目的:分析检测肺泡灌洗液中大鼠肉瘤(rat sarcoma, Ras)相关区域家族1A基因(Ras association family 1 isoform A, RASSF1A)和矮小同源盒基因2(short stature homeobox 2, SHOX2)甲基化联合径向超声特征对肺结节性质鉴别诊断的意义。方法:选择2022年9月至2024年3月我院收治的肺结节患者90例，经组织病理学确诊恶性肺结节54例为观察组，良性肺结节36例为对照组，收集肺泡灌洗液进行细胞学检查及RASSF1A、SHOX2基因甲基化检测，比较两组甲基化阳性率，分析肺泡灌洗液甲基化检测对肺结节性质的灵敏度和特异性，采用Logistic回归分析从临床特征、径向超声特征及甲基化指标中筛选预测因子，构建恶性肺结节预测模型。结果:观察组RASSF1A阳性22例(40.74%)高于对照组1例(2.78%)(P<0.01)、SHOX2阳性25例(46.30%)高于对照组2例(5.56%)(P<0.01)、RASSF1A及SHOX2两者阳性14例(25.93%)高于对照组1例(2.78%)(P<0.05)、RASSF1A或SHOX2阳性33例(61.11%)高于对照组2例(5.56%)(P<0.01)；RASSF1A或SHOX2阳性诊断恶性肺结节的灵敏度61.11%、特异性94.44%。RASSF1A或SHOX2阳性33例(61.11%)高于肺泡灌洗液细胞学阳性17例(31.48%)(P<0.05)；RASSF1A或SHOX2阳性联合肺泡灌洗液细胞学阳性率72.22%；观察组径向超声特征中边缘连续比率81.40%、内部回声不均匀比率83.72%及低回声影比率72.09%高于对照组40.00%、40.00%、45.71%(P<0.05)；多因素Logistic回归分析显示，两基因甲基化、径向超声特征边缘连续及内部回声不均匀为预测恶性肺结节的危险因素，绘制受试者工作特征曲线下面积(area under the curve, AUC)为0.886。结论:RASSF1A联合SHOX2甲基化检测肺泡灌洗液用于恶性肺结节诊断具有价值，RASSF1A及SHOX2甲基化联合径向超声特征对肺结节性质鉴别诊断有临床意义。

目的:鉴定和筛选胰腺癌中与免疫基因相关的长非编码RNA(lncRNA)，并构建胰腺癌预后风险评估模型，探索预后相关因素。方法:通过癌症和肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库下载177例胰腺癌患者的测序数据和相应的临床病理和随访信息，采用随机数字表法将患者随机分为试验集( n＝89)和验证集( n＝88)。首先利用Pearson相关系数计算公式鉴定出与免疫基因显著相关的lncRNA，随后在试验集中利用单因素Cox和多因素Cox分析筛选出与预后相关的lncRNA用于构建预后风险评分公式，利用验证集数据对模型进行验证。 结果:Pearson相关系数计算公式筛选出788个与免疫相关的lncRNA，在试验集中利用单因素和多因素Cox分析鉴定出5个lncRNA(AC006237.1、AC025154.2、RASSF8-AS1、AL122010.1和AC073896.3)用于构建预后风险评分公式。基于预后风险评分公式将试验集患者分为高风险组( n＝44)和低风险组( n＝45)，生存分析发现高风险组的中位生存期(1.09年)与低风险组(4.11年)相比显著缩短( χ2＝26.016， P<0.001)。利用上述公式将验证集的患者分为高风险组( n＝44)和低风险组( n＝44)，生存分析发现高风险组患者的中位生存期(1.28年)与低风险组(1.90年)相比差异也具有统计学意义( χ2＝4.422， P＝0.035)。单因素和多因素分析提示该预后风险评估模型可有效预测胰腺癌患者的预后情况，且可以作为一个独立的预后相关模型( HR＝2.618，95% CI为1.285～5.332， P＝0.008)。预后风险评估模型较常见的临床病理指标具有较好的预测效率[1年曲线下面积(AUC)＝0.687，3年AUC＝0.725，5年AUC＝0.782]，高于年龄、性别、肿瘤组织病理学分级等常见临床指标的预测能力。