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1,4,5-三磷酸肌醇3激酶A调控脑胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮间质化
编辑人员丨1周前
目的:探讨1,4,5-三磷酸肌醇3激酶A(ITPKA)在脑胶质瘤细胞的表达和功能。方法:利用实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)比较SVGP12、U118和U87细胞系(购自中国科学院生物化学与细胞生物学研究所)ITPKA mRNA和蛋白表达水平。将U87细胞分为对照组、对照短发卡RNA(shRNA)组和sh-ITPKA组,噻唑蓝法检测转染细胞培养24、48、72、96 h后细胞活性,平板克隆和小室迁移(Transwell)法检测克隆形成能力与细胞迁移能力,Western blot检测ITPKA、波形蛋白、N-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析或双因素方差分析。结果:U118和U87细胞中ITPKA mRNA和蛋白表达水平明显高于SVGP12细胞(mRNA水平:2.81±0.40、3.92±0.19比1.06±0.06, F=94.48, P<0.01;蛋白水平:0.57±0.05、0.66±0.03比0.20±0.01, F=161.30, P<0.01)。培养24、48、72、96 h后,sh-ITPKA组细胞活性明显低于对照组和对照shRNA组(24 h:0.14±0.01比0.19±0.01、0.20±0.02, P<0.01;48 h:0.20±0.01比0.30±0.01、0.30±0.02, P<0.01;72 h:0.26±0.01比0.37±0.01、0.38±0.01, P<0.01;96 h:0.29±0.01比0.45±0.01、0.45±0.01, F交互=17.22, F时间=713.00, F分组=662.60, P<0.01)。sh-ITPKA组细胞细胞迁移数目低于对照组和对照shRNA组(25.40±2.51比41.20±4.66、42.00±5.24, F=23.69, P<0.01)。同时,sh-ITPKA组细胞克隆形成数目明显低于对照组和对照shRNA组(120.60±11.41比215.00±18.73、221.40±14.83, F=68.15, P<0.01)。sh-ITPKA组细胞ITPKA、波形蛋白、N-钙粘蛋白表达水平低于对照组和对照shRNA组,而E-钙粘蛋白表达则高于对照组和对照shRNA组(ITPKA:0.11±0.02比0.70±0.02、0.68±0.03, F=637.00, P<0.01;波形蛋白:1.06±0.07比1.65±0.07、1.60±0.08, F=58.31, P<0.01;N-钙粘蛋白:0.88±0.04比1.15±0.07、1.20±0.03, F=31.56, P<0.01;E-钙粘蛋白:0.85±0.03比0.46±0.04、0.43±0.04, F=116.80, P<0.01)。 结论:ITPKA在胶质瘤细胞中表达升高,敲低ITPKA表达则抑制胶质瘤细胞恶性行为。
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编辑人员丨1周前
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核转录因子Gli在恒河猴轮状病毒致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化中的调控作用
编辑人员丨1周前
目的:研究sonic hedgehog(Shh)信号通路核转录因子Gli1/Gli2在恒河猴轮状病毒(RRV)感染致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化(EMT)中的调控作用。方法:通过RRV构建胆道闭锁小鼠模型,根据RNA干扰技术对Shh信号通路关键转录因子Gli1/Gli2表达调控的不同,将实验小鼠分为正常组、模型组、Gli1过表达组、Gli1 shRNA组、Gli2过表达组、Gli2 shRNA组,应用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测实验小鼠肝脏组织中EMT关键调控因子Snail/Slug及EMT特征性细胞因子波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白的表达;对不同分组中的小鼠肝脏组织分别行苏木精-伊红染色和Masson染色观察记录肝纤维组织表达面积百分比。采用单因素方差分析和 LSD- t检验进行数据分析。 结果:Gli2过表达组、Gli2 shRNA组及模型组Snail、Slug、Vimentin、α-SMA、E-cadherin mRNA相对表达量分别为15.13±3.40、5.48±0.46、8.78±1.06、12.40±2.18和3.06±0.53;3.73±1.16、5.62±1.75、3.56±1.06、3.88±1.16和10.51±1.83;8.13±1.27、5.32±0.98、5.05±0.98、4.02±0.77和5.12±1.60。与模型组相比,Gli2过表达组Snail、Vimentin、α-SMA的mRNA表达明显升高,E-cadherin的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义( t=4.53、5.29、8.12、-2.13,均 P<0.05);与模型组相比,Gli2 shRNA组Snail、Vimentin的mRNA表达明显降低,E-cadherin的mRNA表达明显升高,差异均有统计学意义( t=-2.86、-2.12、5.62,均 P<0.05)。Gli2过表达组、Gli2 shRNA组及模型组Snail、Slug、Vimentin、α-SMA、E-cadherin蛋白灰度比值分别为2.02±0.39、0.31±0.08、0.95±0.17、1.07±0.17和0.42±0.06;0.53±0.13、0.40±0.18、0.20±0.04、0.28±0.07和1.09±0.31;0.70±0.15、0.42±0.22、0.64±0.13、0.81±0.11和0.42±0.09。