目的:探讨血浆中同型半胱氨酸(Hcy)水平与老年冠心病患者肾功能减退的相关性。方法:选取2015年1月至2017年7月在我院心内科收治的老年冠心病患者858例，以肾小球滤过率(eGFR)60 ml/min为界值将患者分为肾功能不全组和无肾病组，按照随机数表法将肾功能不全组进一步分为干预组和安慰剂组。干预组给予叶酸、维生素B6和维生素B12治疗，安慰剂组给予口服安慰剂(淀粉)处理。酶联免疫法监测肾功能不全组和无肾病组患者血浆Hcy、血清肌酐、血尿素(BUN)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)以及血红蛋白(Hb)含量；Pearson法分析两组患者血浆Hcy与血清肌酐、BUN和eGFR的相关性。观察并对比干预组和安慰剂组患者治疗前及治疗后6、12个月的血浆Hcy、血清肌酐、BUN和Hb含量，分析治疗后12个月两组患者的肾功能分期水平以分析临床效果。结果:肾功能不全组血浆Hcy、血清肌酐和BUN水平明显高于无肾病组( t＝3.174、4.857、2.644，均 P＝0.000)，肾功能不全组eGFR水平较无肾病组降低( t＝－2.867， P＝0.000)；肾功能不全组和无肾病组血浆Hcy水平与血清肌酐和BUN水平呈正相关( r＝0.308、1.214，均 P＝0.000)，与eGFR水平呈负相关( r＝－0.148， P＝0.003)。治疗前干预组和安慰剂组患者血浆Hcy、Hb、血清肌酐和BUN水平比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)；干预组患者各监测时刻血浆Hcy、血清肌酐和BUN水平呈持续下降趋势( F＝314.527、234.861、176.332， P＝0.012、0.000、0.006)，安慰剂组各监测时刻血浆Hcy水平无明显改变，血清肌酐和BUN水平呈持续上升趋势( F＝196.427、223.753、314.552， P＝0.216、0.000、0.002)；治疗12个月后，干预组患者血浆Hcy、血清肌酐和BUN水平均低于安慰剂组，差异有统计学意义( t＝1.284、0.779、2.541， P＝0.016、0.000、0.005)。对Hb水平进行分析发现，治疗前后不同监测时刻两组患者间结果差异无统计学意义( F＝113.764， P＝0.182)。治疗前干预组和安慰剂组患者肾功能分期比较差异无统计学意义( χ2＝4.263， P＝0.119)，随访结束后干预组肾功能分期水平较安慰剂组改善( χ2＝73.599， P＝0.000)。 结论:血浆中高Hcy水平可作为老年冠心病患者肾功能减退的独立危险因素，在延缓疾病进展和改善预后方面存在相关性作用。

目的:探讨裸角质膜同源蛋白(NKD1)在骨肉瘤组织中表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2014年1月到2019年1月信阳职业技术学院附属医院保存的骨肉瘤组织样本和周围正常骨组织样本各63例作为研究对象。采用免疫组织化学检测骨肉瘤和正常组织NKD1蛋白表达，分析NKD1表达水平与患者临床病理特征和预后的关系。组间计量数据比较采用 t检验，NKD1与临床病理特征的关系采用 χ2检验，NKD1与生存时间和预后的关系采用Kaplan-Meier分析。 结果:NKD1主要表达于细胞质，呈黄色或棕黄色。癌旁组织NKD1表达阳性率[95.20%(60/63)]明显高于骨肉瘤组织[14.29%(9/63)]，差异有统计学意义( χ2＝12.091， P<0.05)。不同性别骨肉瘤患者NKD1表达阳性率比较(11.90%比19.05%)，差异无统计学意义( χ2＝0.517， P>0.05)。<20岁和≥20岁骨肉瘤患者NKD1表达阳性率比较(11.90%比19.05%)，差异无统计学意义( χ2＝0.489， P>0.05)。膝关节周围和其他部位发病的患者NKD1表达阳性率比较(11.63%比20.00%)，差异无统计学意义( χ2＝0.367， P>0.05)。Enneking分期Ⅱ期患者NKD1表达阳性率(23.33%)明显高于Ⅲ期患者(6.06%)，差异有统计学意义( χ2＝7.109， P<0.05)。无肺转移患者肿瘤组织NKD1表达阳性率(29.63%)明显高于肺转移患者肿瘤组织(2.78%)，差异有统计学意义( χ2＝12.722， P<0.05)。不同组织类型患者NKD1表达阳性率比较(13.79%比14.29%比15.38%)差异无统计学意义( χ2＝0.732， P<0.05)。NKD1表达阳性者的中位生存时间(29个月)明显高于NKD1表达阴性者(13个月)，差异有统计学意义( χ2＝7.271， P<0.05)。生存曲线显示，NKD1表达阳性者的3年生存率[77.78%(7/9)]明显高于NKD1表达阴性者[25.93%(14/54)]，差异有统计学意义(Log-rank＝4.901， P<0.05)。NKD1表达水平、Enneking分期和肺转移均是骨肉瘤患者独立预后因素( P<0.05)。 结论:NKD1蛋白在骨肉瘤组织表达下调，与肿瘤恶性程度和患者预后明显相关。

