目的 联合矮小同源盒基因2(Short stature homeobox gene 2,SHOX2)、RAS相关结构域家族 1 亚型 A(RAS association domain family 1,isoform A,RASSF1A)及癌胚抗原(Carci-noembryonic antigen,CEA)构建预测肺癌发生的列线图模型,并确定该模型的预测价值.方法 选择2020年1月至2022年12月在新疆医科大学第一附属医院就诊的88例肺癌患者及肺良性肿瘤患者219名.比较两组患者的人口统计学和临床特征信息以及支气管肺泡灌洗液(Bron-choalveolar lavage fluid,BALF)中SHOX2和RASSF1A基因的甲基化水平.进行单因素分析及多因素Logistic回归分析筛选出影响肺癌发生的变量构建列线图,并评估其预测效能.结果 肺癌患者中SHOX2阳性36例(41.4％),RASSF1A阳性30例(34.5％).肺癌患者CEA、细胞角蛋白 19 片段(Cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(Squamous cell carcino-ma antigen,SCCA)、胃泌素释放肽前体(Pro-gastrinreleasing peptide,Pro-GRP)水平与肺良性肿瘤患者比较差异有统计学意义(P＜0.05).Logistic回归分析显示,SHOX2、RASSF1A和CEA为肺癌发生的独立危险因素(P＜0.05),基于上述独立风险因素所构建的列线图模型显示出良好的区分能力(AUC=0.926),具有较好的一致性且获益良好.结论 联合SHOX2、RASSF1A和CEA构建的列线图模型对肺癌发生具有较高的预测价值,可为肺癌的早期诊断提供依据.

目的 探讨食管癌组织中微小核糖核酸-375(miR-375)、矮小同源盒基因2(SHOX2)的表达及临床意义.方法 选取食管癌患者90例,均接受根治术治疗.术中收集部分癌组织及对应癌旁组织,用实时荧光定量PCR法检测miR-375、SHOX2 mRNA,通过Targetscan网站、miRTargetLink网站、miRanda网站、PicTar网站预测miR-375与SHOX2结合位点,用Pearson相关分析法分析食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA表达的相关性,分析二者表达与临床病理参数的关系.对患者进行随访,统计3年生存率,分析miR-375、SHOX2 mRNA表达与3年生存率的关系.用多因素Cox回归模型分析miR-375、SHOX2 mRNA表达对食管癌患者根治术后预后的影响.结果 食管癌组织miR-375表达低于癌旁组织,SHOX2 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05).经在线网站预测,miR-375与SHOX2的3'非翻译端1 489～1 496处存在结合位点;Pearson相关分析显示,食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA表达呈负相关(r=-0.825,P<0.05).不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移的食管癌组织中miR-375、SHOX2 mRNA比较差异有统计性意义(P均<0.05).随访3年,90例食管癌患者死亡29例,总生存率为67.78%(61/90).高miR-375表达者总生存率高于低miR-375表达者,高SHOX2 mRNA表达者总生存率低于低SHOX2 mRNA表达者(P均<0.05).多因素Cox回归模型分析结果显示,肿瘤低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、SHOX2 mRNA≥1.38为食管癌患者根治术后预后的独立危险因素(P均<0.05),miR-375≥0.66为独立保护因素(P<0.05).结论 食管癌组织中miR-375低表达、SHOX2 mRNA高表达,二者表达变化与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后有关.

目的 探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值.方法 选取2021年1月～2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组.2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性.结果 低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67％、准确度97.78％均高于三者单一诊断效能(P＜0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P＜0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P＜0.05).结论 低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后.

