目的:分析肺炎支原体诱导的皮疹和黏膜炎（MIRM）的临床特征及预后。方法:调阅中山大学附属第一医院2004年11月至2021年5月出院诊断为多形红斑/重症多形红斑或Stevens-Johnson综合征患者的资料，以MIRM诊断标准筛选出其中的MIRM患者，且排除了其他病因，分析其临床表现、实验室和辅助检查、治疗和预后。结果:8例符合MIRM诊断，其中男4例，女4例，发病年龄4 ~ 30（15.63 ± 9.16）岁。8例均有发热，其中5例有咳嗽、咽痛等上呼吸道前驱症状。所有患者均有口腔黏膜损害，其中5例有口唇血痂；7例有眼损害，表现为结膜充血及分泌物增多。所有患者均有皮损，表现为靶形损害5例、水疱4例。所有患者血清学肺炎支原体IgM均阳性。1例反复出现干咳等上呼吸道感染，每次发作与肺炎支原体感染密切相关，取外周血行全外显子测序显示，NLRC4和IRGM杂合突变。3例患者行皮损组织病理检查，符合多形红斑。7例系统使用糖皮质激素治疗，6例静脉注射免疫球蛋白，5例阿奇霉素，5例使用阿昔洛韦或伐昔洛韦或利巴韦林。平均随访2.9年，3例痊愈，1例失明，1例反复出现干咳和口腔溃疡及四肢皮疹，余3例分别出现眼睑板腺功能障碍、泪点狭窄及角膜上皮损害等眼部损害。结论:MIRM好发于儿童及年轻成人，多有发热、咽痛、咳嗽等前驱症状，黏膜损害明显，部分有皮肤靶形损害。多数患者单次发病后痊愈，个别反复发作者可能与自身炎症相关基因和感染相关基因突变有关。

目的:探讨抑制NLRC5调控CD4 ＋T细胞功能对小鼠移植物的免疫保护作用。 方法:体外培养、纯化和富集小鼠(购自中山大学动物实验中心)脾脏来源CD4 ＋T细胞，转染短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体NLRC5-RNA干扰(RNAi)-绿色荧光蛋白(GFP)；随机分为3组，分别为对照组、T细胞组和NLRC5-RNAi组，每组5只。建立小鼠胰岛移植和皮肤移植模型，术前回输已转染慢病毒的CD4 ＋T细胞，术后观察各组胰岛和皮肤移植物生存情况，并于术后第7天检测移植胰岛和移植皮肤外周血细胞因子白细胞介素(IL)-10和干扰素(IFN)-γ的表达水平，流式细胞术检测小鼠脾细胞内淋巴细胞亚群分化情况。组间差异采用 t检验。 结果:移植术后NLRC5-RNAi组胰岛移植物葡萄糖耐受更好。NLRC5-RNAi组胰岛中位生存时间[(19.0±3.4) d]较对照组[(11.6±1.9) d， t＝5.156， P<0.01]和T细胞组[(10.0±1.4) d， t＝4.151, P<0.01]延长，差异有统计学意义。NLRC5-RNAi组皮肤移植物的中位生存时间[(15.4±3.8) d]较对照组[(8.0±0.9) d， t＝3.375, P<0.05]和T细胞组[(7.8±0.8) d， t＝3.848, P<0.05]延长，差异有统计学意义。外周血酶联免疫吸附试验(ELISA)检测提示胰岛移植NLRC5-RNAi组IL-10表达量[(344.0±4.1) ng/L]较其他组升高( t＝124.141， P<0.01)，IFN-γ表达量[(85.1±6.6) ng/L]较其他组降低( t＝7.633， P<0.05)，差异有统计学意义；皮肤移植NLRC5-RNAi组IL-10表达量[(275.9±12.5) ng/L]较其他组升高；IFN-γ表达量[(96.6±2.5) ng/L]较其他组降低，差异有统计学意义( t＝7.490， P<0.01)；流式细胞术提示胰岛移植NLRC5-RNAi组脾脏细胞中辅助性T细胞(Th2)含量[(0.190±0.053)%]较其他组升高( t＝5.220， P<0.05)，Th1含量[(0.810±0.036)%]较其他组降低( t＝6.219， P<0.05)；皮肤移植NLRC5-RNAi组Th2含量[(0.130±0.012)%]较其他组升高( t＝21.060， P<0.01)，Th1含量[(0.180±0.026)%]较其他组降低，差异有统计学意义( t＝9.248， P<0.05)。 结论:抑制NLRC5基因表达后，CD4 ＋T细胞分化偏向Th2，表达Th2型细胞因子增多，一定程度上延长了移植物存活时间，对移植免疫耐受的诱导具有积极意义。