与模型组相比,Gli2过表达组Snail、Vimentin、α-SMA蛋白灰度比值明显升高,差异均有统计学意义( t=12.71、4.28、3.70,均 P<0.05);与模型组相比,Gli2 shRNA组Vimentin、α-SMA表达明显降低,E-cadherin表达明显升高,差异均有统计学意义( t=-6.14、-7.57、5.96,均 P<0.05)。Gli1过表达组及Gli1 shRNA组小鼠肝脏组织未见明确EMT特征细胞因子表达变化趋势。正常组、模型组、Gli1过表达组、Gli1 shRNA组、Gli2过表达组、Gli2 shRNA组肝脏纤维组织表达面积百分比分别为(1.03±0.58)%、(33.02±11.39)%、(39.81±5.67)%、(26.06±1.29)%、(49.81±8.57)%和(17.55±0.66)%。Gli2过表达组及Gli2 shRNA组与模型组肝脏纤维组织表达面积百分比相比,差异均有统计学意义( t=3.21、-2.96,均 P<0.05);Gli1过表达组及Gli1 shRNA组与模型组肝脏纤维组织表达面积百分比相比,差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:Shh信号通路在胆道闭锁小鼠肝纤维化中起重要作用,Shh信号通路关键转录因子Gli2可显著调控胆道闭锁小鼠肝脏EMT过程。
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编辑人员丨1周前
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外泌体在肝细胞癌肿瘤微环境中作用的研究进展
编辑人员丨1周前
肝细胞癌肿瘤微环境的复杂性决定了其高度异质性和肿瘤的发生发展。外泌体是肝细胞癌肿瘤微环境中的重要组成之一,是一种富含蛋白质、核酸等物质的膜性囊泡,直径40~160 nm,能在细胞间进行信号传递。肝细胞癌来源的外泌体在肿瘤微环境中的信息调控作用对肝细胞癌的恶性生物学行为产生重大影响。近几年外泌体在肝细胞癌的检测、治疗、预后中作用的研究也逐渐深入。本文聚焦外泌体在肝细胞癌微环境生物进程中的作用,论述外泌体在肝细胞癌的血管生成、转移、上皮间质化、免疫调节以及诊治等方面的研究进展。
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编辑人员丨1周前
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上皮间充质化在2,3,7,8-四氯二苯二噁英致胎鼠腭突融合障碍中的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨上皮间充质化在2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致胎鼠腭突融合障碍中的作用。方法:将12只C57BL/6 J孕鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,每组各6只。妊娠第10.5天(GD10.5),实验组以28 μg/kg的TCDD(玉米油溶解)灌胃,对照组则按照等量玉米油灌胃。在GD15.5分别处死2组孕鼠,在显微镜下行胎鼠腭突的形态学观察。购买原代腭突中嵴上皮细胞进行培养,将其分为实验组和对照组,实验组细胞分为3个亚组,分别添加浓度为5、10、20 nmol/L的TCDD于培养基,对照组则使用不加TCDD的培养基。72 h后,通过免疫荧光染色、激光共聚焦检测荧光强度和蛋白质印迹法检测腭突中嵴上皮细胞标志物细胞角蛋白19(CK-19)和腭突间充质细胞标志物波形蛋白(vimentin)的表达。采用单因素方差分析法对各组数据进行比较。结果:实验组中共获得36只胎鼠,死胎和吸收胎3只,腭裂发生率为100%(33/33),其中完全腭裂为84.8%(28/33),部分腭裂发生率为15.2%(5/33);对照组中获得40只胎鼠,死胎和吸收胎共2只,腭裂发生率为0(0/38)。实验组和对照组腭突中嵴上皮细胞培养72 h后形态均发生变化,由均一的鹅卵石样变为有伪足的星形或不规则形;对照组和实验组中5、10、20 nmol/L 3个亚组的腭突中嵴上皮细胞标志物CK-19蛋白相对表达量分别为0.739±0.120、0.483±0.023、1.007±0.109、1.086±0.145,荧光强度分别为53.384±5.785、36.818±8.250、64.575±8.323、76.898±3.711;腭突间质细胞标志物vimentin蛋白相对表达量分别为0.527±0.112、0.781±0.095、0.284±0.046、0.216±0.040,荧光强度分别为63.672±6.135、82.632±4.474、52.608±7.525、42.664±7.659。低剂量实验组(5 nmol/L)与对照组相比,CK-19降低而vimentin升高;高剂量实验组(10、20 nmol/L)与对照组相比,CK-19升高而vimentin降低,差异有统计学意义( P<0.05),高剂量组间比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:腭突中嵴上皮细胞间充质化(EMT)可能是一自发程序,TCDD致腭突融合障碍可能与腭突中嵴上皮细胞EMT过程受抑制有关,且随着TCDD剂量增加,这种抑制作用保持稳定。
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编辑人员丨1周前
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miRNA-27a在胃癌中的研究进展
编辑人员丨1周前
miRNA-27a(miR-27a)是miR-23a-27a-24基因簇的一员,在胃癌中表达异常。miR-27a通过调控SFRP1、PHLPP2、BTG2、SOCS6、FOXO1等抑癌基因,在胃癌细胞的上皮间质化、增殖、微环境、化疗药物耐药性方面起重要作用。同时,miR-27a的单核苷酸多态性与胃癌也成为了近年的研究热点,更全面地探索miR-27a与胃癌的关系有望在胃癌治疗中提供新的方法和思路。文章就miR-27a在胃癌中的研究进展进行综述。
