNCaP细胞株线粒体呼吸链酶学变化的影响，探讨FLU引起LNCaP细胞株线粒体呼吸链酶学变化的作用机制。方法:获得雄激素依赖性细胞(LNCaP)细胞株，进行细胞培养，获得稳定生长及传代的细胞株。不同浓度的雄激素受体阻滞剂FLU作用于培养的LNCaP细胞株；不同时间点提取干预措施下的LNCaP细胞株线粒体；检测并比较不同时间点、不同浓度药物作用下LNCaP细胞株线粒体呼吸链酶学的变化和差异。结果:FLU作用于LNCaP细胞株后，形态学活力逐渐减弱，提取三种剂量组FLU作用于LNCaP细胞株后，在不同时间点提取线粒体，实测数据及统计线图均显示：其蛋白的含量增加显著( P<0.05)，但琥珀酸脱氢酶(SDH)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、细胞色素C氧化酶(COX)的含量显著下降( P<0.05)，各个指标在不同的时间点上下降的程度有所差异。 结论:FLU可引起LNCaP细胞株线粒体内蛋白的表达量下降，抑制LNCaP的增殖。

目的:探讨急性创伤性颅脑损伤(TBI)后突触形成相关蛋白突触关联蛋白(Snap)25、神经突触素(Synapsin)1和线粒体功能异常相关蛋白单胺氧化酶B(Maob)、NADH脱氢酶(辅酶Q)Fe-S蛋白(Ndufs)2在大鼠海马组织中的表达及其意义。方法:采用大鼠可控性皮质打击伤(CCI)建立中度TBI模型，CCI后48 h(CCI组， n＝13)为急性期观察点；假手术组( n＝13)与CCI组处理步骤一致，仅不打击皮质。采用超高效液相色谱和同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)蛋白质质谱分析CCI组( n＝5)与假手术组( n＝5)海马组织之间的差异蛋白。采用生物信息学方法分析差异蛋白的细胞组分、生物进程和分子功能，并进行经典通路富集分析及疾病功能富集分析。采用透射电子显微镜观察两组海马组织神经元核和线粒体的超微结构变化。采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测Snap25、Synapsin1、Maob以及Ndufs2蛋白的表达。 结果:蛋白质质谱数据结果显示，与假手术组相比，CCI组上调的差异蛋白共55种(差异倍数≥1.50)，下调的差异蛋白共110种(差异倍数≤0.65)。生物信息学分析结果显示，富集的经典通路包括突触形成信号通路[－ log10( P值)＝7.29]和线粒体功能障碍信号通路[－ log10( P值)＝4.06]等；突触形成信号通路中富集了Snap25和Synapsin1等蛋白；线粒体功能障碍信号通路中富集了Maob和Ndufs2等蛋白。透射电子显微镜观察发现，CCI组出现神经元核固缩、线粒体嵴断裂。WB检测结果显示，与假手术组( n＝5)比较，CCI组( n＝5)Snap25(分别为0.594±0.025、1.000±0.141， t＝4.92)、Synapsin1(分别为0.597±0.077、1.000±0.100， t＝5.56)、Maob(分别为0.528±0.042、1.000±0.160， t＝4.94)以及Ndufs2(分别为0.549±0.057、1.000±0.131， t＝5.45)蛋白的相对表达量均下降，差异均具有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:突触形成相关蛋白Snap25、Synapsin1和线粒体功能异常相关蛋白Maob、Ndufs2在急性TBI大鼠海马组织中的表达下降，可能参与TBI的发病机制。

目的:观察来源于Leber遗传性视神经病变（LHON）患者永生化皮肤成纤维细胞的线粒体功能，初步探讨其作为细胞模型研究的可行性。方法:基础研究。通过河南省立眼科医院遗传门诊眼科招募LHON患者2例和健康志愿者2名。获取受试者皮肤组织，通过感染SV40病毒构建4株永生化皮肤成纤维细胞，分别为2例LHON患者细胞（LHON-1、LHON-2细胞）和2名健康志愿者细胞（NC-1、NC-2细胞）。采用透射电子显微镜观察LHON、NC细胞线粒体形态；检测细胞中活性氧（ROS）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态（NAD +）和还原态（NADH）、三磷酸腺苷（ATP）水平；seahorse线粒体压力检测法测定细胞耗氧量；细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力。LHON和NC细胞中ROS、NAD +、NADH和ATP水平，以及基础耗氧量、最大耗氧量、ATP相关耗氧量、细胞存活率之间的比较行单因素方差分析。行单因素方差分析。 结果:与NC-1、NC-2细胞比较，LHON-1、LHON-2细胞线粒体嵴数量明显减少；ROS水平升高，NAD +/NADH和ATP水平下降，且细胞耗氧量明显抑制。CCK-8检测结果显示，应激条件下LHON-1、LHON-2细胞存活能力更差。 结论:LHON患者来源的永生化皮肤成纤维细胞系存在线粒体功能和能量代谢障碍。