AC025154.2、AC073896.3、AL122010.1和RASSF8-AS1在不同临床特征胰腺癌患者中的表达差异均具有统计学意义(均 P<0.05)，可能是胰腺癌潜在的新型诊断和治疗靶点。干扰素α、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)、MYC相关调控基因、转化生长因子-β(TGF-β)信号通路在高风险组被显著激活，肌生成和胰腺β细胞信号通路在高风险组被显著抑制。上述信号通路可能是该预后风险模型的潜在分子机制。 结论:基于5个免疫相关lncRNA构建的预后风险评估模型可以有效地预测胰腺癌患者的预后情况，此外上述免疫相关lncRNA可能是胰腺癌诊断和治疗的新型生物标志物。

目的:探讨非鳞状免疫表型鼻咽癌（NSNPC）的病理分型及其临床病理特征。方法:收集郑州大学第一附属医院2011至2019年经病理确诊为NSNPC的病例，应用HE及免疫组织化学染色、原位杂交、透射电镜及聚合酶链反应（PCR）分析其病理学特点，并收集临床随访资料。结果:（1）23例NSNPC中男性14例，女性9例，年龄范围16~76岁，中位年龄46岁，平均年龄为45岁。（2）形态学上均与经典鼻咽癌镜下形态相似。（3）免疫组织化学结果：NSNPC多表达低分子质量细胞角蛋白（CK8/18、CK8、CKL），与经典鼻咽癌组比较，差异具有统计学意义（ P<0.05）；通路蛋白EGFR、PI3K、p-AKT、p-mTOR在NSNPC中低表达，与经典鼻咽癌组比较，差异具有统计学意义（ P<0.05）；其他蛋白CK5/6、广谱细胞角蛋白（CKpan）、CK7、突触素、CD56、嗜铬粒素A（CgA）、SOX-10、AKT、mTOR、Notch、STAT3、p-STAT3与经典鼻咽癌组之间差异均无统计学意义（ P>0.05）。（4）病原学检测：EBER阳性率78.3%（18/23），HPV阳性率8.7%（2/23），分别为HPV35及HPV38型。（5）基因改变：相较于经典鼻咽癌，抑癌基因BLU在NSNPC组织中表达增强；抑癌基因RASSF1及Rbms3在NSNPC组织中表达减弱，与经典鼻咽癌表达一致。（6）超微结构特征：5例中发现细胞之间有桥粒连接，余18例未见明显桥粒连接。（7）分期及预后：NSNPC与经典鼻咽癌相比，NSNPC复发率低、临床分期较早（ P<0.05），预后较好，而与年龄、性别、远处转移、死亡无明显相关性（ P>0.05）。 结论:NSNPC在组织学形态、病原学及基因改变上均与经典鼻咽癌类似，NSNPC仍属于非角化鳞癌中的未分化型。NSNPC恶性程度较低，预后较好。

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-193a-5p靶向调控Ras相关结构域家族蛋白2(RASSF2)表达抑制炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-1β水平及其对心力衰竭模型大鼠心脏功能的影响。方法:取60只12～16周龄的清洁级Wistar大鼠(30只雄鼠，30只雌鼠)。2.5%戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉大鼠，暴露大鼠心脏后，随机选择15只大鼠进行缝合(对照组)，15只注射磷酸盐缓冲液(PBS)为PBS组，15只注射空白AAV质粒载体为AAV组，15只注射AAV-miR-193a-5p为miR-193a-5p组。PBS组、AAV组和miR-193a-5p组的大鼠冠状动脉左前降支行冠状动脉结扎构建心力衰竭模型。术后4周，彩色多普勒超声心动图检测舒张期和收缩期左心室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)和左心室射血分数(LVEF)。应用双荧光素酶报告基因实验探索miR-193a-5p是否与RASSF2的3’非翻译区相互作用。结果:术后4周，与对照组比较(4.79±0.33)，PBS组(1.57±0.16)和AAV组(1.66±0.18) miR-193a-5p表达降低，而miR-193a-5p组(9.02±0.76) miR-193a-5p表达增高( P<0.05)。