目的 研究火把花根片(CRT)对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)上皮-间充质转化(EMT)的影响并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养HK-2,将HK-2分为以下5组:对照组(CON组)、高渗组(MA组)、高糖组(HG组)、高糖+火把花根片组(HG+CRT组)、高糖+PI3K抑制剂组(HG+LY29400组)、高糖+火把花根片+PI3K抑制剂组(HG+CRT+LY29400组).采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)mRNA表达水平;采用Western blot检测各组PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、E-cadherin、α-SMA的蛋白表达水平.结果 与CON组比较,HG组细胞α-SMA的蛋白及mRNA表达水平、p-Akt的蛋白表达水平、p-Akt/Akt比值升高,E-cadherin、PTEN的蛋白及mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与HG组比较,HG+CRT组细胞中α-SMA的蛋白及mRNA表达水平降低,E-cadherin的蛋白及mRNA表达水平相对增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与HG组比较,HG+LY29400组PI3K、p-Akt、α-SMA蛋白表达水平和p-Akt/Akt比值降低,PTEN的蛋白及mRNA表达水平、E-cadherin的蛋白表达水平升高,差异有统计 学意义(P＜0.05).与HG+CRT组比较,HG+CRT+LY29400组E-cadherin、α-SMA、PTEN、PI3K、Akt的蛋白表达水平及p-Akt/Akt比值差异均无统计学意义(P＞0.05),而p-Akt蛋白表达升高(P＜0.05).结论 在体外,CRT可以通过PTEN/PI3K/Akt信号通路逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞 EMT.

目的 探讨慢性间歇低氧(CIH)和复氧对大鼠胰岛素抵抗(IR)及骨骼肌miR-27a-3p/PPARγ/IRS1/PI3K/AKT表达的影响.方法 从基因表达数据库(GEO)中下载CIH条件下miRNA数据集,运用DESeq2筛选差异表达最显著的miRNA作为研究对象,使用miRNA walk网站对差异miRNA的靶基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并Cytoscape软件构建miRNA-mRNA-pathway调控网络.将48只雄性SD大鼠随机分为对照(CON)组和CIH组,24只/组,CON组常氧环境饲养12周,CIH组先予CIH环境饲养8周,再恢复常氧饲养4周.两组均在基线、8周、12周时留取血样和骨骼肌组织,检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,HE染色观察骨骼肌病理改变并计算肌纤维横截面积,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting法检测骨骼肌miR-27a-3p、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体1(IRS1)、p-IRS1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸激酶B(AKT)、p-AKT表达,比较组间差异.结果 生信分析发现,GEO数据库未筛选出CIH状态下肌肉组织相关的miRNA数据集,仅得到肾脏组织差异表达miRNA的GSE202480数据集,从CON组和CIH组样本中筛选出165个差异表达的miRNA,选最显著miR-27a-3p作为研究对象.GO和KEGG分析显示,差异miRNA的靶基因主要参与肌肉调节和胰岛素信号传导.miRNA-mRNA-pathway调控网络显示miR-27a-3p是PPAR信号通路和PI3K/AKT信号通路的关键调控因子.动物实验发现,基线时,两组各项观察指标均无统计学意义(P>0.05);8周时,与CON组相比,CIH组FBG、FINS、HOMA-IR、PPARγ显著升高(P<0.05或P<0.01),肌纤维排列疏松,肌纤维横截面积、miR-27a-3p、p-IRS1/IRS1、PI3K、p-AKT/AKT显著降低(P<0.05或P<0.01),GLUT4表达呈升高趋势但无统计学意义(P>0.05);12周时,两组各项观察指标均无统计学意义(P>0.05).结论 CIH可导致大鼠IR增加和骨骼肌病理改变,而复氧可以逆转;CIH可致骨骼肌miR-27a-3p表达下调,PPARγ表达上调,IRS1/PI3K/AKT胰岛素信号转导受到抑制,而复氧干预可以逆转;miR-27a-3p可能通过调控PPARγ/IRS1/PI3K/AKT信号通路参与了CIH所致的IR.

