目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1(OTUD6B-AS1)通过微小RNA(microRNA，miR)-122-5p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2010年1月至2013年1月河南科技大学第一附属医院手术切除的98例肝癌组织标本及其配对的癌旁组织、肝癌细胞系(Hhu7、Hep3B、HCCLM3、MHCC97H)和人正常肝细胞(LO2)中OTUD6B-AS1的相对表达量。用脂质体2000(Lipofectamine? 2000)分别将sh-NC(sh-NC组)和sh-OTUD6B-AS1(sh-OTUD6B-AS1组)转染入Hep3B细胞。克隆形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；Transwell检测细胞侵袭；细胞划痕实验检测细胞迁移。用TargetScan预测OTUD6B-AS1与miR-122-5p的互补结合位点，随后用双荧光素酶报告基因实验确定两者的靶向关系。为了进一步验证两者调控关系，将Hep3B细胞分别分为sh-NC＋miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1＋miR-NC组、sh-OTUD6B-AS1＋anti-miR-122-5p组，比较3组细胞增殖、侵袭和迁移。两两比较采用 t检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验；生存分析采用Log-rank检验。 结果:肝癌组织中OTUD6B-AS1相对表达量为2.42±0.96，明显高于癌旁组织(0.92±0.39， t＝14.331， P<0.05)，差异有统计学意义。肝癌细胞系Hhu7(2.84±0.23)、Hep3B(3.80±0.68)、HCCLM3(1.89±0.25)和MHCC97H(2.01±0.71)的OTUD6B-AS1相对表达量明显高于正常肝细胞LO2(1.04±0.23， F＝51.827， P<0.05)，差异有统计学意义。sh-OTUD6B-AS1组细胞增殖、侵袭和迁移能力均低于sh-NC组( t＝5.556、2.454， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。双荧光素酶报告基因实验结果证实OTUD6B-AS1可以靶向调控miR-122-5p。sh-NC＋miR-NC组和sh-OTUD6B-AS1＋anti-miR-122-5p组增殖、侵袭和迁移能力明显高于sh-OTUD6B-AS1＋miR-NC组( F＝111.908、0.301， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:OTUD6B-AS1可能通过负调控miR-122-5p促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

目的 研究非肌层浸润膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)癌组织中结构域蛋白去泛素化酶5(domain protein ubiquitin 5,OTUD5)、环指蛋白 186(ring finger protein 186,RNF186)表达与临床病理特征的关系及预后价值研究.方法 收集2019年1月～2020年1月唐山市中医院收治的106例NMIBC患者.免疫组织化学检测NMIBC癌组织及癌旁组织O TUD5,RNF186表达.比较不同临床病理特征NMIBC癌组织O TUD5,RNF186表达差异.Kaplan-Meier曲线分析(Log-Rank检验)OTUD5,RNF186表达对NMIBC无进展生存预后的影响.COX回归模型分析影响NMIBC患者无进展生存预后的因素.结果 NMIBC癌组织中OTUD5(62.26％),RNF186(66.04％)的阳性率高于癌旁组织(11.32％,8.49％),差异具有统计学意义(x2=59.146,75.079,均P＜0.05).NMIBC癌组织中OTUD5与RNF186表达呈显著正相关(r=0.659,P＜0.05).T 1期、高级别尿路上皮癌NMIBC癌组织中OTUD5(72.97％,84.21％),RNF186(77.03,86.84％)阳性率高于 Ta/Tis 期(37.50％,50.00％)、低级别尿路上皮癌(40.63％,54.41％),差异具有统计学意义(x2=11.964,13.199;12.143,11.431,均 P＜0.05).O TUD5 阳性组(40.91％)、RNF186阳性组(45.71％)三年累积无进展生存率低于OTUD5阴性组(90.00％)、RNF186阴性组(86.11％)患者(Log-Rank testx2=24.710,14.586,均P＜0.05).OTUD5 阳性(OR=1.446,95％CI:1.086～1.925)、RNF186 阳性(OR=1.579,95％CI:1.132～2.024)、肿瘤 TNM 分期 T1 期(OR=1.582,95％CI:1.219～2.054)、病理分级高级别(OR=1.570,95％CI:1.188～2.074)是影响NMIBC患者无进展生存的独立危险因素(均P＜0.001).结论 NMIBC患者癌组织OTUD5,RNF186表达升高,与肿瘤TNM分期、病理分级有关,是影响NMIBC患者预后的独立危险因素.