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编辑人员丨1周前
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雷帕霉素对增生性玻璃体视网膜病变的保护作用研究进展
编辑人员丨1周前
增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是眼外伤、孔源性视网膜脱离(RRD)等的并发症,也是造成RRD复位手术失败的常见原因。视网膜色素上皮(RPE)细胞异常增生、迁移和上皮间充质化在PVR相关的视网膜前增生膜的形成中起着主导作用。雷帕霉素是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的特异性抑制剂,选择性地结合细胞蛋白FKBP-12,和FKBP-雷帕霉素相关蛋白(FRAP)的FKBP12-雷帕霉素结构域(FRB)直接结合变构从而抑制mTOR活性。雷帕霉素具有多种衍生物和类似物,通过对mTOR信号转导途径的抑制发挥抑制细胞增生和调节细胞周期等作用,在PVR中对RPE细胞异常增生、迁移和上皮间充质化起到一定的抑制作用,对PVR中胶质细胞的修复、炎症细胞的抑制和血管内皮细胞的损伤也起到一定保护作用。近年来,雷帕霉素在多种眼病中的临床试验不断开展,对其在眼部给药方式的探索和用药安全性方面的证据逐渐全面。本文就雷帕霉素对PVR中RPE细胞及其他细胞的保护作用、用药安全性等方面作一综述。
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编辑人员丨1周前
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miR-195靶向SALL4对胃癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨miR-195对人胃癌细胞(HGC-27)迁移、侵袭及上皮间质化(EMT)的影响及其作用机理。方法:体外培养HGC-27细胞,采用随机数字表法分为对照组、miR-195阴性对照(NC)组和miR-195模拟物(mimics)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞miR-195及婆罗双树样基因4(SALL4)mRNA表达情况;显微镜下观察各组细胞形态学变化情况;蛋白印迹分析法检测各组HGC-27细胞SALL4蛋白及EMT相关蛋白上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、神经性钙粘蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达情况;噻唑蓝(MTT)法检测各组HGC-27细胞存活率变化情况;划痕实验和侵袭实验(Transwell)检测各组HGC-27细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-195与SALL4的靶向关系。结果:与对照组和miR-195 NC组相比,miR-195 mimics组HGC-27细胞miR-195表达水平[(0.97±0.05)vs(1.01±0.03)vs(2.68±0.07)]、细胞凋亡率[(0.21±0.03)% vs(0.17±0.05)vs(65.14±0.19)%]、E-cadherin蛋白表达水平[(0.23±0.02)vs(0.25±0.03)vs(0.97±0.04)]显著升高( P<0.05),细胞存活率[(98.46±1.27)% vs(97.17±2.04)% vs(57.09±2.95)%]、划痕愈合率[(51.07±2.08)% vs(48.39±3.24)% vs(7.56±2.30)%]、侵袭数量[(108.53±20.54)vs(115.07±26.66)vs(28.37±10.44)]、SALL4 mRNA及SALL4、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低( P<0.05),HGC-27细胞形态恢复正常,上皮间质化行为明显减轻;miR-195与SALL4 mRNA 3'UTR区有结合位点,与SALL4-3'UTR-WT+miR-195 NC组比较,SALL4-3'UTR-WT+miR-195 mimics组荧光素酶活性降低( P<0.05)。 结论:miR-195可能通过靶向抑制SALL4表达,抑制人胃癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质化行为。
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编辑人员丨1周前
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层流切应力通过上调自噬水平抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮祖细胞损伤作用
编辑人员丨2024/5/25
目的:分析层流切应力(LSS)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮祖细胞(EPCs)损伤的保护机制.方法:通过CCK8分析EPCs中ox-LDL和LSS的处理条件;Transwell和成管实验分析LSS对ox-LDL处理前后EPCs细胞迁移和成管能力的影响;Western检测LSS和ox-LDL处理对细胞自噬、内皮-间质转化标志物的影响;Western分析自噬激活和抑制剂对ox-LDL和LSS处理后自噬、内皮-间质转化标志物的影响.结果:ox-LDL处理后EPCs细胞的增殖能力,迁移能力和成管能力均下调,LSS处理后显著升高,LSS处理对ox-LDL诱导的EPCs细胞损伤有保护作用.分子机制方面,LSS处理后EPCs细胞自噬水平升高.ox-LDL处理后EPCs细胞发生显著的内皮间质化转变,LSS处理可明显抑制这一过程.自噬激活剂和抑制剂验证了这些结果.结论:LSS可通过上调自噬水平抑制ox-LDL诱导的EPCs内皮间质化,对EPCs细胞起保护作用.