目的 探讨机采血小板储存过程中差异性lncRNA表达谱变化及其差异表达的lncRNA在血小板储存损伤中潜在的生物学功能.方法 收集13(人)份O型健康男性机采血小板各50 mL,于(22±2)℃下震荡储存,应用lncRNA芯片技术检测储存2、5、8d机采血小板中lncRNA和mRNA表达谱变化;运用GO分析及KEGG分析预测差异表达的lncRNA功能分布,通过顺式调控分析预测lncRNA调控邻近蛋白编码基因表达的分子机制;采用实时PCR(RT-PCR)技术,验证8条lncRNA(MARCH2-2∶1、SLC2A2-1∶1、WBSCR16-3∶6、WEE 1-2∶1、ENTPD6-2∶1、NKD2-1∶1、FOXS1-2∶1、MAPK13-3∶1)和4条mRNA(BCL2L1、CAPN2、MAPK14、VAMP8)的表达.结果 芯片检测:血小板储存5与2d相比,有162种lncRNA的表达量发生明显变化,表达升高的4种、降低的158种;8与2d相比,有691种lncRNA表达量发生明显变化,表达升高的20种、降低的671种;8与5d相比,246种lncRNA表达量发生明显变化,升高的2种,降低的244种.GO和KEGG分析:差异表达的lncRNA可能参与的生理过程有血小板激活、血小板聚集、内吞、凋亡、肌动蛋白纤维聚集、肌动蛋白骨架的调节;顺式调控分析:lncRNA具有调控血小板相关mRNA表达的功能,USP39-1调控VAMP8的表达、TMEM86B-2调控GP6的表达、FOXS1-2调控BCL2L1的表达等.RT-PCR验证:与芯片检测结果一致,其中lncRNA MARCH2-2∶1、WEE 1-2∶1和NKD2-1∶1表达量升高,WBSCR16-3∶6、SLC2A2-1∶1、ENTPD6-2∶1、FOXS 1-2∶1和MAPK13-3∶1表达量下降,BCL2L1,CAPN2,MAPK14和VAMP8的表达量也下降.结论 血小板中含有大量的lncRNA,其表达量随着血小板储存时间延长而呈不同的变化趋势,总体来讲下调的lncRNA数量较多,且下调的幅度较大.部分变化的lncRNA可能与血小板生理功能密切相关,并且在血小板储存损伤中发挥作用.

目的:研究体外果蝇裸露角蛋白2(naked cuticle homolog 2,Nkd2)对大鼠牙囊细胞(rat dental follicle cells,rDFCs)成骨向分化的调控机制.方法:体外培养rDFCs,鉴定其组织来源并进行成骨向分化诱导,茜素红染色验证其成骨向分化能力,激光共聚焦检测检测Nkd2在中rDFCs的表达;采用小RNA干扰技术,干扰rDFCs中的Nkd2表达后进行成骨向分化诱导,western blot检测小RNA干扰对rDFCs表达成骨向分化因子Runx2、Col-1和OCN的影响;免疫荧光染色检测3-catenin在rDFCs中的分布变化,western blot检测小RNA干扰对rDFCs表达蓬乱蛋白1(Dishevelled-1,Dvl-1)的表达变化和Wnt/β-catenin信号通路激活剂Wnt3a与阻断剂FH535处理rDFCs后Nkd2的表达改变.结果:获得体外培养的rDFCs,并成功诱导其成骨向分化,茜素红染色显示矿化结节形成.Nkd2在rDFCs中的表达主要分布于胞浆和胞核周围.Nkd2小RNA干扰后的rDFCs中Runx2、Col-1蛋白表达明显下调,Dvl-1的表达下调.同时,Wnt3a处理组rDFCs中Nkd2蛋白表达量升高,而FH535处理组的表达量下降.结论:Nkd2通过Dvl-1调控Wnt/β-catenin信号通路促进rDFCs的成骨向分化;Nkd2是Wnt/β-catenin信号通路的靶基因,对Wnt/β-catenin信号通路起正反馈调节作用.