与对照组[IVST：(1.88±0.15) mm；LVPWT：(1.93±0.22) mm；LVEDd：(5.44±0.79) mm；LVEF：(52.72±4.98)%]和miR-193a-5p组[IVST：(1.97±0.16) mm；LVPWT：(2.09±0.21) mm；LVEDd：(5.98±0.81) mm；LVEF：(48.83±4.17)%]比较，PBS组[IVST：(2.69±0.28) mm；LVPWT：(2.74±0.36) mm；LVEDd：(6.87±0.84) mm；LVEF：(37.45±3.55)%]和AAV组[IVST：(2.63±0.25) mm；LVPWT：(2.68±0.34) mm；LVEDd：(6.93±0.90) mm；LVEF：(36.10±3.42)%]左心室IVST、LVPWT和LVEDd显著增高，LVEF显著降低( P<0.05)，对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义( P>0.05)。与对照组[TNF-α：(2.01±0.18) μg/L；IL-1β：(8.76±1.48) ng/L；RASSF2：(1.23±0.21)]和miR-193a-5p组[TNF-α：(2.23±0.21) μg/L；IL-1β：(8.90±1.54) ng/L；RASSF2：(1.30±0.25)]比较，PBS组[TNF-α：(5.67±0.52) μg/L；IL-1β：(11.34±2.55) ng/L；RASSF2：(7.44±0.89)]和AAV组[TNF-α：(5.88±0.58) μg/L；IL-1β：(10.99±2.49) ng/L；RASSF2：(7.89±0.97)]血清TNF-α、IL-1β和RASSF2显著增高( P<0.05)，而对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:通过上调心力衰竭模型大鼠miR-193a-5p表达可抑制RASSF2蛋白表达，并显著抑制炎性因子TNF-α与IL-1β水平，进而提高心力衰竭模型大鼠心脏功能。

目的:探讨粪便DNA甲基化标志物检测用于胃癌筛查的可行性以及与胃癌患者临床特征的关系。方法:前瞻性收集2018年8月至2019年12月在苏州大学附属第一医院普通外科及消化内科就诊的胃癌患者及胃镜检查阴性者的粪便样本共156份，同时收集胃癌患者术前及术后的临床资料。按照1∶2的比例将这些样本随机分成训练集（ n=52）和测试集（ n=104）。提取粪便中的DNA，然后检测Syndecan-2黏结蛋白聚糖2基因（SDC2）、分泌性卷曲蛋白2基因（SFRP2）、Ras相关区域家族2基因（RASSF2）、端粒酶逆转录酶基因（TERT）甲基化水平，同时用免疫胶体金法检测粪便中血红蛋白（Hb）含量。使用单项粪便DNA标志物的Ct（Cycle threshold荧光信号到达设定阈值时所经历的循环次数）值建立logistic 回归模型，分析单个标志物检测胃癌的灵敏度和特异度；基于Akaike信息准则（AIC），使用多因素逻辑回归及逐步回归分析筛选最优的标志物组合，并在测试集中评价胃癌早期筛查标志物组合筛查/检测胃癌的效果。 结果:各标志物区分胃癌和阴性对照的准确度排序为：SDC2甲基化（71.2%）>TERT甲基化（67.3%）=RASSF2甲基化（67.3%）>Hb（63.5%）>SFRP2甲基化（61.5%）。通过逐步回归分析，在训练集中筛选出一个由SDC2甲基化、TERT 甲基化和Hb组成的粪便生物标志物组合，在训练集及测试集中检测胃癌的总灵敏度为 66.7%，总特异度为 78.9%。在不同分期以及不同部位胃癌样本中，该标志物组合对Ⅰ期胃癌及胃体部胃癌的灵敏度（分别为78.6%、75.0%）最高。结论:粪便中SDC2、SFRP2、TERT、RASSF2基因甲基化标志物在胃癌筛查中具有一定的灵敏度和较高的特异度，是胃癌早期筛查中的潜在粪便生物标志物。