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编辑人员丨2024/5/25
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TNF-α通过CXCL10/CXCR3信号通路促进结肠癌细胞上皮间质化的相关分子机制
编辑人员丨2024/5/11
目的 探讨TNF-α通过调控结肠癌SW480细胞CXCL10/CXCR3轴的表达影响上皮间质化(EMT)及其分子机制.方法 培养人结肠癌SW480细胞,分别通过TNF-α、siRNA-CXCR3处理细胞,将细胞分为对照组(NC组)、TNF-α刺激组(TNF-α组)及TNF-α刺激+siRNA-CXCR3沉默组(TNF-α+si-CX-CR3组).通过Real-time PCR检测各组细胞CXCL10、CXCR3及上皮间质化相关基因的mRNA表达量;Western Blot检测各组细胞CXCL10/CXCR3通路蛋白及上皮间质化相关蛋白表达量的影响;免疫组化检测细胞中上EMT上皮标志物上皮细胞钙粘蛋白(E-cad)与EMT间质标志物波形蛋白(Vimentin)的变化情况;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 TNF-ɑ组细胞中通路基因CXCL10、CXCR3的mRNA水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞中CXCR3水平低于TNF-α组,差异有统计学意义(P<0.05);TNF-ɑ组细胞中CXCL10、CXCR3、Vimentin与Fibronectin的蛋白表达量高于NC组,E-cad的蛋白表达量低于NC组,差异有统计学意义;TNF-α+si-CXCR3组细胞CXCR3、Vimentin与Fibronectin的蛋白表达量低于TNF-ɑ组,E-cad的蛋白水平高于TNF-ɑ组;TNF-ɑ组中Vimentin的表达量高于NC组,E-cad的表达量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组中Vimentin的表达量低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05),E-cad的表达量高于TNF-ɑ组;TNF-ɑ组迁移能力高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞迁移能力低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05).TNF-ɑ组细胞的侵袭能力高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞侵袭能力低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TNF-α能够诱导结肠癌SW480细胞发生上皮间质化,并促进其迁移、侵袭水平,这一过程可能与激活CXCL10/CXCR3信号通路有关.
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编辑人员丨2024/5/11
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夏枯草抑制人胃癌细胞上皮间质化的机制
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨夏枯草对胃癌细胞上皮间质化(epithelial mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用及其可能的作用机制.方法 选取人胃癌细胞株HGC-27,将细胞随机分为对照组及夏枯草低、中、高剂量组(20、40、80μg·mL-1夏枯草提取物).用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y 1)-3,5-di-phenytetrazolium bromide,MTT]法检测细胞增殖抑制率;划痕实验检测细胞迁移率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测miR-155、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和β连环蛋白(β-catenin)mRNA表达情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测 GSK-3β、β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和锌指蛋白(Snail)表达情况.结果 与对照组比较,夏枯草3组胃癌细胞增殖抑制率、GSK-3βmRNA、GSK-3β和E-cadherin蛋白表达水平升高,细胞迁移率、细胞侵袭数量、miR-155、β-catenin mRNA水平、β-catenin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达水平降低(P<0.05).与夏枯草低剂量组比较,夏枯草中剂量组、夏枯草高剂量组胃癌细胞增殖抑制率、GSK-3βmRNA、GSK-3β和E-cadherin蛋白的表达水平升高,细胞迁移率、细胞侵袭数量、miR-155、β-catenin mRNA水平、β-catenin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达水平降低(P<0.05),夏枯草高剂量组诸项指数变化尤其明显(P<0.05).结论 夏枯草对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭有一定的抑制作用,并能有效阻断胃癌细胞发生EMT,可能是通过降低miRNA-155表达水平、抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用.
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编辑人员丨2024/4/27
