Ras相关区域家族1A（RASSF1A）基因为RASSF家族成员，其以三磷酸鸟苷依赖性方式结合Ras继而诱导由Ras介导的凋亡。RASSF1A基因编码的蛋白类似于Ras效应蛋白，可与DNA修复蛋白XPA相互作用，还可抑制细胞周期蛋白D1的积累，从而诱导细胞周期停滞。RASSF1A基因缺失或表达异常与多种恶性肿瘤的发病机理有关，表明其具有肿瘤抑制功能。已在至少37种肿瘤中发现了RASSF1A基因甲基化，RASSF1A基因可能是目前人类癌症中描述最频繁的甲基化基因。介绍了RASSF1A基因在不同恶性肿瘤中的异常甲基化，并综述了近年来其在呼吸系统、消化系统、生殖泌尿系统、神经系统恶性肿瘤中的相关作用及机制的研究进展，以期为恶性肿瘤的早期诊断、个体分子靶向治疗及预后评估提供重要的指导依据。

目的:探讨粪便DNA甲基化标志物检测用于胃癌筛查的可行性以及与胃癌患者临床特征的关系。方法:前瞻性收集2018年8月至2019年12月在苏州大学附属第一医院普通外科及消化内科就诊的胃癌患者及胃镜检查阴性者的粪便样本共156份，同时收集胃癌患者术前及术后的临床资料。按照1∶2的比例将这些样本随机分成训练集（ n=52）和测试集（ n=104）。提取粪便中的DNA，然后检测Syndecan-2黏结蛋白聚糖2基因（SDC2）、分泌性卷曲蛋白2基因（SFRP2）、Ras相关区域家族2基因（RASSF2）、端粒酶逆转录酶基因（TERT）甲基化水平，同时用免疫胶体金法检测粪便中血红蛋白（Hb）含量。使用单项粪便DNA标志物的Ct（Cycle threshold荧光信号到达设定阈值时所经历的循环次数）值建立logistic 回归模型，分析单个标志物检测胃癌的灵敏度和特异度；基于Akaike信息准则（AIC），使用多因素逻辑回归及逐步回归分析筛选最优的标志物组合，并在测试集中评价胃癌早期筛查标志物组合筛查/检测胃癌的效果。 结果:各标志物区分胃癌和阴性对照的准确度排序为：SDC2甲基化（71.2%）>TERT甲基化（67.3%）=RASSF2甲基化（67.3%）>Hb（63.5%）>SFRP2甲基化（61.5%）。通过逐步回归分析，在训练集中筛选出一个由SDC2甲基化、TERT 甲基化和Hb组成的粪便生物标志物组合，在训练集及测试集中检测胃癌的总灵敏度为 66.7%，总特异度为 78.9%。在不同分期以及不同部位胃癌样本中，该标志物组合对Ⅰ期胃癌及胃体部胃癌的灵敏度（分别为78.6%、75.0%）最高。结论:粪便中SDC2、SFRP2、TERT、RASSF2基因甲基化标志物在胃癌筛查中具有一定的灵敏度和较高的特异度，是胃癌早期筛查中的潜在粪便生物标志物。

目的 分析阿帕替尼靶向治疗联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗晚期原发性肝癌患者疗效及对外周血Ras相关区域家族1 A(RASSF1A)基因甲基化的影响.方法 64例晚期肝细胞癌(HCC)患者分为单一组(n=32)与联合组(n=32),单一组行TACE治疗,联合组行阿帕替尼靶向治疗联合TACE治疗,两组患者均行标准疗程TACE治疗,于治疗1个月(1 mo)及3个月(3 mo)评估临床疗效,比较治疗前后肝功能[白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、血清标志物[甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)]、外周血RASSF1A基因甲基化、不良反应及TACE抵抗发生率.结果 单一组治疗3 mo时的客观缓解率(ORR)较治疗1 mo时下降(P＜0.05),且低于联合组(P＜0.05);两组患者治疗3 mo时的ALT、AST均较治疗前下降(P＜0.05),且联合组低于单一组(P＜0.05),两组患者治疗3 mo时的AFP均较治疗前显著降低(P＜0.05);联合组治疗3 mo时的VEGF较治疗前降低(P＜0.05)、Caspase-8较治疗前升高(P＜0.05),联合组治疗3 mo时AFP、VEGF低于单一组(P＜0.05),Caspase-8高于单一组(P＜0.05);联合组治疗3 mo时RASSF1A基因甲基化阳性率明显低于治疗前(P＜0.05),而单一组组内比较差异无统计学意义(P＞0.05);联合组手足综合征、高血压发生率高于单一组(P＜0.05),TA-CE抵抗发生率略低于单一组、但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期HCC效果及安全性良好,且对减少RASSF1A基因甲基化有利.