目的:观察Leber遗传性视神经病变（LHON）患者基因治疗前后视力和视觉诱发电位（VEP）的变化。方法:回顾性队列研究。2017年12月至2018年10月在华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科确诊并接受基因治疗的m11778G.A/MT-ND4突变LHON患者35例70只眼纳入研究。其中，男性30例（87.71% ），女性5例（12.29% ）；平均年龄（22.31±6.72）岁。基因治疗方式为单眼玻璃体腔注射重组腺相关病毒（rAAV2）-ND4，选择视力较差眼为注射眼；若双眼视力相同，则以右眼为注射眼，并据此分为注射眼组和未注射眼组，均为35只眼。注射眼组和未注射眼组在治疗前（基线）及治疗后1、3、6个月行最佳矫正视力（BCVA）和图形VEP （PVEP）检查。对比观察注射眼组、未注射眼组基线与治疗后1、3、6个月BCVA和P100波潜伏期（VEP IT）、N75波至P100波之间振幅（VEP A）的变化。两组比较行独立样本 t检验、配对样本 t检验或两独立样本的非参数检验。 结果:与基线时比较，治疗后1、3、6个月，注射眼组（ t=3.530、4.962、5.281， P=0.001、0.000、0.000）、未注射眼组（ t=3.288、2.620、2.252 ， P=0.002、0.013、0.031）BCVA提高，差异均有统计学意义；VEP IT （ t注射眼组=-0.158、1.046、-1.134， P注射眼组＝0.875、0.303、0.190； t未注射眼组＝0.773、-0.607、-0.944， P未注射眼组=0.445、0.548、0.352）、VEP A （ Z注射眼组=-0.504、-0.934、-1.065， P注射眼组=0.614、0.351、0.287； Z未注射眼组=-0.521、-0.115、-0.491， P未注射眼组=0.602、0.909、0.623）差异均无统计学意义。 结论:基因治疗后，LHON患者注射眼和未注射眼视力均提高；PVEP无明显变化，较基线保持稳定。

目的:探讨丹酚酸C（SalC）对RA成纤维样滑膜细胞（FLSs）的作用，及转录因子-E2相关因子（Nrf2）信号通路在其中所扮演的角色。方法:用丹酚酸C 0.1、1、5、10、20 μmol/L分别处理RA-FLSs 24~72 h，之后用CCK8检测细胞活性。根据半抑制浓度（IC 50）值，选取实验所需的时间和剂量处理RA-FLSs。用伤口划痕实验和Transwell小室技术检测细胞迁移及侵袭能力。ELISA检测TNF-α，IL-1β及IL-6水平，蛋白质印迹实验检测MMP-9和MMP-13的表达及细胞凋亡相关蛋白及Nrf2及介导的相关基因的表达。用ML385干扰Nrf2，实验分成3组RA-FLSs、RA-FLSs+丹酚酸C（10 μmol/L）、RA-FLSs+丹酚酸C（10 μmol/L）+ ML385（2 μmol/L），测量迁移及侵袭能力，并检测凋亡、炎性及Nrf2信号通路相关蛋白的表达。统计学分析采用方差分析，两两比较采用Turkey检验。 结果:与对照组相比，丹酚酸C处理后RA-FLS的细胞迁移水平（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.75±0.05；丹酚酸C 5 μmol/L，0.50±0.05；丹酚酸C 10 μmol/L，0.26±0.05）显著性减少（ t=7.65， P<0.001； t=14.25， P<0.001； t=20.67， P<0.001）和侵袭能力（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.75±0.11；丹酚酸C 5 μmol/L，0.49±0.06；丹酚酸C 10 μmol/L，0.26±0.07）显著性降低（ t=4.93， P<0.001； t=10.32， P<0.001； t=14.96， P<0.001），MMP-9（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.72±0.10；丹酚酸C 5 μmol/L，0.48±0.08；丹酚酸C 10 μmol/L，0.27±0.06）水平显著性降低（ t=5.60， P<0.001； t=11.03， P<0.001； t=5.94， P<0.001）及MMP-13（丹酚酸C 0.1 μmol/L，0.77±0.06；丹酚酸C 5 mol/L，0.58±0.06；丹酚酸C 10 μmol/L，0.32±0.13）水平显著性减少（ t=8.66， P<0.001； t=11.03， P<0.001； t=14.22， P<0.001），促进细胞凋亡。丹酚酸C显著性降低促炎性细胞因子的水平（ P<0.001），激活Nrf2信号通路蛋白Nrf2，过氧化氢酶（CAT），醌NADH脱氢酶1（NQO1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）及谷胱甘肽合成酶（GSS）的表达（ P<0.001）。用ML385干扰Nrf2后，显著性逆转丹酚酸C对Nrf2通路蛋白Nrf2（0.68±0.06； t=5.08， P<0.001），CAT（1.44±0.12； t=4.77， P<0.001），NQO1（0.65±0.12； t=5.04， P<0.001），SOD1（1.43±0.10； t=6.36， P<0.001）及GSS（1.42±0.10； t=7.60， P<0.001）的水平，及TNF-α[（260±22）pg/ml； t=13.75， P<0.001]，IL-1β[（701±30）pg/ml； t=12.98， P<0.001]，IL-6[（180.3±10.2）pg/ml； t=16.38， P<0.001]炎症因子的水平。除此之外ML385阻碍丹酚酸C对细胞迁移和侵袭的抑制作用（0.70±0.09； t=11.24， P<0.001；0.64±0.04； t=8.03， P<0.001）及对凋亡的诱导作用（24.4±1.8； t=23.02， P<0.001）。 结论:丹酚酸C可能通过上调Nrf2信号通路，抑制细胞活力及炎症反应，促进凋亡。丹酚酸C是治疗RA的有效潜在药物，但有待进一步动物及临床深入研究。