目的 探究血清及肝癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA1(OTUD6B-AS1)、微RNA-365a-3p(miR-365a-3p)的表达水平与肝癌病人临床病理特征及预后的关系.方法 纳入2015年3月至2017年3月海南医学院第一附属医院收治的肝癌病人86例(肝癌病人组),同时募集同期体检的健康志愿者86例(健康对照组),收集所有研究对象的临床资料.采用qRT-PCR法检测血清及肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达;Star?base数据库预测LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间的关系;使用Pearson分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达的相关性;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与病人5年生存率之间的关系;Cox回归分析肝癌病人预后的影响因素.结果 与健康对照组比较,肝癌病人组血清中LncRNA OTUD6B-AS1高表达(1.59±0.41比1.02±0.32),miR-365a-3p低表达(0.42±0.15比1.05±0.26)(P<0.05).肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1表达水平高于癌旁组织(1.70±0.44比0.97±0.16),miR-365a-3p表达水平低于癌旁组织(0.53±0.17比1.01±0.14)(P<0.05).血清中Ln?cRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与TNM期、淋巴结转移以及分化程度相关(P<0.05).生物信息学预测显示LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间存在靶向结合位点.Pearson分析显示,肝癌病人血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达存在负相关(r=?0.47,P<0.05).LncRNA OTUD6B-AS1低表达组肝癌病人的5年生存率高于LncRNA OTUD6B-AS1高表达组(37.21％比13.95％,χ2=6.11,P=0.013);miR-365a-3p高表达组肝癌病人的5年生存率高于miR-365a-3p低表达组(41.86％比9.30％,χ2=8.03,P=0.005).LncRNA OTUD6B-AS1高表达以及miR-365a-3p低表达是影响肝癌病人死亡的独立危险因素(P<0.05).结论 LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p在肝癌病人血清及肝癌组织中分别呈高、低表达,二者均与TNM期、淋巴结转移、分化程度等临床病理特征以及预后有关.

泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome-system,UPS)是控制蛋白质降解的主要系统,也是细胞基本活动的关键调节器.去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)是泛素-蛋白酶体系统的组成部分,主要参与调节蛋白质泛素化和去泛素化的动态平衡,对细胞增殖、信号转导、神经病变或肿瘤发生意义重大.不同的DUBs在乳腺癌中的作用不同,最新发现去泛素化酶BAP1、OTUD3、ATXN3L主要调节乳腺癌细胞增殖,某些DUBs小分子抑制剂可以间接诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡.本文主要综述这三个DUBs及去泛素化酶抑制剂在乳腺癌中的研究新进展,为寻找新型的乳腺癌分子靶向药物提供理论依据.

目的:探讨卵巢癌结构域蛋白酶-1 (ovarian tumor domain-containing protease-1, OTUD1) 基因对人结肠癌细胞HCT116增殖和侵袭的作用及机制.方法:选取低表达OTUD1的人结肠癌细胞株, 利用慢病毒包装技术过表达OTUD1基因, 空载质粒作对照, 嘌呤霉素筛选后构建稳定转染的结肠癌细胞株.RT-PCR (reverse transcription PCR) 和Western blot技术检测转染效率.细胞迁移和侵袭实验检测2组细胞迁移和侵袭能力的改变.细胞增殖实验和流式细胞术检测2组细胞增殖能力的变化.克隆形成实验检测2组细胞的克隆形成能力.Western blot技术分析相关蛋白分子水平的变化, 探讨其可能的机制.结果:6株结肠癌细胞株中HCT116细胞的OTUD1蛋白表达水平最低, 并成功构建过表达OTUD1基因的结肠癌细胞株HCT116-OTUD1.与对照组HCT116-Control细胞相比, HCT116-OTUD1细胞株迁移 (P=0.000) 和侵袭能力减弱 (P=0.000) , CCK-8增殖实验显示实验组细胞增殖水平下降 (P=0.004) , EDU流式检测结果显示细胞增殖水平下降 (P=0.000) , 克隆形成能力下降 (P=0.017) .上皮间质转化 (epithelial mesenchymal transition, EMT) 相关分子E-cadherin表达水平上调, Vimentin表达水平下调, 增殖相关信号通路分子p-AKT、p-ERK1/2表达水平下调.结论:过表达OTUD1可以通过减弱细胞的EMT作用来影响其迁移和侵袭能力, 并抑制细胞的增殖能力, 这种变化可能与MAPK/Erk和PI3K/Akt信号通路的激活受到抑制有关.

目的:探讨结肠癌病灶内Runt相关转录因子2(RunX2)与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性.方法:90例原发性结肠癌患者作为结肠癌组、68例良性结肠息肉患者作为结肠息肉组,对比两组病灶组织中RunX2及增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的差异,进一步采用Pearson检验评估结肠癌组织中RunX2表达量与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的相关关系.结果:结肠癌组病灶中RunX2 mRNA的表达量高于结肠息肉组.结肠癌组病灶中增殖基因GTPBP4、HOXB7、ZNF331、ADAM17、HSP60 mRNA的表达量高于结肠息肉组;抑癌基因ATF3、FOXN3、OTUD1、NDRG2 mRNA的表达量低于结肠息肉组;血管新生分子Musashi 1、NF-κB、RegⅣ、STAT3mRNA的表达量高于结肠息肉组.结肠癌病灶中RunX2 mRNA表达量与上述增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量直接相关.结论:结肠癌病灶内RunX2异常高表达,且具体表达量与癌细胞的增殖活性、血管新生活性均呈正相关,是导致结肠癌发生发展的重要分子靶点.