目的 基于Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路探讨茯苓酸(PA)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾功能、纤维化的影响及潜在机制.方法 以雄性SD大鼠为对象,以5/6肾切除术建立CRF大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组,PA低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg PA)和PA高剂量+ROCK通路激活剂溶血磷脂酸(LPA)组(20 mg/kg PA+1 mg/kg LPA),每组15只;另取15只大鼠仅切口暴露肾脏但不切除,作为假手术组.各药物组大鼠灌胃和/或尾静脉注射相应药液,每天1次,连续12周.实验期间,观察各组大鼠一般情况;末次给药后,检测各组大鼠的血清肾功能指标(血尿素氮、血清肌酐、尿酸)水平,观察其肾组织病理学改变,并进行肾小管损伤评分和肾纤维化区域面积量化,检测其肾组织中氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]、炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6)水平,结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)阳性表达率,以及通路相关蛋白(RhoA、ROCK1)、纤维化相关蛋白(转化生长因子β1、裸角质层同源物2、α-平滑肌肌动蛋白)表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠饮食减少,体型瘦小,精神萎靡且反应迟钝,肾小球减少、萎缩,肾小管扩张且结构杂乱,间质可见大量炎症细胞浸润;其血清肾功能指标水平,肾小管损伤评分、肾纤维化面积占比、肾组织MDA和炎症因子水平、CTGF和collagen Ⅰ阳性表达率、通路相关蛋白和纤维化相关蛋白的表达水平均显著升高,SOD水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,PA各剂量组大鼠的一般情况和肾组织病理损伤均有不同程度好转,上述各定量指标均显著改善,且呈剂量依赖性(P＜0.05).LPA可显著逆转PA对上述指标的改善作用(P＜0.05).结论 PA能改善CRF大鼠肾功能并减轻肾组织纤维化,上述作用可能与抑制RhoA/ROCK信号通路的激活有关.

目的 探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值.方法 选取2021年1月～2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组.2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性.结果 低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67％、准确度97.78％均高于三者单一诊断效能(P＜0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P＜0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P＜0.05).结论 低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后.

目的 探讨肺泡灌洗液(BALF)中矮小同源盒基因2(SHOX2)和RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化联合癌胚抗原(CEA)、气道径向超声在肺癌诊断的价值.方法 选取2019 年7 月至2020 年6 月于佛山市第二人民医院就诊经胸部CT提示肺结节或占位患者114 例,根据病理诊断确认肺癌62 例(肺癌组),肺良性病变52 例(对照组).在气道径向超声定位后收集患者BALF样本、外周静脉血,对BALF样本进行细胞学检查及实时荧光PCR法检测SHOX2 和RASSF1A基因甲基化阳性率,对外周静脉血血清 CEA 水平进行检测.结果 肺癌组 SHOX2、RASSF1A 基因任一甲基化阳性 40 例(64.52%),阴性22 例,对照组任一甲基化阳性2 例(3.85%),阴性50 例,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤直径与肺泡灌洗液甲基化阳性率呈负相关(P<0.05);23 例肺癌患者肺泡灌洗液CEA水平异常20 例(86.96%),CEA联合任一甲基化阳性22例(95.65%);17 例对照组CEA小于5 ng/ml的12 例(70.59%),CEA联合基因甲基化双阴性的 11 例(64.71%);49 例肺癌患者气道径向超声可探及明显回音图像,其中任一基因甲基化阳性 34 例(71.4%),无探及回音图像有 13 例,其中基因甲基化阴性8 例(38.4%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 肺癌组患者经气道径向超声定位后获取的肺泡灌洗液甲基化阳性率更高.肺泡灌洗液SHOX2 和RASSF1A基因甲基化联合癌胚抗原、气道径向超声有助于肺癌的早期诊断.

小窝蛋白是膜结合的脚手架蛋白家族成员之一,能够负性调控小窝区域内的信号转导.在人类肿瘤发病过程中伴随间质小窝蛋白-1(Cav-1)表达缺失,肿瘤相关成纤维细胞(CAF)中Cav-1表达缺失能够激活肿瘤微环境,促进前列腺癌、乳腺癌的早期复发、转移,肿瘤间质Cav-1表达缺失与临床不良预后相关.间质中Cav-1表达缺失促肿瘤进展的机制可能与Cav-1表达减少后其负性调控的多种致癌基因(如c-Myc、v-Src、H-Ras等)和转化生长因子-β(TGF-β)信号通路激活有关,进而促进成纤维细胞向CAF转化、细胞外基质重塑和间质纤维化,促进肿瘤演进.