目的:探讨绞股蓝皂苷ⅩⅦ调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路抗脑缺血/再灌注（I/R）的机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及25、50和100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ组，每组8只。绞股蓝皂苷ⅩⅦ组分别给予绞股蓝皂苷ⅩⅦ 25、50、100 mg/kg灌胃（灌胃量0.01 mL/g），连续给药14 d；其余两组给予相同剂量生理盐水灌胃。然后采用改良线栓法制备大鼠脑I/R模型；假手术组大鼠采用相同方法手术，但不产生实质性栓塞。再灌注后24 h，评估各组大鼠神经功能缺损评分；采集大鼠腹主动脉全血检测血清活性氧（ROS）、血红素加氧酶-1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）、超氧化物歧化酶（SOD）、醌NADH氧化还原酶1（NQO1）、丙二醛（MDA）水平；随后取完整大脑组织并分离大脑皮质脑梗死周围半暗带组织，观察大鼠脑组织大体情况及脑梗死体积，光镜下观察脑组织病理学变化，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA表达，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的蛋白表达。结果:再灌注后24 h，与假手术组比较，I/R模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高，脑组织梗死体积明显增大，血清NQO1、SOD和γ-GCS水平均明显降低、血清MDA、HO-1和ROS水平均明显升高，脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达均明显升高。与I/R模型组比较，50 mg/kg与100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ能明显降低脑I/R大鼠的神经功能缺损评分（分：1.50±0.53、1.37±0.52比2.75±0.46），缩小脑组织梗死体积〔（19.8±5.1）%、（21.4±6.4）%比（42.3±5.8）%〕，明显提高血清NQO1、SOD、HO-1和γ-GCS水平〔NQO1（ng/L）：186.05±10.38、220.75±16.22比131.36±5.95，SOD（kU/L）：63.23±5.30、72.70±8.62比36.75±6.55，HO-1（ng/L）：60.57±7.93、60.35±4.72比42.72±4.95，γ-GCS（kU/L）：8.81±0.53、8.72±0.69比6.80±0.56〕，明显降低血清MDA和ROS水平〔MDA（μmol/L）：5.94±0.66、5.61±0.53比10.88±1.34，ROS（kU/L）：69.11±4.23、67.12±4.52比104.43±7.54〕，同时可明显提高脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达〔Nrf2 mRNA（2 -△△Ct）：1.90±0.13、2.13±0.18比1.48±0.11，Keap1 mRNA（2 -△△Ct）：1.78±0.11、1.85±0.10比1.43±0.10，Nrf2/β-actin：0.73±0.04、0.79±0.03比0.60±0.03，Keap1/β-actin：0.71±0.01、0.76±0.03比0.61±0.01〕，比较差异均有统计学意义（均 P<0.01）；25 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ无明显作用。 结论:绞股蓝皂苷ⅩⅦ （50 mg/kg和100 mg/kg）可能通过Nrf2/ARE信号通路调节NQO1、SOD、HO-1、γ-GCS、ROS及MDA起到抗脑I/R损伤的作用。