目的:探讨RNA结合蛋白Musashi-1（MSI1）在前列腺癌（PCa）中的表达及其调控功能。方法:基于肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库对目的基因MSI1进行差异分析、生存分析和临床相关性分析。通过在DU145细胞中敲低目的基因，探究MSI1其对前列腺癌细胞DU145增殖、迁移和侵袭能力的影响，组间比较采用独立样本 t检验。 结果:MSI1在前列腺癌中表达水平明显高于正常前列腺组织，差异有统计学意义（7.75±1.01比4.56±0.54， t＝ 4.82， P<0.01）。且生存分析结果显示，低表达MSI1组的无病生存期明显长于高表达组[风险比（ HR）：1.71（1.15～2.53）， P<0.01]。T1＋T2期MSI1表达水平和T3＋T4期表达水平无统计学意义（ t＝0.38， P>0.05）。MSI表达水平[ HR：1.47（1.02～2.10）， P<0.05]、T分期[ HR：1.93（1.02～3.60）， P<0.05]及Gleason评分[HR：3.17（1.59～6.30）， P<0.01]可作为前列腺癌的预后因素。细胞计数试剂盒（CCK-8）结果，第4天Ctrl DU145细胞在波长450 nm吸光度（ A）值为0.929±0.085，而shMSI1#1和shMSI1#2 DU145实验组第4天 A值分别为0.687±0.005和0.711±0.018，与对照组比较差异有统计学意义（ t＝42.21、44.19， P<0.01）。DU145中ctrl组伤口愈合面积显著高于si-MSI1#1和si-MSI1#2组，组间比较差异有统计学意义（ P<0.01）。同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现，ctrl组及si-MSI1#1和si-MSI1#2组PC3迁移细胞分别为790.9±80.7、403.3±49.9和504.6±117.3，组间比较差异有统计学意义（ t＝21.80、13.55， P<0.01）。 结论:MSI1在前列腺癌组织中高表达且与前列腺癌患者的不良预后明显相关。抑制MSI1可有效抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力。

目的:探讨RNA结合蛋白Musashi1在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞的增殖、转移和耐药的影响。方法:选取2021年1月至2023年1月商丘市第一人民医院收治的74例手术切除的胃癌样本作为研究对象，并取癌旁组织作为对照。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和胃癌组织Musashi1蛋白表达水平；培养人胃癌细胞系HSC-38，采用Musashi1短发卡RNA(shRNA)慢病毒和对照慢病毒感染HSC-38，建立Musashi1低表达和对照细胞系，分别为Musashi1 KD组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞的增殖能力；采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞的迁移和侵袭能力；采用Western blot分析两组细胞上皮间质转化能力；采用流式细胞术分析Musashi1对顺铂耐药细胞系的影响，组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织Musashi1蛋白表达水平(1.03±0.13)明显低于胃癌组织(1.87±0.29)，差异有统计学意义( t＝22.880， P<0.05)。对照组细胞24 h吸光度值(2.06±0.14)明显高于Musashi1 KD组(1.41±0.11)，差异有统计学意义( t＝8.958， P<0.05)。对照组细胞克隆形成数量[(102.33±12.71)个]明显高于Musashi1 KD组[(63.83±6.67)个]，差异有统计学意义( t＝6.570， P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(83.50±8.22)%]明显高于Musashi1 KD组[(60.67±9.57)%]，差异有统计学意义( t＝4.141， P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(121.83±10.80)个]明显高于Musashi1 KD组[(79.50±7.23)个]，差异有统计学意义( t＝7.980， P<0.05)。对照组细胞上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平(0.83±0.06)明显低于Musashi1 KD组(1.26±0.12)，差异有统计学意义( t＝3.147， P<0.05)。对照组细胞上皮细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平(0.85±0.10、1.05±0.13)明显高于Musashi1 KD组(0.48±0.08、0.69±0.08)，差异有统计学意义( t＝7.047、5.653， P<0.05)。耐药对照组细胞凋亡水平[(33.67±6.31)%]明显低于耐药Musashi1 KD组[(77.67±5.57)%]，差异有统计学意义( t＝12.800， P<0.05)。 结论:RNA结合蛋白Musashi1在胃癌组织呈过表达，参与胃癌细胞的增殖、转移和耐药等恶性细胞生物学行为。