目的:探讨SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化检测对早期肺腺癌筛查及诊断的价值。方法:下载癌症基因组图谱（TCGA）数据库中471例肺腺癌患者的mRNA测序数据及相应的413例甲基化数据分别计算两基因启动子区甲基化水平，分析正常肺组织与肿瘤组织的甲基化水平差异。回顾性分析2018年1月至2019年1月南京大学医学院附属鼓楼医院接受手术的54例早期肺腺癌及31例肺良性肿瘤患者临床资料，检测肿瘤组织及正常肺组织（距肿瘤>5 cm）（称为：临床样本）SHOX2及RASSF1A甲基化状态，以任一基因启动子区甲基化阳性为两基因联合甲基化阳性。以病理诊断为金标准，绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析基因甲基化阳性诊断早期肺腺癌的效能。筛选出石蜡样本中肿瘤细胞比例>80%的患者，对其肿瘤组织及正常肺组织进行mRNA高通量测序。分析两基因甲基化阳性与患者临床病理特征的关系，采用Spearman法分析临床样本和TCGA数据库样本中两基因启动子区甲基化水平与mRNA表达水平的相关性。采用基因集变异分析（GSVA）法分析两基因甲基化阳性临床肺腺癌样本和对应的甲基化阴性肺腺癌样本间京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集通路的差异。结果:在TCGA数据库中，SHOX2启动子区甲基化岛包含6个被测序的甲基化位点，其中位点cg04532033、cg01557547甲基化水平在肺腺癌组织中均高于正常肺组织（均 P<0.05）；RASSF1A基因启动子区甲基化岛包含11个被测序的甲基化位点，其中6个位点的甲基化水平在肺腺癌组织中均高于正常肺组织（均 P<0.05）；与正常肺组织比较，SHOX2启动子区甲基化水平在Ⅰ、Ⅱ期肺腺癌组织中升高（均 P<0.05）；RASSF1A启动子区甲基化在肺腺癌各期中均处于较高水平（均 P<0.001）。在临床54例早期肺腺癌患者中，癌组织SHOX2启动子区甲基化阳性28例，RASSF1A启动子区甲基化阳性21例，两基因联合甲基化阳性40例；31例良性肺结节SHOX2、RASSF1A甲基化均为阴性。ROC曲线分析示，SHOX2启动子区甲基化阳性诊断早期肺腺癌的灵敏度高于RASSF1A启动子区甲基化阳性诊断（51.8%比38.9%），两基因联合甲基化阳性诊断的曲线下面积（AUC）均高于单独以SHOX2或RASSF1A甲基化阳性诊断（0.870比0.759、0.694）。Ⅰ、Ⅱ期肺腺癌SHOX2及RASSF1A甲基化实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测的循环阈值（Ct）均低于正常肺组织（均 P<0.05）；与两基因甲基化均阴性患者相比，两基因联合甲基化阳性患者具有年龄更高、肿瘤长径更长、病理分期更晚的特点（均 P<0.05）。在临床Ⅰ~Ⅱ期肺腺癌样本中，SHOX2及RASSF1A启动子区甲基化qRT-PCR检测的Ct与其mRNA相对表达水平均呈负相关（ r=-0.43， P=0.003； r=-0.48， P=0.001）；TCGA数据库Ⅰ~Ⅱ期肺腺癌样本中，SHOX2启动子区甲基化水平与其mRNA相对表达量呈负相关（ r=-0.23， P<0.001），RASSF1A启动子区甲基化水平与其mRNA相对表达量也有负相关趋势，但无统计学意义（ r=-0.05， P=0.310）。两基因启动子区甲基化阳性肺腺癌样本中与叶酸代谢及DNA稳定性相关的通路上调，与血管收缩、细胞生长分化等相关的通路的下调。 结论:SHOX2及RASSF1A启动子区甲基化联合检测可作为早期肺腺癌筛查、诊断的指标。两基因启动子区甲基化异常可能影响多个肿瘤相关通路，促进早期肺腺癌的发生、发展。