目的:探究 IKBKB 基因在胃癌细胞中的表达水平与 NLRC5、NF-κB 的作用关系,明确其对胃癌细胞生物学功能影响.方法:采用 pLenti-IKBKB-sgRNA 基因敲除质粒直接对人胃癌 SGC-7901 细胞系进行转染,应用免疫印迹试验(western blot,WB)检测单克隆细胞株中IKBKB 基因敲除的效果,以及 NLRC5、NF-κB 的表达水平.划痕实验和Transwell 迁移实验检测单克隆细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期.成瘤实验观察单克隆细胞对瘤体生长的影响.在临床胃癌组织和癌旁组织中采用免疫组化染色评估NLRC5、NF-κB、IKBKB 的表达状态.明确 IKBKB 与 NLRC5、NF-κB 的相关性以及临床诊断价值.结果:敲除 IKBKB 基因后人胃癌 SGC-7901 细胞中 NLRC5、NF-κB 的表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭能力减弱.细胞发生 G1 期阻滞,降低了 SGC-79013 细胞增殖能力,细胞总凋亡率显著上升.IKBKB 敲除后 NLRC5、NF-κB 表达水平下调影响瘤体的生长发育.NLRC5、NF-κB、IKBKB 在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织,NLRC5、NF-κB 与 IKBKB 的表达水平呈正相关.IKBKB、NLRC5、NF-κB 三者联合诊断胃癌 AUC 为 0.921(0.876～0.967).结论:IKBKB 在胃癌细胞与NLRC5、NF-κB 存在相关作用关系,协同促进胃癌的发生和发展.

目的 分析子宫内膜癌患者NLR家族含CARD结构域5(NLRC5)表达与自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的相关性,并探讨NLRC5、Beclin1、LC3与子宫内膜癌预后的相关性.方法 采集2020年1月—2022年1月安徽医科大学第二附属医院90例子宫内膜癌患者癌组织作为子宫内膜癌组,另取90例正常子宫内膜作为子宫内膜组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定两组NLRC5、Beclin1、LC3 mRNA的表达.子宫内膜癌组患者术后接受12个月的随访,按照实体瘤疗效标准分为预后良好组(72例)与预后不良组(18例);比较两组NLRC5、Beclin1、LC3 mRNA的表达,采用多因素一般Logistic回归模型分析影响子宫内膜癌预后的因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析NLRC5、Beclin1、LC3对子宫内膜癌患者患者预后的预测价值.结果 子宫内膜癌组与正常子宫内膜组NLRC5、Beclin1和LC3 mRNA相对表达量的比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);子宫内膜癌组NLRC5 mRNA相对表达量较正常子宫内膜组低,Beclin1和LC3 mRNA相对表达量较正常子宫内膜组高.NLRC5与Beclin1(r =-0.565,P＜0.05)、LC3(r =-0.421,P＜0.05)呈负相关;Beclin1与LC3呈正相关(r =0.462,P＜0.05).预后良好、预后不良组的年龄、体质量指数、脉管浸润、肿瘤直径比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);预后不良组FIGO分期、宫体肌层深肌层占比、淋巴结转移、Beclin1、LC3 mRNA相对表达量高于预后良好组,NLRC5 mRNA相对表达量低于预后良好组(P＜0.05);FIGO分期Ⅱ、Ⅲ期[(OR) =3.760(95％CI:1.260,11.223)]、宫体肌层深肌层[(OR) =26.800(95％CI:7.043,101.984)]、有淋巴结转移[(OR) = 11.324(95％CI:3.286,39.019)]及Beclin1[(OR) =68.163(95％CI:2.537,1831.270)]、LC3高表达[(OR) =26.468(95％CI:1.444,485.127)]均是子宫内膜癌预后的危险因素(P＜0.05);NLRC5高表达[(OR) =0.001(95％CI:0.000,0.079)]为保护因素(P＜0.05);ROC曲线分析结果显示,NLRC5敏感性为82.8％(95％CI:0.784,0.923)、特异性为73.9％(95％CI:0.670,0.938);Beclin1敏感性为56.8％(95％CI:0.638,0.853)、特异性为77.8％(95％CI:0.644,0.877);LC3敏感性为57.3(95％CI:0.680,0.815)、特异性为72.2％(95％CI:0.693,0.824);联合敏感性为94.4％(95％CI:0.824,0.971)、特异性为62.5％(95％CI:0.593,0.778).结论 子宫内膜癌患者NLRC5呈低水平表达,NLRC5与自噬相关蛋白Beclin1、LC3呈负相关,3者联合检测可提高子宫内膜癌患者的预后预测价值.