目的 探讨肺泡灌洗液(BALF)中矮小同源盒基因2(SHOX2)和RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化联合癌胚抗原(CEA)、气道径向超声在肺癌诊断的价值.方法 选取2019 年7 月至2020 年6 月于佛山市第二人民医院就诊经胸部CT提示肺结节或占位患者114 例,根据病理诊断确认肺癌62 例(肺癌组),肺良性病变52 例(对照组).在气道径向超声定位后收集患者BALF样本、外周静脉血,对BALF样本进行细胞学检查及实时荧光PCR法检测SHOX2 和RASSF1A基因甲基化阳性率,对外周静脉血血清 CEA 水平进行检测.结果 肺癌组 SHOX2、RASSF1A 基因任一甲基化阳性 40 例(64.52%),阴性22 例,对照组任一甲基化阳性2 例(3.85%),阴性50 例,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤直径与肺泡灌洗液甲基化阳性率呈负相关(P<0.05);23 例肺癌患者肺泡灌洗液CEA水平异常20 例(86.96%),CEA联合任一甲基化阳性22例(95.65%);17 例对照组CEA小于5 ng/ml的12 例(70.59%),CEA联合基因甲基化双阴性的 11 例(64.71%);49 例肺癌患者气道径向超声可探及明显回音图像,其中任一基因甲基化阳性 34 例(71.4%),无探及回音图像有 13 例,其中基因甲基化阴性8 例(38.4%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 肺癌组患者经气道径向超声定位后获取的肺泡灌洗液甲基化阳性率更高.肺泡灌洗液SHOX2 和RASSF1A基因甲基化联合癌胚抗原、气道径向超声有助于肺癌的早期诊断.

目的:探究矮小同源盒基因(SHOX2)和 Ras 相关结构域蛋白家族 1A(RASSF1A)基因甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)浸润、转移的关系.方法:采用甲基化特异性 PCR 法(MSP)分析 NSCLC及其相应癌旁组织中SHOX2 和RASSF1A基因启动子区甲基化状态,分析其甲基化状态与患者临床病理特征的关系.结果:NSCLC 癌组织中 SHOX2 和 RASSF1A 基因启动子区甲基化率分别为 68.97%(80/116)、33.62%(39/116),明显高于癌旁正常组织中的 12.93%(15/116)、10.34%(12/116)(P<0.05);SHOX2 和RASSF1A基因甲基化分布情况与 NSCLC 患者性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、分化程度无关(P>0.05),与其TNM分期、病理分型、淋巴结转移以及患者生存时间有关(P<0.05),TNM 分期中Ⅲa+Ⅲb期患者SHOX2 基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),鳞癌患者基因甲基化率明显高于腺癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2 年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2 年患者(P<0.05);TNM 分期中Ⅲa+Ⅲb 期患者RASSF1A基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),腺癌患者基因甲基化率明显高于鳞癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2 年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2 年患者(P<0.05).结论:SHOX2 和 RASSF1A 基因启动子区甲基化可能是 NSCLC 发生浸润以及转移的原因之一,检测 SHOX2 和 RASSF1A 基因启动子区甲基化可为NSCLC的诊断及预后评估提供参考价值.

目的 探讨矮小同源盒基因亚型2 (SHOX2)、Runt相关转录因子3(Runx3)基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展过程中的意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测70例癌组织、60例癌旁组织和30例非肺癌良性切除组织中SHOX2、Runx3基因启动子区的甲基化率,分析NSCLC患者癌组织与癌旁组织甲基化水平的差异,并分析性别、年龄、吸烟史、临床分期及病理分型、分化程度、淋巴结转移对基因启动子区甲基化率的影响.结果 70例肺癌组织、60例癌旁组织、30例非肺癌良性切除组织中SHOX2、Runx3基因启动子区甲基化检出率分别为68.57％(48/70)、62.86％(44/70);8.33％(5/60)、5.00％(3/60);6.67％(2/30)、3.33％(1/29),三者基因甲基化检出率比较,差异有统计学意义(x2=64.530,P=0.000;x2=63.350,P=0.000).SHOX2基因启动子区甲基化与分化程度(x2 =8.672,P=0.003)、淋巴结转移(x2=6.481,P=0.011)明显相关;RUNX3基因启动子甲基化与病理分型(x2=4.749,P=0.029)、临床分期(x2=7.035,P=0.008)、分化程度(x2=9.341,P=0.002)、淋巴结转移(x2=5.240,P=0.022)明显相关.结论x2SHOX2、Runx3基因启动子区的甲基化与NSCLC有关.

