目的:探讨RNA结合蛋白Musashi-1（MSI1）在前列腺癌（PCa）中的表达及其调控功能。方法:基于肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库对目的基因MSI1进行差异分析、生存分析和临床相关性分析。通过在DU145细胞中敲低目的基因，探究MSI1其对前列腺癌细胞DU145增殖、迁移和侵袭能力的影响，组间比较采用独立样本 t检验。 结果:MSI1在前列腺癌中表达水平明显高于正常前列腺组织，差异有统计学意义（7.75±1.01比4.56±0.54， t＝ 4.82， P<0.01）。且生存分析结果显示，低表达MSI1组的无病生存期明显长于高表达组[风险比（ HR）：1.71（1.15～2.53）， P<0.01]。T1＋T2期MSI1表达水平和T3＋T4期表达水平无统计学意义（ t＝0.38， P>0.05）。MSI表达水平[ HR：1.47（1.02～2.10）， P<0.05]、T分期[ HR：1.93（1.02～3.60）， P<0.05]及Gleason评分[HR：3.17（1.59～6.30）， P<0.01]可作为前列腺癌的预后因素。细胞计数试剂盒（CCK-8）结果，第4天Ctrl DU145细胞在波长450 nm吸光度（ A）值为0.929±0.085，而shMSI1#1和shMSI1#2 DU145实验组第4天 A值分别为0.687±0.005和0.711±0.018，与对照组比较差异有统计学意义（ t＝42.21、44.19， P<0.01）。DU145中ctrl组伤口愈合面积显著高于si-MSI1#1和si-MSI1#2组，组间比较差异有统计学意义（ P<0.01）。同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现，ctrl组及si-MSI1#1和si-MSI1#2组PC3迁移细胞分别为790.9±80.7、403.3±49.9和504.6±117.3，组间比较差异有统计学意义（ t＝21.80、13.55， P<0.01）。 结论:MSI1在前列腺癌组织中高表达且与前列腺癌患者的不良预后明显相关。抑制MSI1可有效抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力。

目的:探讨RNA结合蛋白Musashi1在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞的增殖、转移和耐药的影响。方法:选取2021年1月至2023年1月商丘市第一人民医院收治的74例手术切除的胃癌样本作为研究对象，并取癌旁组织作为对照。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和胃癌组织Musashi1蛋白表达水平；培养人胃癌细胞系HSC-38，采用Musashi1短发卡RNA(shRNA)慢病毒和对照慢病毒感染HSC-38，建立Musashi1低表达和对照细胞系，分别为Musashi1 KD组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞的增殖能力；采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞的迁移和侵袭能力；采用Western blot分析两组细胞上皮间质转化能力；采用流式细胞术分析Musashi1对顺铂耐药细胞系的影响，组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织Musashi1蛋白表达水平(1.03±0.13)明显低于胃癌组织(1.87±0.29)，差异有统计学意义( t＝22.880， P<0.05)。对照组细胞24 h吸光度值(2.06±0.14)明显高于Musashi1 KD组(1.41±0.11)，差异有统计学意义( t＝8.958， P<0.05)。对照组细胞克隆形成数量[(102.33±12.71)个]明显高于Musashi1 KD组[(63.83±6.67)个]，差异有统计学意义( t＝6.570， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.50±8.22)%]明显高于Musashi1 KD组[(60.67±9.57)%]，差异有统计学意义( t＝4.141， P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(121.83±10.80)个]明显高于Musashi1 KD组[(79.50±7.23)个]，差异有统计学意义( t＝7.980， P<0.05)。对照组细胞上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平(0.83±0.06)明显低于Musashi1 KD组(1.26±0.12)，差异有统计学意义( t＝3.147， P<0.05)。对照组细胞上皮细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平(0.85±0.10、1.05±0.13)明显高于Musashi1 KD组(0.48±0.08、0.69±0.08)，差异有统计学意义( t＝7.047、5.653， P<0.05)。耐药对照组细胞凋亡水平[(33.67±6.31)%]明显低于耐药Musashi1 KD组[(77.67±5.57)%]，差异有统计学意义( t＝12.800， P<0.05)。 结论:RNA结合蛋白Musashi1在胃癌组织呈过表达，参与胃癌细胞的增殖、转移和耐药等恶性细胞生物学行为。