The activity and stability of the adapter protein MAVS (also known as VISA,Cardif and IPS-1),which critically mediates cellular antiviral responses,are extensively regulated by ubiquitination.However,the process whereby MAVS is deubiquitinated is unclean Here,we report that the ovarian tumor family deubiquitinase 4 (OTUD4) targets MAVS for deubiquitination.Viral infection leads to the IRF3/7-dependent upregulation of OTUD4 which interacts with MAVS to remove K48-linked polyubiquitin chains,thereby maintaining MAVS stability and promoting innate antiviral signaling.Knockout or knockdown of OTUD4 impairs RNA virus-triggered activation of IRF3 and NF-KB,expression of their downstream target genes,and potentiates VSV replication in vitro and in vivo.Consistently,Cre-ER Otud4fl/fl or Lyz2-Cre Otud4fl/fl mice produce decreased levels of type Ⅰ interferons and proinflammatory cytokines and exhibit increased sensitivity to VSV infection compared to their control littermates.In addition,reconstitution of MAVS into OTUD4-deficient cells restores virus-induced expression of downstream genes and cellular antiviral responses.Together,our findings uncover an essential role of OTUD4 in virus-triggered signaling and contribute to the understanding of deubiquitination-mediated regulation of innate antiviral responses.

目的:研究去泛素化酶OTUD3与肿瘤抑制因子p53蛋白在乳腺癌组织中表达相关性及对DNA损伤应答的意义.方法:免疫组化检测80对乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中去泛索化酶OTUD3蛋白表达情况;Western Blot检测其中10对新鲜组织标本中OTUD3与p53及其下游p21蛋白的表达;紫外线照射损伤乳腺癌MCF7细胞DNA,并用CHX处理细胞,Western Blot检测OTUD3与p53蛋白水平变化;在ATM野生型(ATM+/+)与ATM敲除(ATM-/-)细胞中重复DNA损伤实验,Western Blot检测OTUD3与p53蛋白水平变化.结果:乳腺癌组织中OTUD3的阳性表达率(42.5％)显著低于癌旁正常组织阳性表达率(83.8％,P＜0.05);OTUD3与p53在乳腺癌组织中表达低于癌旁组织,且两者表达一致;OTUD3和p53能够响应DNA损伤并且OTUD3对损伤的应答可能与其泛素化酶活性有关.结论:OTUD3是一个潜在的抑癌分子,其表达下降参与乳腺癌的发生,并且在DNA损伤情况下,OTUD3可能通过去泛素化作用对p53蛋白产生影响.

泛素化( ubiquitination )是一种蛋白质翻译后修饰过程,泛素( ubiquitin )以共价连接的方式形成多聚泛素链并结合到靶蛋白赖氨酸( lysine,K)残基上,该过程由泛素激活酶( ubiquitin-activating enzymes , UBE, E1 )、泛素结合酶( ubiquitin-conjugating en-zymes,UCE,E2)和泛素连接酶(ubiquitin ligases,E3)顺序激活[1].

目的 探讨多发性硬化症(MS)患者外周血T细胞中发生差异变化的致病相关基因及关键通路.方法 首先,从GEO数据库下载了GEO数据系列GSE43591,GSE13732,GSE32988,包含了42例T细胞实验样本和35例健康对照样本的基因芯片数据;其次,在R软件中使用limma包等筛选鉴定出差异表达基因(DEGs),并进行了层次聚类分析.最后,通过两两取交集,得到了77个上调DEGs和61个下调DEGs,然后采用包括DAVID、PATHER、Reactome、STRING及Cytoscape里的ReactomeFIPlugIn和Cytohubba应用程序等多种方法进行基因功能和通路富集分析、PPI网络分析和关键基因分析.结果 最重要的关键DEGs,包括EIF4E、RPL37A、RPS24、RPL31、EIF4G1、HIST2H2BE、CCL5、NACA、SMC3、SRSF11、TPR、ZEB1、CCR2、HNRNPA0、OTUD1、PURA;一些涉及MS患者致病相关的通路如:白细胞介素(IL)-10信号、趋化因子和细胞因子信号通路介导的炎症、脂肪细胞因子信号通路、瘦蛋白信号、趋化因子信号通路;涉及及生物过程如:单核细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞趋化作用的正调节、趋化因子介导的信号通路、病毒转录、T细胞趋化作用的正调节;涉及的分子功能如:RNA结合、CCR1趋化因子受体结合、蛋白结合、CCR5趋化因子受体结合、多聚(A)RNA结合、热休克蛋白结合等.结论 关键致病基因可能通过多种信号途径引起MS,并参与其他一些自身免疫性、炎症性疾病的发病过程.