目的 探讨骨骼发育异常胎儿基因型与产前超声表型的关系,以及产前诊断和咨询方法.方法 2016年5月至2017年11月,因产前超声检查发现胎儿结构异常,至同济大学附属第一妇婴保健院胎儿医学部行单核苷酸多态性微阵列芯片(single nucleotide polymorphism-array,SNP-array)检测的孕妇中3例胎儿(胎儿1和3为单胎,胎儿2为双胎之一)诊断为矮小同源盒(short stature homeobox,SHOX)基因杂合性缺失,纳入分析.3例胎儿及其双亲,行SNP-array 检测,确定胎儿染色体微缺失情况及其来源. 结果 3例胎儿均于孕中期超声检查提示骨骼发育异常,股骨、肱骨、胫骨、腓骨、尺骨及桡骨均小于该孕周的第5百分位.3例胎儿羊水染色体核型均未见异常,SNP-array结果显示X或Y染色体短臂末端区域1～2.5 Mb的杂合性缺失,缺失区域均包含SHOX基因,3例胎儿的骨骼发育异常均由SHOX基因单倍剂量不足造成.双亲外周血SNP-array检测显示胎儿1和3的微缺失遗传自其母亲,胎儿2的微缺失遗传自其父亲.经遗传咨询,3例孕妇中2例选择终止妊娠,1例(双胎妊娠之一胎儿骨骼异常)行选择性减胎术. 结论 产前超声结合SNP-array检测可以快速有效地诊断由SHOX基因杂合性缺失造成的遗传性骨病,有助于产前咨询.

目的 应用微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测肺癌患者血浆中人矮小同源盒基因2(short stature homeobox2,SHOX2)基因甲基化水平,并探讨SHOX2基因甲基化、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、糖类抗原125 (carbohydrate antigen 125,CA125)和细胞角蛋白19片段(cytoker atin-19-fragment,CYFRA21-1)检测辅助诊断肺癌的临床价值.方法 收集2017 07 01-2017-12-30在郑州大学第一附属医院就诊的肺癌患者和健康体检者的标本,80例肺癌患者外周血标本作为肺癌组,其中30例肺癌患者癌组织标本为肺癌组织组.40名健康体检者外周血标本作为对照组.ddPCR检测SHOX2基因甲基化水平,电化学发光法检测血清中CEA、NSE、CA125和CYFRA21-1水平,并结合肺癌患者临床病理特征进行关联性分析.结果 80例肺癌患者血浆中SHOX2基因甲基化阳性率为71.25％(57/80),高于对照组的2.50％(1/40),差异有统计学意义,x2=50.473,P＜0.001.30例肺癌患者血浆与匹配的组织标本中SHOX2基因甲基化检测结果符合率为90.0％(27/30),x2=1.33,P=0.25.受试者工作特征(receiver operating characteristics curve,ROC)曲线分析显示,SHOX2基因甲基化、CEA、CA125、NSE和CYFRA21-1诊断肺癌曲线下面积(area under curve,AUC)值分别为0.906、0.767、0.642、0.693和0.845.CEA、CA125、NSE和CYFRA21-14项联合检测的敏感性为86.25％ (69/80),特异性为82.50％ (33/40),AUC值为0.922(95％CI为0.859～0.963);5项指标联合检测的敏感性为93.75％ (75/80),特异性为95.00％ (38/40),AUC值为0.959(95 ％CI为0.907～0.987).SHOX2基因甲基化与CEA、CA125、NSE、CYFRA21-1水平相关系数分别为0.355、0.229、0.220和0.578,差异有统计学意义,均P＜0.05.SHOX2基因甲基化与肺癌患者性别、年龄、吸烟状况之间无关联,均P＞0.05.SHOX2基因甲基化与病理类型(P=0.042)和TNM分期(P=0.039)有关.腺癌中SHOX2基因甲基化阳性率(58.97％,23/39)低于鳞癌(77.27％,17/22)和小细胞肺癌(89.47％,17/19);Ⅲ和Ⅳ期肺癌患者SHOX2基因甲基化阳性率分别为77.42％(24/31)和85.71％(18/21),高于Ⅰ (40.00％,4/10)和Ⅱ期(61.11％,11/18).结论 ddPCR可检测肺癌患者血浆中SHOX2基因甲基化,与匹配组织中检测结果一致性较好.SHOX2基因高甲基化与肺癌发生发展有关,联合CEA、NSE、CA125和CYFRA21-1检测可提高诊断效能,提示SHOX2基因甲基化可作为一种非侵入性的肺癌肿瘤标志物.