目的 研究帕纳替尼对胆管癌(CCA)的影响及分子作用机制.方法 将QBC939细胞分为对照组(不做任何处理)、低剂量组(0.1 μmol·L-1帕纳替尼处理)、中剂量组(0.5 μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量组(1.0 μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量+microRNA-92b-3组(1.0 μmol·L-1帕纳替尼处理后转染miR-92b-3p mimic)、高剂量+miR-92b-3p mimic+过表达同源结构域相互作用蛋白激酶3质粒(oe-HIPK3)组(1.0 μmol·L-1帕纳替尼处理后转染miR-92b-3p mimic 和 oe-HIPK3)、mimic-NC 组(转染 miR-92b-3p NC)、miR-92b-3p mimic组(转染miR-92b-3p mimic).用细胞计数试剂盒8检测细胞的增殖情况,用Transwell实验法检测细胞迁移,用蛋白质印迹法检测蛋白相对表达水平.结果 对照组、高剂量组、高剂量+miR-92b-3p mimic组、高剂量+miR-92b-3p mimic+oe-HIPK3组的细胞增殖率分别为(76.58±8.56)％、(61.85±7.77)％、(74.54±7.68)％和(58.63±6.87)％,细胞迁移数量分别为(185.32±20.14)、(132.33±18.99)、(168.23±19.85)和(138.66±15.95)个,磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)/PI3K比值分别为1.00±0.23、0.68±0.09、0.91±0.18 和 0.60±0.08,磷酸化蛋白激酶 B(p-AKT)/AKT 比值分别为 1.00±0.25、0.61±0.08、1.12±0.28 和0.72±0.14;高剂量组的上述指标与对照组比较,高剂量+miR-92b-3p mimic组的上述指标与高剂量组比较,高剂量+miR-92b-3p mimic+oe-HIPK3组的上述指标与高剂量+miR-92b-3p mimic组比较,在统计学上差异均有统计学差异(均P＜0.05).结论 帕纳替尼能有效抑制胆管癌的恶性生物学行为,可能与抑制miR-92b-3p水平,促进HIPK3介导的PI3K/AKT信号通路有关.

目的 探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对高糖(high glucose,HG)诱导人血小板凋亡的保护作用及机制.方法 将不同浓度(5、10、20 μmol/L)的SFN或溶剂对照(0.05%DMSO)与健康人纯化血小板在体外共同孵育40 min,然后加入normal glucose(NG,5 mmol/L)或HG(25 mmol/L)的葡萄糖溶液干预血小板90 min,用流式细胞术检测血小板线粒体膜电位(ΔΨm)去极化、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)暴露和胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平,用蛋白免疫印迹法检测PI3K、Akt蛋白磷酸化水平.结果 与NG组相比,HG可显著增加血小板ΔΨm去极化和PS暴露水平(P＜0.001),且可被不同浓度的SFN显著抑制(P＜0.001).机制上,与溶剂对照组相比,SFN显著下调HG诱导的血小板PI3K(P＜0.01)和Akt(P＜0.05)蛋白的磷酸化水平,显著降低HG诱导的胞内总ROS生成水平(P＜0.001);PI3K的特异性激动剂740 Y-P可完全逆转SFN对HG诱导的PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用,部分逆转SFN对总ROS生成、ΔΨm去极化和PS暴露的抑制作用.结论 SFN在体外具有保护HG诱导健康人血小板凋亡的作用,其作用机制可能是下调PI3K/Akt介导的信号通路.

目的:探讨热疗调控TPX2表达诱导胆管癌细胞的凋亡机制。方法:在不同温度（37 ℃、40 ℃、43 ℃和46 ℃）下处理后，检测胆管癌细胞RBE的凋亡水平和细胞活力。热疗处理后，转录组高通量测序和siRNA筛选鉴定热疗调控胆管癌细胞RBE凋亡的关键分子。结果:随着温度升高（37 ℃、40 ℃、43 ℃和46 ℃），胆管癌细胞的活力降低（ P<0.05），坏死的胆管癌细胞随着温度的升高而增加（ P<0.05），细胞凋亡水平在43 ℃时达到峰值（6%±1%， P<0.05）。当敲低TPX2时，胆管癌细胞的凋亡水平上升（47%±3%比74%±3%， P<0.05）。过表达TPX2时，胆管癌细胞的凋亡水平下降（45%±3%比21%±4%， P<0.05）。热疗显著降低了TPX2、PI3K、p-PI3K和P-AKT的表达水平（ P<0.05），并增加了p21的表达和caspase3的切割（ P<0.05）；敲低TPX2后，PI3K、p-PI3K和p-AKT的表达水平显著下降（ P<0.05），p21的表达水平显著上升（ P<0.05）；过表达TPX2后，PI3K和p-AKT的表达水平显著上升（ P<0.05），p21的表达水平显著下降（ P<0.05）。 结论:热疗通过影响TPX2的表达，抑制了PI3K/AKT通路活性，减少了胆管癌细胞的细胞活力，促进了胆管癌细胞的凋亡。