目的:探究Musashi RNA结合蛋白2(MSI2)如何通过Wnt/β-catenin信号通路发挥调控肝癌细胞增殖的作用。方法:通过转染短发夹RNA(shRNA)抑制MSI2表达，将细胞分为转染对照质粒(sh-Ctrl)组和sh-MSI2组。MSI2过表达实验中将细胞分为对照组(Vector组，转染空白质粒Vector)和过表达组(MSI2组，转染MSI2重组质粒)。CCK-8和平板克隆实验检测细胞增殖。蛋白质印迹法检测干预MSI2后β-catenin、转录因子7(TCF7)和淋巴增强因子1(LEF1)的表达。Rescue回复实验中将细胞分为MSI2+sh-Ctrl组(同时转染MSI2重组质粒和sh-Ctrl质粒)和MSI2+sh-β-catenin组(同时转染MSI2重组质粒和sh-β-catenin质粒)。在过表达MSI2的基础上敲低β-catenin进行肝癌细胞增殖能力检测。结果:sh-MSI2组HepG2和MHCC97H细胞的增殖率均低于sh-Ctrl组，差异具有统计学意义( P<0.05)。MSI2组的SMMC-7721和MHCC97L细胞增殖率均高于Vector组，差异具有统计学意义( P<0.05)。克隆形成实验结果显示，与sh-Ctrl组相比，sh-MSI2组的HepG2细胞克隆数量[(129.7±6.5)比(286.0±12.8)]和MHCC97H细胞克隆数量[(134.0±6.7)比(248.0±14.1)]均减少，差异具有统计学意义( P<0.05)；与Vector组相比，MIS2组的SMMC-7721细胞克隆数量[(242.0±5.6)比(135.3±8.7)]和MHCC97L细胞克隆数量[(308.0±9.0)比(149.7±5.9)]均增加，差异具有统计学意义( P<0.05)。sh-MSI2组HepG2和MHCC97H细胞中β-catenin、TCF7和LEF1 mRNA和蛋白的表达均低于sh-Ctrl组，组间比较差异具有统计学意义(均 P<0.05)。相反，与Vector组相比，MSI2组SMMC-7721和MHCC97L细胞的β-catenin、TCF7和LEF1 mRNA和蛋白表达水平均增加，差异均具有统计学意义( P<0.05)。与MSI2+sh-Ctrl组相比，MSI2+sh-β-catenin组细胞增殖能力下降，差异具有统计学意义( P<0.05)。平板克隆实验显示，MSI2+sh-β-catenin组细胞克隆形成数量少于MSI2+sh-Ctrl组[(138.3±7.0)比(246.3±8.0)， P＝0.028]。 结论:MSI2通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖，导致肿瘤进展。

目的:研究RNA结合蛋白Musashi-2(MSI2)在肝细胞癌(HCC)中的作用及相关机制。方法:获取来自癌症基因组图谱数据库(TCGA)和基因型-组织表达数据库(GTEX)的HCC患者mRNA表达数据及相应的临床信息，在50对匹配的肿瘤/正常HCC样本中，评估MSI2的表达水平。进一步通过蛋白质相互作用网络(PPI)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)和RNA互作组百科全书(ENCORI)数据库，探究MSI2如何影响HCC进展。设计3对针对MSI2和β-catenin的短发夹RNA(shRNA)序列，将他们分别克隆到慢病毒载体中，作为敲减质粒分别转染HepG2、MHCC97H和MHCC97L细胞，用于构建MSI2敲减组细胞(HepG2 sh-MSI2组、MHCC97H sh-MSI2组)、β-catenin敲减组细胞(MHCC97L sh-β-catenin组)和各自的阴性对照组细胞(HepG2 sh-Ctrl组、MHCC97H sh-Ctrl组以及MHCC97L sh-Ctrl组)。通过蛋白质印迹法检测MSI2的过表达水平。CCK-8和集落形成实验检测肝癌细胞增殖情况。将HepG2 sh-Ctrl组、HepG2 sh-MSI2组、MHCC97L sh-Ctrl组和MHCC97L sh-β-catenin组细胞悬液分别注射于各组裸鼠的前大腿处皮下，4周后处死裸鼠，取出肿瘤测量体积。 结果:基于TCGA和GTEX数据库的分析显示，MSI2在50对匹配的肿瘤中的表达高于正常样本(2.073±0.767比1.256±0.260)，差异具有统计学差异( P<0.001)。利用PPI、KEGG通路富集以及ENCORI数据库分析MSI2在HCC进展中的潜在机制，结果显示，在HCC中，MSI2与β-catenin( r＝0.455， P<0.001)、转录因子7(TCF7)( r＝0.142， P＝0.006)、淋巴增强因子1(LEF1)( r＝0.246， P<0.001)均呈正相关。与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组中MSI2、β-catenin、TCF7、LEF1的表达均下调，与MHCC97H sh-Ctrl组相比，MHCC97H sh-MSI2组中MSI2、β-catenin、TCF7、LEF1的表达均下调，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。与MHCC97L sh-Ctrl组相比，MHCC97L sh-β-catenin组中β-catenin的表达下降，差异具有统计学意义( P<0.001)。CCK-8增殖实验结果显示，与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组肝癌细胞活性降低，与MHCC97H sh-Ctrl组相比，MHCC97H sh-MSI2组肝癌细胞活性降低，与MHCC97L sh-Ctrl组相比，MHCC97L sh-β-catenin组肝癌细胞活性降低，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。集落形成实验结果显示，与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组肝癌细胞形成集落的能力降低，与MHCC97H sh-Ctrl组相比，MHCC97H sh-MSI2组肝癌细胞形成集落的能力降低，与MHCC97L sh-Ctrl组相比，与MHCC97L sh-β-catenin组肝癌细胞形成集落的能力降低，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组裸鼠的肿瘤体积减小[(160.19±60.22)mm 3比(480.46±65.28)mm 3]，与MHCC97L sh-Ctrl组相比，MHCC97L sh-β-catenin组裸鼠的肿瘤体积减小[(456.48±38.23)mm 3比(845.67±33.19)mm 3]，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:MSI2表达上调通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖。