目的 探讨siRNA技术沉默DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因表达对前列腺癌细胞(LNCap)增殖、凋亡的影响,初步分析其对谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、矮小同源盒基因2(SHOX2)、凋亡相关蛋白激酶(DAPK)甲基化状态的影响.方法 体外培养人前列腺癌细胞LNCap、正常前列腺上皮细胞RWPE-1,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹(WB)检测细胞中DNMT1 mRNA及蛋白表达水平.实验分为3组:空白对照组(未经任何处理LNCap细胞);si-NC组(转染DNMT1阴性对照质粒的LNCap细胞);si-SH2B1组(转染si-DNMT1的LNCap细胞).采用CCK-8法检测三组细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡水平.采用甲基化特异性PCR(MSP)检测GSTP1、SHOX2、DAPK基因甲基化状态;qRT-PCR与WB法分别检测各组LNCap细胞DNMT1、GSTP1、SHOX2、DAPK mRNA及蛋白表达情况.结果 与正常组细胞相比,前列腺癌组细胞中DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);si-DNMT1组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于空白对照组、si-NC组(P<0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-DNMT1组LNCap细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、GSTP1、SHOX2、DAPK mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-DNMT1组GSTP1、DAPK、SHOX2基因甲基化水平均显著降低(P<0.05).结论 沉默DNMT1基因后可明显抑制LNCap细胞增殖并促使其凋亡,其可能通过逆转GSTP1、DAPK、SHOX2甲基化状态并上调其表达而发挥作用.

目的 检测计算机断层扫描(CT)提示的肺结节患者,血浆游离无细胞DNA的矮小同源盒2(SHOX2)基因和前列腺素E受体4基因(PTGER4)甲基化,探讨其对肺结节性质判定的意义.方法 抽取患者静脉血10 mL,提取血浆游离DNA后用重亚硫酸盐转化,采用实时荧光定量PCR扩增,将有效的Ct值输入专用的判读软件进行分析,得出SHOX2和PTGER4基因甲基化情况.运用免疫组织化学技术对活检诊断的肺恶性肿瘤进行组织学分型.结果 57例患者进行血浆游离DNA的SHOX2和PTGER4基因甲基化检测,阳性22例,阴性35例;57例中CT肺结节31例,其中19例基因甲基化检测为阳性;CT炎症16例中有3例基因检测为阳性;CT显示正常或磨玻璃的10例,结果均为阴性.不同CT表现下血浆游离DNA的SHOX2和PTGER4基因甲基化有显著差异,CT显示肺结节的阳性率最高(61.3％).CT显示肺结节经病理诊断肺癌20例,其中18例基因甲基化检测为阳性,阳性率为90％,其余良性病变中仅有1例检测阳性.血浆游离DNA的SHOX2和PTGER4基因甲基化在肺良、恶性病变中有显著差异.肺鳞癌、小细胞癌的SHOX2和PTGER4基因甲基化阳性率100％,腺癌为75％.结论 检测血浆游离DNA的SHOX2和PTGER4基因甲基化在肺癌早期诊断中具有一定价值,结合CT的影像特征,对肺结节患者性质的判定有良好的辅助诊断作用.