目的:探讨DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测2012年4月至2013年3月河南省人民医院59例宫颈癌组织及癌旁非肿瘤组织标本中的DDX3表达情况。同时，以宫颈癌细胞HeLa为研究对象，通过慢病毒介导的宫颈癌细胞过度表达来检测DDX3的功能。采用细胞增殖与活性检测试剂盒评估细胞存活率，Boyden室进行迁移和侵袭测定，即时荧光定量聚合酶链反应检测DDX3 mRNA表达水平，Western blot检测细胞中上皮间质转化（EMT）和PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果:DDX3过表达与国际妇产科联盟（FIGO）分期、宫颈浸润深度和淋巴结转移呈正相关（ P<0.05）。Kaplan-Meier分析显示，DDX3高表达的宫颈癌患者具有较差的总体生存率（ P<0.05）。与慢病毒载体对照（pLVX-Con）组相比，在shRNA-DDX3慢病毒（pLVX-DDX3）转染组中检测到DDX3的蛋白表达和mRNA表达均明显增加（均 P<0.01）。在pLVX-DDX3转染第72小时的HeLa细胞存活数目显著高于pLVX-Con转染细胞（ P<0.05）。与pLVX-Con转染的细胞相比，DDX3过表达显著促进了HeLa细胞的迁移和侵袭（ P<0.05），并且显著上调了HeLa细胞的N-Cadherin、波形蛋白和Snail的表达（ P<0.05）。在pLVX-DDX3组中，Akt及其下游靶基因p-GSK3β的磷酸化水平和β-catenin表达较pLVX-Con组显著升高（ P<0.05），而当向pLVX-DDX3组加入PI3K抑制剂LY294002后，p-Akt、p-GSK3β和β-catenin明显降低（ P<0.05），并且N-Cadherin、波形蛋白和Snail的水平表达下调（ P<0.05）。 结论:DDX3过表达促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并能诱导EMT，其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

目的:探讨CXC趋化因子配体11(CXCL11)/CXC趋化因子受体3(CXCR3)生物轴对胆囊癌细胞侵袭迁移的调控作用及其机制。方法:将胆囊癌细胞株GBC-SD与外源性CXCL11共培养处理后，蛋白质印迹法(Western blot)检测局部黏着斑激酶(FAK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)的表达及磷酸化水平，Transwell实验检测细胞的侵袭迁移能力。采用RNA干扰技术沉默CXCR3基因表达，观察其对CXCL11介导FAK/PI3K/Akt信号通路活化的影响。评估CXCR3基因敲减、FAK抑制剂PF573228对CXCL11诱导胆囊癌细胞侵袭迁移的影响。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:Western blot实验结果表明，CXCL11共培养组磷酸化FAK(p-FAK)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)的相对表达量(0.849±0.082、0.824±0.084、0.865±0.081)均显著高于空白对照组(0.186±0.034、0.195±0.038、0.191±0.033)，差异有统计学意义( t＝12.917、11.821、13.286， P<0.05)；CXCR3敲减+CXCL11共培养组p-FAK、p-PI3K、p-Akt的相对表达量(0.215±0.048、0.223±0.057、0.217±0.052)均显著低于CXCL11共培养组(0.849±0.082、0.824±0.084、0.865±0.081)，差异有统计学意义( t＝11.578、10.234、11.605， P<0.05)。Transwell实验结果显示，CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著高于空白对照组[(168.2±18.4)个比(70.8±9.1)个， t＝10.635， P<0.05]；CXCR3敲减+CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著低于CXCL11共培养组[(79.6±10.1)个比(168.2±18.4)个， t＝9.445， P<0.05]；PF573228预处理+CXCL11共培养组细胞的侵袭迁移能力显著低于CXCL11共培养组[(86.4±11.8)个比(168.2±18.4)个， t＝8.375， P<0.05]。 结论:CXCL11/CXCR3生物轴通过激活FAK/PI3K/Akt信号通路促进胆囊癌细胞的侵袭迁移能力。