目的 探讨RNA结合蛋白Musashi-1(MSI1)在前列腺癌(PCa)中的表达及其调控功能.方法 基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对目的基因MSI1进行差异分析、生存分析和临床相关性分析.通过在DU145细胞中敲低目的基因,探究MSI1其对前列腺癌细胞DU145增殖、迁移和侵袭能力的影响,组间比较采用独立样本 t 检验.结果 MSI1在前列腺癌中表达水平明显高于正常前列腺组织,差异有统计学意义(7.75±1.01比4.56±0.54,t=4.82,P＜0.01).且生存分析结果显示,低表达MSI1组的无病生存期明显长于高表达组[风险比(HR):1.71(1.15～2.53),P＜0.01].T1+T2期MSI1表达水平和T3+T4期表达水平无统计学意义(t=0.38,P＞0.05).MSI表达水平[HR:1.47(1.02～2.10),P＜0.05]、T 分期[HR:1.93(1.02～3.60),P＜0.05]及Gleason评分[HR:3.17(1.59～6.30),P＜0.01]可作为前列腺癌的预后因素.细胞计数试剂盒(CCK-8)结果,第4天Ctrl DU145细胞在波长450 nm吸光度(A)值为0.929±0.085,而shMSI1#1和shMSI1#2 DU145实验组第4天A值分别为0.687±0.005和0.711±0.018,与对照组比较差异有统计学意义(t=42.21、44.19,P＜0.01).DU145 中 ctrl 组伤 口愈合面积显著高于 si-MSI1#1 和si-MSI1#2组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现,ctrl组及si-MSI1#1 和 si-MSI1#2 组 PC3 迁移细胞分别为 790.9±80.7、403.3±49.9 和 504.6±117.3,组间比较差异有统计学意义(t=21.80、13.55,P＜0.01).结论 MSI1在前列腺癌组织中高表达且与前列腺癌患者的不良预后明显相关.抑制MSI1可有效抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力.

目的 Musashi1(MSI1)属于RNA结合蛋白(RBP)家族,可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用,但它在肝细胞癌(HCC)中的功能还未被深入探究.本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制.方法 构建MSI1过表达或敲除细胞系.采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达.采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响,同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达.结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高.与对照细胞相比,HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长(7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14,P<0.01),且处于G0/G1期的细胞比率也从(58.42±3.18)％降至(40.67±1.22)％,而S期细胞比率则从(28.51±1.93)％增加至(40.06±1.92)％(P<0.01).与此同时,细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调.反之,敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑,更多细胞停滞于G0/G1期(G0/G1期细胞比率从(43.83±1.57)％增加至(62.84±1.22)％(P<0.01),同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调.MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达,反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达.结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展,其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的.

RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)在基因调控过程中扮演着关键作用,参与RNA的合成、选择性剪接、修饰、转运和翻译等生命活动,所以研究RNA和RBP的相互作用是探索RNA功能的关键.RBP的表达变化与多种疾病有关.Musashi(MSI)家族是一类进化保守的RBP,其家族成员MSI1和MSI2在肿瘤发生、发展和耐药等多个关键过程中发挥作用,在血液、神经、消化、呼吸等系统的多种肿瘤中过表达,且表达变化与预后相关.MSI与相关mRNA结合可调节mRNA翻译及mRNA稳定性.MSI可以维持肿瘤干细胞数量,并影响肿瘤的增殖、侵袭、转移及耐药.将MSI基因作为靶点指导肿瘤治疗的临床前研究目前取得了一些初步的成果.该文就MSI家族蛋白的生理功能及其在肿瘤发生发展中的作用、作为诊断标志物和治疗靶点等方面的最新研究进展进行综述.

背景与目的:Musashi1(Msi1)属于RNA结合蛋白家族中的一员,是RNA转录后表达的关键调控者,其是否参与肿瘤的发生、发展,以及具体分子机制仍不十分清楚.探讨沉默Msi1基因对结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的影响及可能的机制.方法:采用慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的细胞株,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期的变化,裸鼠移植瘤模型观察沉默Msi1对裸鼠成瘤的影响.实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印记法(Western blot)检测沉默Msi1基因后p27基因的mRNA表达和蛋白水平,双荧光素酶实验验证Msi1基因与目的基因p27 3'-非编码区(3'-untranslated region,3'-UTR)的相互作用.结果:沉默Msi1基因后,HCT116细胞的增殖能力显著下降,克隆集落数明显减少,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少,裸鼠移植瘤生长明显受到抑制.沉默Msi1基因后p27 mRNA表达未见明显变化,而p27蛋白水平明显上调,双荧光素酶实验证实Msi1基因能与p27 3'-UTR区域直接结合,抑制其翻译.结论:沉默Msi1基因通过靶向上调p27,导致结肠癌HCT116细胞G0/G1期阻滞,从而抑制肿瘤细胞体内及体外增殖能力.

Musashi-2(MSI2)是一种RNA结合蛋白质,对维持造血干细胞功能具有重要作用.研究表明,MSI2高表达能促进急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia,AML)进展,但其作用机制尚不明确.本研究稳定沉默HL60细胞MSI2后,第1、2、3、4d对照组的相对细胞生长率分别为1.931±0.027、3.070±0.073、4.017±0.092和4.215±0.246;敲减组分别为1.927±0.035、2.564±0.090、2.825±0.097和3.223±0.182,两组相比具有统计学差异,P＜0.001;细胞凋亡明显增加(7.967％±0.698％ vs 3.400％±0.322％.,P＜0.01);G0/G1期细胞比例明显增高(67.430％±4.390％ vs.50.360％±2.160％,P＜0.01);NUMB蛋白明显上调,LEF1明显下降.环状RNA(circular RNA,circRNA)芯片筛选和荧光定量PCR验证显示,MSI2沉默组circRNA_001214表达水平是对照组3.48倍.这一结果也在NALM6细胞得到证实.进一步用生物信息学分析,显示circRNA_001214最可能与miR-1273a、miR-1273e和miR-5095结合,进而影响参与细胞凋亡相关基因(CYCS、AKT1、BAX、TNFRSF 10A、TNFRSF 10D)、Wnt信号基因(WNT4、WNT2B、WNT7B、DKK2、SFRP1、CSNKE1和LEF1)以及参与细胞代谢相关基因(RPE,PGAM4,PGAM1,TAT,CBS、RPE、SUCLG2、PGAM4、PGAM1和IDNK).总而言之,MSI2可能通过干扰circRNA_001214生成,减少靶miRNA对凋亡、Wnt信号及细胞代谢相关基因表达的影响,促进细胞生长.

MSI1(Musashi-1)是最新研究的肿瘤干细胞潜在标志物,作为一种RNA结合蛋白,在维持干细胞特性及多种肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用,能够促进肿瘤生长,促进EMT过程,调节细胞周期,抑制凋亡的发生,可能作为肿瘤诊断及治疗的新型靶点,研究MSI1在肿瘤中的功能及作用机制,将为肿瘤干细胞标志物的研究提供基础,为肿瘤治疗提供新的靶点.