目的 探究NOD样受体家族含CARD结构域5(NLRC5)在胃癌中的相互作用蛋白,并明确其对胃癌的诊断价值.方法 采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究NLRC5在胃癌组织和癌旁组织中的差异,结合STRING网站分析NLRC5的相互作用蛋白,通过基因表达综合(GEO)数据库验证TCGA数据库筛选出来的蛋白对胃癌的诊断价值.引用临床模型,验证筛选出来的蛋白在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况,确定各蛋白间的相关性,通过受试者工作特征(ROC)曲线明确其对胃癌的诊断价值.结果 TCGA结果显示,胃癌组织中NL-RC5表达水平明显高于癌旁组织(P﹤0.01).蛋白-蛋白相互作用发现,核因子κB激酶复合物抑制剂组分(CHUK)、核因子κB激酶亚单位β的抑制剂(IKBKB)、三重基序蛋白25(TRIM25)与NLRC5均呈正相关.经过GEO数据库验证得到TRIM25、CHUK、IKBKB与NLRC5可以构建联合模型诊断胃癌.临床模型中NLRC5在胃癌组织中高表达,且与TRIM25、IKBKB、CHUK表达水平均呈正相关(P﹤0.01).NLRC5联合TRIM25、IKBKB、CHUK对胃癌有较高的诊断价值.结论 TRIM25、IKBKB、CHUK参与NLRC5在胃癌发展中的相关调控机制,在胃癌诊断中具有较高的效能.

目的 探究非凋亡调节性细胞死亡基因(non-apoptotic regulatory cell death genes,NARCDs)预测肺腺癌预后的价值及其潜在生物学功能.方法 我们下载癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atla,TCGA)及基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中肺腺癌的转录组数据.使用R软件分析在肺腺癌组织和正常组织之间存在差异表达的NARCDs.采用单变量Cox分析和LASSO-Cox回归分析构建NARCDs预后模型.采用生存分析曲线、受试者工作特征曲线、单因素和多因素Cox回归分析评估NARCDs预后模型对肺腺癌预后的预测能力.采用GSVA、GO和KEGG分析NARCDs预后模型的功能富集情况.此外,我们分析了高、低NARCDs评分组间的肿瘤突变负担、肿瘤微环境、肿瘤免疫功能障碍与排斥(Tumor Immune Dysfunction and Exclusion,TIDE)评分和化疗药物敏感性的差异.最后,使用STRING和Cytoscape软件构建NARCDs与免疫相关基因的蛋白-蛋白相互作用网络.结果 我们确定了 34个与预后相关的差异表达NARCDs,其中16个基因(ATIC、AURKA、CA9、ITGB4、DDIT4、CDK5R1、CAV1、RRM2、GAPDH、SRXN1、NLRC4、GLS2、ADRB2、CX3CL1、GDF15 和 ADRA1A)被用于构建NARCDs预后模型.NARCDs风险评分是肺腺癌的独立预后因素(P＜0.001).功能分析显示:高NARCDs评分组与低NARCDs评分组间在错配修复、p53信号通路和细胞周期方面存在显著差异(P＜0.05).低NARCD评分组的肿瘤突变负荷较低,免疫评分及TIDE评分较高,对药物的敏感性较低(P＜0.05).此外,蛋白-蛋白相互作用网络的10个关键基因(CXCL5、TLR4、JUN、IL6、CCL2、CXCL2、ILA、IFNG、IL33和GAPDH)均为免疫相关基因.结论 基于16个基因构建的NARCDs预后模型是肺腺癌的独立预后因素,其能有效预测患者预后,并为临床治疗提供帮助.