目的:探究人类抗原R(HuR)对乳腺癌功能表型的影响及其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控方式。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库了解HuR在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达，选取与HuR显著相关的基因进行基因本体(GO)分析及基因富集分析(GSEA)。以MCF-7和SK-BR-3细胞作为研究对象，通过瞬时转染小干扰RNA(siRNA)沉默HuR基因，利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HuR的表达。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕、Transwell实验检测两种乳腺癌细胞系的增殖、迁移、侵袭。通过蛋白质印记法(Western blot)检测PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。组间差异采用秩和检验、方差分析和 t检验。 结果:HuR在肿瘤组织中的表达高于癌旁组织(3.429±0.300比3.913±0.370， Z＝－15.216， P<0.01)，GO和GSEA结果显示HuR相关基因主要富集于通过死亡结构域受体对外部凋亡信号传导途径的负调节、血液微粒、细胞外基质结构组分、S期激酶相关蛋白2(SKP2)和E2F信号通路及脂肪酸氧化。HuR在两株乳腺癌细胞系中沉默后，CCK-8结果显示在不同时间点，沉默HuR组细胞的增殖能力显著低于对照组(0.148±0.001比0.151±0.001比0.160±0.002比0.159±0.003，0.163±0.002比0.163±0.002比0.172±0.001比0.172±0.000，0.214±0.002比0.215±0.001比0.238±0.003比0.236±0.002；0.146±0.002比0.146±0.003比0.155±0.002比0.154±0.001，0.156±0.001比0.158±0.002比0.172±0.002比0.172±0.001，0.193±0.002比0.197±0.001比0.229±0.007比0.229±0.006， F＝29.811、45.663、105.662、16.735、65.344、53.219， P<0.01)。划痕实验结果显示，实验组在24 h细胞迁移的能力显著低于空白对照组(0.038±0.020比0.067±0.025比0.223±0.047比0.167±0.035，0.082±0.040比0.140±0.027比0.318±0.023比0.254±0.041， F＝20.045、30.130， P<0.01)。Transwell实验显示，实验组通过小室的MCF-7和SK-BR-3细胞数量显著低于对照组(971.000±154.049、873.333±186.100比1 939.333±11.547，1 301.333±81.132、1 152.000±109.421比2 278.000±244.461， t＝7.328、8.067、8.190、9.442， P<0.01)。Western blot实验结果表明在两株细胞中，实验组的PI3K、Akt及mTOR的磷酸化水平均显著低于阴性对照组(0.560±0.015、0.738±0.011比0.968±0.030，0.866±0.003、0.788±0.030比0.970±0.021，0.843±0.009、0.832±0.014比1.003±0.009；0.862±0.011、0.855±0.020比0.981±0.020，0.754±0.083、0.821±0.024比0.939±0.083，0.708±0.038、0.687±0.027比0.936±0.049， t＝30.666、18.216、9.036、14.279、20.708、22.206、10.934、11.440、5.026、3.665、10.549、11.288， P<0.01、0.05)。 结论:HuR可提高乳腺癌的增殖、迁移及侵袭能力，并且可通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路来促进乳腺癌增殖。

目的:研究微小RNA-16-5p（miR-16-5p）对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质印迹法（Western blotting法）检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞MG63、Saos2、HOS内miR-16-5p、四分子交联体15（TSPAN15）mRNA和蛋白表达。在MG63细胞中转染miR-16-5p或si-TSPAN15，观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖，Transwell法检测细胞迁移和侵袭，Western blotting法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、TSPAN15、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达。Starbase网站预测结合双荧光素酶基因报告实验分析miR-16-5p与TSPAN15的靶向关系。将miR-16-5p和pcDNA-TSPAN1共转染，评估高表达TSPAN15对过表达miR-16-5p诱导的MG63细胞增殖、迁移和侵袭的影响。两组间数据的比较采用 t检验。 结果:与hFOB 1.19细胞（1.00±0.12）相比，MG63、Saos2、HOS细胞中miR-16-5p表达量（分别为0.32±0.05、0.40±0.04、0.45±0.06）明显降低（ F=156.204， P<0.05），TSPAN15 mRNA和蛋白水平显著提高（ F=71.718、110.350，均 P<0.05）。过表达miR-16-5p明显减少MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量及细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量（ F=150.136、117.228、154.971、89.479、98.373、130.880，均 P<0.05）。敲减TSPAN15明显降低MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量（ F=93.206、107.030、109.326、115.625、146.113、139.300，均 P<0.05）。过表达miR-16-5p显著降低MG63细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白表达量（ F=156.755、181.419，均 P<0.05）。miR-16-5p靶向调控TSPAN15的表达。高表达TSPAN15可部分逆转miR-16-5p对MG63细胞内TSPAN15、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-AKT蛋白表达、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量的抑制作用。 结论:miR-16-5p通过靶向TSPAN15基因并调控PI3K/AKT信号通路，从而抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

中药通过干预人肺腺癌A549细胞发挥抗肿瘤作用，主要包括通过影响PI3K/Akt等通路激活或抑制下游靶蛋白Bcl-2、Bax或形成RIP1/RIP3/MLKL复合小体，从而诱导肺腺癌A549细胞凋亡；使细胞生长期阻滞，从而抑制肺腺癌A549细胞增殖；通过影响MMPs通路、STAT3通路和调控上皮间充质转化相关因子，从而抑制A549细胞侵袭和转移；抑制或激活相关蛋白表达或影响相关信号通路，从而逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂和紫杉醇的耐药性。