目的:探讨长春新碱调控RAS相关结构域蛋白2A(RASSF2A)去甲基化对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:将卵巢癌SKOV3细胞分为不同浓度长春新碱组，将慢病毒转染至LV-NC组(转染LV-NC慢病毒液，感染复数为70)和LV-RASSF2A组(转染LV-RASSF2A慢病毒液，感染复数为70)SKOV3细胞，空白组加入等量磷酸盐缓冲液。采用CCK-8法检测6.25 nmol/L长春新碱组、12.5 nmol/L长春新碱组、25 nmol/L长春新碱组、50 nmol/L长春新碱组和100 nmol/L长春新碱组SKOV3细胞的活力，集落形成实验检测SKOV3细胞的增殖能力，流式细胞术检测SKOV3细胞的凋亡情况，逆转录聚合酶链反应检测人正常卵巢上皮细胞IOSE-29和SKOV3细胞中RASSF2A mRNA的表达水平，Western blot检测IOSE-29和SKOV3细胞中RASSF2A蛋白的表达水平，甲基化特异性聚合酶链反应检测IOSE-29和SKOV3细胞中RASSF2A甲基化和去甲基化水平。结果:6.25 nmol/L长春新碱组、12.5 nmol/L长春新碱组、25 nmol/L长春新碱组、50 nmol/L长春新碱组和100 nmol/L长春新碱组SKOV3细胞的存活率分别为(87.19±4.49)%、(73.67±8.62)%、(66.35±6.04)%、(50.32±6.00)%和(34.92±6.11)%，均低于对照组[(100.46±4.69)%，均 P<0.05]。培养48 h时，长春新碱半数抑制浓度为50.02 nmol/L。12.5 nmol/L长春新碱组、25 nmol/L长春新碱组和50 nmol/L长春新碱组SKOV3细胞的增殖率分别为(41.70±2.21)%、(32.15±1.80)%和(23.00±2.01)%，均低于对照组[(100.78±5.66)%，均 P<0.05)]；SKOV3细胞的凋亡率分别为(3.65±0.27)%、(5.21±0.76)%和(10.46±1.00)%，均高于对照组[(2.12±0.23)%，均 P<0.05)]。SKOV3细胞中RASSF2A mRNA和蛋白的表达水平分别为0.32±0.04和0.24±0.02，均低于IOSE-29细胞(分别为1.00±0.07和0.68±0.04，均 P<0.05)。LV-RASSF2A组SKOV3细胞的存活率、增殖率和凋亡率分别为(68.92±3.94)%、(16.38±2.16)%和(8.65±0.56)%，与LV-NC组[分别为(101.60±4.39)%、(100.73±3.29)%和(4.06±0.30)%]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:长春新碱通过上调RASSF2A的表达，促进RASSF2A启动子去甲基化，以抑制卵巢癌细胞的增殖能力。

目的 联合矮小同源盒基因2(Short stature homeobox gene 2,SHOX2)、RAS相关结构域家族 1 亚型 A(RAS association domain family 1,isoform A,RASSF1A)及癌胚抗原(Carci-noembryonic antigen,CEA)构建预测肺癌发生的列线图模型,并确定该模型的预测价值.方法 选择2020年1月至2022年12月在新疆医科大学第一附属医院就诊的88例肺癌患者及肺良性肿瘤患者219名.比较两组患者的人口统计学和临床特征信息以及支气管肺泡灌洗液(Bron-choalveolar lavage fluid,BALF)中SHOX2和RASSF1A基因的甲基化水平.进行单因素分析及多因素Logistic回归分析筛选出影响肺癌发生的变量构建列线图,并评估其预测效能.结果 肺癌患者中SHOX2阳性36例(41.4％),RASSF1A阳性30例(34.5％).肺癌患者CEA、细胞角蛋白 19 片段(Cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(Squamous cell carcino-ma antigen,SCCA)、胃泌素释放肽前体(Pro-gastrinreleasing peptide,Pro-GRP)水平与肺良性肿瘤患者比较差异有统计学意义(P＜0.05).Logistic回归分析显示,SHOX2、RASSF1A和CEA为肺癌发生的独立危险因素(P＜0.05),基于上述独立风险因素所构建的列线图模型显示出良好的区分能力(AUC=0.926),具有较好的一致性且获益良好.结论 联合SHOX2、RASSF1A和CEA构建的列线图模型对肺癌发生具有较高的预测价值,可为肺癌的早期诊断提供依据.