目的 探讨2型糖尿病肾病(DN)患者血清胱抑素C(Cys C)与颈动脉内膜中层厚度(IMT)的关系.方法 204例住院的2型糖尿病患者,按24 h尿白蛋白排出量(UAE)分为单纯糖尿病组、早期DN组及临床DN组.检测血清Cys C、生化指标和IMT.再根据肾小球滤过率(eGFR)将DN两组患者划分为CKD组和NKD组,比较上述指标.并采用多元线性回归分析在DN患者中血清Cys C与IMT的相关性.结果 在糖尿病3组间,BUN、Cr、血清Cys C随着UAE的增加而增加,eGFR逐渐下降,两两比较均差异有统计学意义(P<0.05).IMT在临床DN组和早期DN组显著升高,与单纯糖尿病组比较差异有统计学意义(P<0.01).UAE、BUN、Cr、血清Cys C、IMT在CKD组均显著高于NKD组(P<0.05,P<0.05).血清Cys C与年龄、病程、收缩压、UAE、BUN、Cr、UA、IMT均呈正相关(r=0.319、0.279、0.283、0.637、0.660、0.806、0.411、0.299,P<0.01),与ALT呈显著负相关(r=-0.212,P<0.01).多元线性回归分析显示,血清Cys C、年龄、收缩压、Cr、TG是IMT的独立影响因素.结论 在2型DN患者中,血清Cys C可作为IMT的一个独立影响因素.对于高血清Cys C的DN患者,我们应密切关注心血管事件的发生.

目的 裸角质膜同源蛋白(naked cuticle drosophila1,NKD1)是Wnt/β-catenin信号通路上重要的负向调控因子之一,β-catenin在乳腺癌组织中存在异常表达,且影响乳腺癌细胞生物学特征.本研究探讨NKD1与β-catenin在乳腺癌组织中表达及意义.方法 收集2014-01-01-2015-12-30沧州市中心医院手术切除的200例乳腺癌肿瘤组织标本,其中浸润性乳腺癌(invasive breast cancer,IBC)150例、导管内癌50例,同时选取癌旁正常乳腺组织标本50例作为对照,采用免疫组化法、蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测所有组织中NKD1与β-catenin表达,蛋白质印迹法检测NKD1表达对MCF-7细胞中β-catenin和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白表达影响,分析IBC组织中NKD1与β-catenin关系及与患者临床病理参数关系.结果 IBC组织NKD1蛋白(t=6.237,P=0.025)和NKD1 mRNA(t=9.428,P＜0.001)相对表达量低于正常乳腺组织;IBC组织β-catenin蛋白表达量(t=5.208,P=0.011)高于正常乳腺组织.IBC和导管内癌NKD1阳性细胞比例低于正常乳腺组织,F=13.142,P＜0.001;IBC和导管内癌β-catenin异位表达阳性细胞比例高于正常乳腺组织,F=9.034,P=0.011.IBC组织NKD1表达量与β-catenin异位表达量呈负相关(r=-0.928,P=0.011).NKD1高低表达与IBC患者肿瘤分化程度(x2=7.128,P=0.006)、淋巴结转移(x2 =7.770,P=0.005)和TNM分期(x2=6.489,P=0.011)有关联;β-catenin异位高低表达与IBC患者肿瘤分化程度(x2=13.264,P＜0.001)、淋巴结转移(x2=15.748,P＜0.001)和TNM分期(x2=5.725,P=0.015)有关联.NKD1激活组NKD1(t=13.264,P＜0.001)和E-cadherin(t=10.127,P＜0.001)蛋白表达高于空载组;NKD1激活组Wnt1(t=15.324,P＜0.001)、MMP-9(t=16.102,P＜0.001)和vimentin(t=10.946,P＜0.001)蛋白表达低于空载组.结论 NKD1在浸润性乳腺癌组织中呈低表达,β-catenin在浸润性乳腺癌组织中高表达,其机制可能与Wnt信号通路有关.

目的 探讨手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)患儿外周血自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT)数目、表型及功能活性在不同病情、EV71感染中的变化及意义.方法 应用流式细胞术检测39例健康儿童和55例HFMD患儿的外周NKT细胞数量、表型(NKD2A、CD94和NKG2D)及杀伤颗粒或细胞因子分泌功能(CD107a、GB或IFN-γ、IL-10).酶联免疫吸附法检测血浆细胞因子和趋化因子(IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ和MCP-1)的水平.结果 与健康儿童相比,重症(EV71+/EV71-)患儿NKT细胞数量及百分比均显著降低(P＜0.05);重症(尤其EV71-重症)患儿NKT细胞表达抑制性NKG2A/CD94受体显著升高(P＜0.05);轻症患儿的NKT细胞分泌IL-10显著增多(P＜0.05);重症HFMD患儿血浆IL-6、TNF-α、IFN-γ和MCP-1的水平显著增高(P＜0.05);EV71-重症患儿IL-10水平明显增高(P＜0.05).NKT细胞数目与CD107a+NKT或GB+NKT％呈正相关(P＜0.05);IL-10+NKT％与NKG2D+NKT％或IFN-γ+ NKT％呈正相关(P＜0.05).结论 随着HFMD病情进展,外周血NKT细胞数目减少,抑制性受体(NKG2A/CD94)表达上调,细胞因子分泌和细胞毒性功能障碍等,可能促进HFMD患儿免疫功能紊乱并参与HFMD重症化.