目的 观察上调微小RNA-148a(miR-148a)表达对胰腺癌AsPC-1细胞抑癌基因前脑啡肽原(ppENK)、p16和Ras相关区域家族1A基因(RASSFlA)甲基化、蛋白表达及细胞增殖的影响.方法 利用LipofectamineTM2000转染miR-148a模拟物(miR-148a mimics)至胰腺癌AsPC-1细胞.实验细胞分为3组:空白对照组(转染脂质体)、阴性对照组(转染阴性对照序列)、实验组(转染miR-148a mimics).转染后72 h,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中miR-148a表达水平;甲基化特异性聚合酶链反应(MsP)检测ppENK、p16和RASSF1A基因启动子甲基化;Western blot法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)及ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞体外增殖活力.结果 实验组miR-148a的表达量显著高于空白对照组及阴性对照组(4.63±1.32比1.00±0.30比0.93±0.37,P=0.002),而DNMT1蛋白表达量则显著降低(1.00±0.00比1.04±0.19比0.27±0.15,P=0.001).空白对照组和阴性对照组ppENK、p16和RASSF1A基因甲基化阳性,而实验组ppENK和p16基因甲基化阴性,RASSF1A基因部分甲基化.实验组ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达量均显著高于两个对照组(ppENK:2.06±0.32比1.00±0.00比1.叭±0.21,P=0.002;p16:2.02±0.12比1.00±0.00比0.96±0.12,P=0.000;RASSF1A:1.95±0.37比1.00±0.00比1.09±0.12,P=0.002).实验组细胞体外增殖活力显著减慢(P=0.026).结论 上调胰腺癌AsPC-1细胞miR-148a的表达后,抑癌基因ppENK、p16和RASSF1A发生去甲基化,蛋白质重新表达,并抑制癌细胞增殖,其作用机制与miR-148a靶向抑制DNMT1表达有关.

目的 分析肿瘤抑制基因Ras相关区域家族1A(RASSF1A)表达对鼻咽癌顺铂耐药的影响以及调控的分子机制.方法 首先利用免疫印迹法检测RASSF1A蛋白表达;利用慢病毒转染法在低表达RASSF1A的S18细胞中过表达RASSF1A,观察转染细胞在不同顺铂浓度处理下细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,最后通过免疫印迹法检测JNK通路核心激酶磷酸化水平.结果 相对于顺铂敏感的S26细胞,耐受顺铂的S18细胞RASSF1A蛋白表达水平低.与对照组细胞相比,在S18细胞中过表达 RASSF1A明显降低细胞在顺铂处理后的存活率[2 μmol/L 顺铂,(77.2 ± 6.1)% vs.(89.9 ± 3.2)%,P=0.03;4 μmol/L顺铂,(60.3 ± 3.2)% vs.(80.2 ± 6.7)%,P=0.02].过表达RASSF1A的S18细胞凋亡显著增加[(32.4 ± 7.2)% vs.(17.8 ± 4.9)%,P=0.04].机制分析证明过表达RASSF1A在鼻咽癌细胞中增加JNK磷酸化水平.结论 过表达RASSF1A逆转鼻咽癌细胞S18对顺铂的抵抗,机制研究提示RASSF1A通过激活JNK/SAPK通路增加顺铂诱导的细胞凋亡,抑制细胞存活.

为探讨分析局部晚期乳腺癌行新辅助化疗TAC 方案的临床效果以及血清Ras 相关区域家族1A基因(RASSF1A)和Wnt 抑制因子(WIF)-1 基因甲基化程度对预测临床结局的价值,本研究通过连续选择 126 例患者接受TAC 方案(多西他赛, 吡柔比星和环磷酰胺),进行至少4 个周期,记录总有效率;采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测外周血RASSF1A 和WIF-1 甲基化阳性率.126 例患者总有效率79.37％(100/126).有效组血清RASSF1A 和WIF-1 甲基化阳性率明显低于无效组,差异有统计学意义(p＜0.05).血清RASSF1A甲基化阳性率预测临床结局的敏感性为85.0％,特异性50.0％,阳性预测值76.2％和阴性预测值23.8％;血清 WIF-1 分别为94.0％、75.0％、81.0％和19.0％.由此证明,检测局部晚期乳腺癌患者血清RASSF1A 和 WIF-1 基因甲基化程度对预测新辅助化疗TAC 方案的临床效果有重要应用价值,值得临床推广使用.