目的 分析阿帕替尼靶向治疗联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗晚期原发性肝癌患者疗效及对外周血Ras相关区域家族1 A(RASSF1A)基因甲基化的影响.方法 64例晚期肝细胞癌(HCC)患者分为单一组(n=32)与联合组(n=32),单一组行TACE治疗,联合组行阿帕替尼靶向治疗联合TACE治疗,两组患者均行标准疗程TACE治疗,于治疗1个月(1 mo)及3个月(3 mo)评估临床疗效,比较治疗前后肝功能[白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、血清标志物[甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)]、外周血RASSF1A基因甲基化、不良反应及TACE抵抗发生率.结果 单一组治疗3 mo时的客观缓解率(ORR)较治疗1 mo时下降(P＜0.05),且低于联合组(P＜0.05);两组患者治疗3 mo时的ALT、AST均较治疗前下降(P＜0.05),且联合组低于单一组(P＜0.05),两组患者治疗3 mo时的AFP均较治疗前显著降低(P＜0.05);联合组治疗3 mo时的VEGF较治疗前降低(P＜0.05)、Caspase-8较治疗前升高(P＜0.05),联合组治疗3 mo时AFP、VEGF低于单一组(P＜0.05),Caspase-8高于单一组(P＜0.05);联合组治疗3 mo时RASSF1A基因甲基化阳性率明显低于治疗前(P＜0.05),而单一组组内比较差异无统计学意义(P＞0.05);联合组手足综合征、高血压发生率高于单一组(P＜0.05),TA-CE抵抗发生率略低于单一组、但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期HCC效果及安全性良好,且对减少RASSF1A基因甲基化有利.

目的:探讨在支气管灌洗液标本中SHOX2和RASSF1A 基因甲基化检测联合液基细胞学对肺癌的诊断价值。方法:收集2023年3月至7月于北京胸科医院病理科检测的106例疑似肺癌患者（肺癌组84例，肺部良性疾病组22例）的气管灌洗液样本，分别做甲基化检测和液基细胞学诊断，以组织病理结果为金标准，对比两种方法的检测结果。结果:SHOX2和RASSF1A联合检测的灵敏度是52.4%（44/84）、特异度是（100%）。在亚型分组中，联合检测在小细胞癌、鳞癌和腺癌中检测的阳性率分别是（66.7%；8/12）、（72%；18/25）和（35.9；14/39）。在临床分期中，联合检测在晚期肺癌高达60.0%，明显高于早期检出率（P<0.05）。液基细胞学诊断的敏感性是（44.0%；37/84），特异性是（95.2%；20/21），甲基化检测和液基细胞学检查两种方法联合应用，检测的敏感性为（65.5%，55/84）。结论:SHOX2和RASSF1A 基因甲基化联合检测在诊断肺癌中有较高的敏感性和特异性，可以作为支气管灌洗液细胞病理学诊断的有效辅助手段，两者结合可进一步提高肺癌的诊断效能。