目的 明确果蝇裸露角蛋白2 (Nkd2)在大鼠下颌第一磨牙牙本质发育过程中表达.方法 取出生后1d、3d、5d、7d、9d的SD乳鼠下颌骨制作石蜡切片免疫组化染色,倒置显微镜观测Nkd2在大鼠牙胚中的表达;体外培养大鼠牙乳头细胞并采用细胞免疫组化染色进行组织来源鉴定,诱导其成牙本质向分化后茜素红染色,荧光定量RT-qPCR和Western blot检测Nkd2在此过程中的表达变化趋势.结果 免疫组织化学染色显示Nkd2在牙乳头、成牙本质细胞层和成釉细胞和牙囊中均阳性,在牙本质形成早期的成牙本质细胞层中强表达,随后减弱.Nkd2在大鼠牙乳头细胞中的表达呈阳性,矿化诱导4周后茜素红染色显示有矿化结节形成.荧光定量RT-qPCR和Western blot检测显示矿化诱导培养过程中Nkd2的表达呈先上调后下调趋势.结论 Nkd2在大鼠牙胚组织中的表达分布具有时空特异性,体外大鼠牙乳头细胞诱导成牙本质细胞向分化过程中,Nkd2表达呈先上调后下调的趋势,推测Nkd2可能在牙本质形成早期发挥作用.

目的 探讨Wilms(WT1)基因、裸角质膜同源蛋白(NKD1)基因在急性髓系白血病中的表达及其与预后的关系.方法 将2018年2月至2019年6月该院收治的100例急性髓系白血病患者纳入研究作为观察组,选取同期于该院治疗的造血系统非恶性肿瘤(缺铁性贫血)患者100例作为对照组.纳入研究者均进行WT1、NKD1基因检测,比较两组人群NKD1、WT1基因的表达水平;使用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析WT1、NKD1基因检测用于急性髓系白血病诊断的价值;统计患者12个月内的生存率及生存时间,采用Pearson相关分析WT1、NKD1基因表达与患者生存预后的关系.结果 观察组WT1、NKD1基因表达水平均高于对照组(P<0.05).ROC曲线分析显示,WT1基因检测的曲线下面积(AUC)为0.979,NKD1基因的AUC为0.984,两者均具有较高的诊断价值.观察组100例患者总生存率为88.00％(88/100),平均生存时间为(10.42±2.69)月,WT1、NKD1基因表达均与患者生存时间呈正相关(r=0.417、0.492,P<0.001).结论 WT1、NKD1 基因表达与急性髓系白血病发生、发展密切相关.

目的 探究miR-96通过干扰裸露角质蛋白同源物2(naked cuticle homolog 2,NKD2)的表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响.方法 回顾性分析我院2013年9月至2018年2月收集的骨肉瘤标本57例临床资料作为研究组,同时收集距肿瘤边界5 cm的癌旁组织作为对照组,其中男39例,女18例;年龄21～49岁,平均(28.16±6.73)岁.将骨肉瘤MG63细胞株分为miR-96抑制组与空白对照组,其中miR-96抑制组细胞给予miR-96抑制剂转染,空白对照组细胞不作任何处理.培养48h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法与 Western blot 法检测各组人骨肉瘤 MG63细胞中 miR-96与 NKD2蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyltetrazolium assay,MTT)法检测各组细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况与细胞周期分布情况.结果 骨肉瘤组织中miR-96表达水平明显高于正常骨组织(P＜0.05);骨肉瘤组织中NKD2蛋白表达水平明显低于正常骨组织(P＜0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中miR-96表达水平明显低于空白对照组(P＜0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中NKD2表达水平明显高于空白对照组(P＜0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株经miR-96抑制剂转染48h后细胞相对吸光度明显低于空白对照组细胞(P＜0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株细胞凋亡率明显大于空白对照组(P＜0.05);miR-96抑制组与空白对照组骨肉瘤MG63细胞株细胞周期情况差异明显(P＜0.05).结论 miR-96在骨肉瘤组织中呈高表达,NKD2在骨肉瘤组织中呈低表达;miR-96通过抑制NKD2表达而促进骨肉瘤MG63细胞株生长,并抑制骨肉瘤MG63细胞株早期凋亡.