目的:探索炎症小体NLRP1、NLRC4 在前列腺癌诊疗中的临床价值.方法:收集2022 年 1～5 月在平湖市第一人民医院收治的54 例前列腺增生患者和 58 例前列腺癌患者.通过免疫组化染色法检测NLRP1、NLRC4 炎症小体及促炎症因子IL-18、IL-1β在两组患者中表达水平,分析其表达特点.在前列腺癌组中将NLRP1、NLRC4 炎症小体的表达与TPSA、FPSA及Gleason评分进行相关性分析.同时根据癌症基因组图谱(TCGA)数据集中的数据,比较NLRP1 和NLRC4 炎症小体在不同分期的前列腺癌中的表达差异.结果:NLRP1、NLRC4 炎症小体在前列腺癌中的表达明显升高(P＜0.001).NLRP1 炎性小体与IL-1β、IL-18 的表达直线相关(P＜0.05),NL-RC4 炎性小体与IL-1 β表达直线相关(P＜0.05).NLRP1、NLRC4 的表达与前列腺癌 Gleason 评分正相关(P＜0.05).同时炎症小体在不同分期前列腺癌中表达不同,NLRP1 在T3/T4 期中表达高于T1 期(P＞0.05),NLRC4炎症小体在T2 和T3/T4 的表达也明显高于T1 期(P＜0.05).结论:炎症小体NLRP1、NLRC4 在前列腺癌中成高表达,并通过促进炎症因子IL-1β、IL-18 的成熟及释放,促进肿瘤发生,并在肿瘤的进展中发挥重要作用,可为前列腺癌危险度评估及预后预测提供一定价值.

The nucleotide-binding domain-and leucine-rich repeat (LRR)-containing proteins (NLRs) function as intracellular immune receptors to detect the presence of pathogen-or host-derived signals.The mechanisms of how NLRs sense their ligands remain elusive.Here we report the structure of a bacterial flagellin derivative in complex with the NLR proteins NAIP5 and NLRC4 determined by cryo-electron microscopy at 4.28 (A) resolution.The structure revealed that the flagellin derivative forms two parallel helices interacting with multiple domains including BIR1 and LRR of NAIP5.Binding to NAIP5 results in a nearly complete burial of the flagellin derivative,thus stabilizing the active conformation of NAIP5.The extreme C-terminal side of the flagellin is anchored to a sterically constrained binding pocket of NAIP5,which likely acts as a structural determinant for discrimination of different bacterial flagellins by NAIPS,a notion further supported by biochemical data.Taken together,our results shed light on the molecular mechanisms underlying NLR ligand perception.

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目的 探讨核苷酸结合结构域受体家族含CARD结构域-5 (NLRC5)在肝细胞癌组织中表达情况及与临床病理特征、预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测94例肝细胞癌组织及其癌旁正常组织中NLRC5的表达;Westemblot检测20例新鲜肝细胞癌组织及其对应的癌旁正常组织中NLRC5的表达.结果 NLRC5在肝细胞癌组织中的阳性率(62.77％)显著高于癌旁正常组织(19.15％,P＜0.01);NLRC5的表达与肝细胞癌分化程度、TNM分期、有无硬化有关(P＜0.05),与患者年龄、性别、AFP值、肿瘤大小、HBV感染、肿瘤包膜是否完整无关(P＞0.05).肝细胞癌组织中蛋白相对表达量(0.280 ±0.049)明显高于相应癌旁正常组织中(0.038±0.009,P＜0.01).NLRC5阳性患者的3年生存期明显低于阴性患者(P＜0.01),并且NLRC5为肝细胞癌预后的独立性危险因素.结论 NLRC5蛋白在肝细胞癌组织中高表达,且与患者的临床病理特征、预后等因素有关,可能在肝细胞癌发生、发展过程中起着重要作用,有望成为肝细胞癌新的肿瘤标志物和潜在的治疗靶点.