目的:探究Musashi RNA结合蛋白2(MSI2)如何通过Wnt/β-catenin信号通路发挥调控肝癌细胞增殖的作用。方法:通过转染短发夹RNA(shRNA)抑制MSI2表达，将细胞分为转染对照质粒(sh-Ctrl)组和sh-MSI2组。MSI2过表达实验中将细胞分为对照组(Vector组，转染空白质粒Vector)和过表达组(MSI2组，转染MSI2重组质粒)。CCK-8和平板克隆实验检测细胞增殖。蛋白质印迹法检测干预MSI2后β-catenin、转录因子7(TCF7)和淋巴增强因子1(LEF1)的表达。Rescue回复实验中将细胞分为MSI2+sh-Ctrl组(同时转染MSI2重组质粒和sh-Ctrl质粒)和MSI2+sh-β-catenin组(同时转染MSI2重组质粒和sh-β-catenin质粒)。在过表达MSI2的基础上敲低β-catenin进行肝癌细胞增殖能力检测。结果:sh-MSI2组HepG2和MHCC97H细胞的增殖率均低于sh-Ctrl组，差异具有统计学意义( P<0.05)。MSI2组的SMMC-7721和MHCC97L细胞增殖率均高于Vector组，差异具有统计学意义( P<0.05)。克隆形成实验结果显示，与sh-Ctrl组相比，sh-MSI2组的HepG2细胞克隆数量[(129.7±6.5)比(286.0±12.8)]和MHCC97H细胞克隆数量[(134.0±6.7)比(248.0±14.1)]均减少，差异具有统计学意义( P<0.05)；与Vector组相比，MIS2组的SMMC-7721细胞克隆数量[(242.0±5.6)比(135.3±8.7)]和MHCC97L细胞克隆数量[(308.0±9.0)比(149.7±5.9)]均增加，差异具有统计学意义( P<0.05)。sh-MSI2组HepG2和MHCC97H细胞中β-catenin、TCF7和LEF1 mRNA和蛋白的表达均低于sh-Ctrl组，组间比较差异具有统计学意义(均 P<0.05)。相反，与Vector组相比，MSI2组SMMC-7721和MHCC97L细胞的β-catenin、TCF7和LEF1 mRNA和蛋白表达水平均增加，差异均具有统计学意义( P<0.05)。与MSI2+sh-Ctrl组相比，MSI2+sh-β-catenin组细胞增殖能力下降，差异具有统计学意义( P<0.05)。平板克隆实验显示，MSI2+sh-β-catenin组细胞克隆形成数量少于MSI2+sh-Ctrl组[(138.3±7.0)比(246.3±8.0)， P＝0.028]。 结论:MSI2通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖，导致肿瘤进展。

目的:研究RNA结合蛋白Musashi-2(MSI2)在肝细胞癌(HCC)中的作用及相关机制。方法:获取来自癌症基因组图谱数据库(TCGA)和基因型-组织表达数据库(GTEX)的HCC患者mRNA表达数据及相应的临床信息，在50对匹配的肿瘤/正常HCC样本中，评估MSI2的表达水平。进一步通过蛋白质相互作用网络(PPI)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)和RNA互作组百科全书(ENCORI)数据库，探究MSI2如何影响HCC进展。设计3对针对MSI2和β-catenin的短发夹RNA(shRNA)序列，将他们分别克隆到慢病毒载体中，作为敲减质粒分别转染HepG2、MHCC97H和MHCC97L细胞，用于构建MSI2敲减组细胞(HepG2 sh-MSI2组、MHCC97H sh-MSI2组)、β-catenin敲减组细胞(MHCC97L sh-β-catenin组)和各自的阴性对照组细胞(HepG2 sh-Ctrl组、MHCC97H sh-Ctrl组以及MHCC97L sh-Ctrl组)。通过蛋白质印迹法检测MSI2的过表达水平。CCK-8和集落形成实验检测肝癌细胞增殖情况。将HepG2 sh-Ctrl组、HepG2 sh-MSI2组、MHCC97L sh-Ctrl组和MHCC97L sh-β-catenin组细胞悬液分别注射于各组裸鼠的前大腿处皮下，4周后处死裸鼠，取出肿瘤测量体积。 结果:基于TCGA和GTEX数据库的分析显示，MSI2在50对匹配的肿瘤中的表达高于正常样本(2.073±0.767比1.256±0.260)，差异具有统计学差异( P<0.001)。利用PPI、KEGG通路富集以及ENCORI数据库分析MSI2在HCC进展中的潜在机制，结果显示，在HCC中，MSI2与β-catenin( r＝0.455， P<0.001)、转录因子7(TCF7)( r＝0.142， P＝0.006)、淋巴增强因子1(LEF1)( r＝0.246， P<0.001)均呈正相关。与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组中MSI2、β-catenin、TCF7、LEF1的表达均下调，与MHCC97H sh-Ctrl组相比，MHCC97H sh-MSI2组中MSI2、β-catenin、TCF7、LEF1的表达均下调，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。与MHCC97L sh-Ctrl组相比，MHCC97L sh-β-catenin组中β-catenin的表达下降，差异具有统计学意义( P<0.001)。CCK-8增殖实验结果显示，与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组肝癌细胞活性降低，与MHCC97H sh-Ctrl组相比，MHCC97H sh-MSI2组肝癌细胞活性降低，与MHCC97L sh-Ctrl组相比，MHCC97L sh-β-catenin组肝癌细胞活性降低，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。集落形成实验结果显示，与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组肝癌细胞形成集落的能力降低，与MHCC97H sh-Ctrl组相比，MHCC97H sh-MSI2组肝癌细胞形成集落的能力降低，与MHCC97L sh-Ctrl组相比，与MHCC97L sh-β-catenin组肝癌细胞形成集落的能力降低，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。与HepG2 sh-Ctrl组相比，HepG2 sh-MSI2组裸鼠的肿瘤体积减小[(160.19±60.22)mm 3比(480.46±65.28)mm 3]，与MHCC97L sh-Ctrl组相比，MHCC97L sh-β-catenin组裸鼠的肿瘤体积减小[(456.48±38.23)mm 3比(845.67±33.19)mm 3]，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:MSI2表达上调通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞增殖。

目的 探讨RNA结合蛋白Musashi-1(MSI1)在前列腺癌(PCa)中的表达及其调控功能.方法 基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对目的基因MSI1进行差异分析、生存分析和临床相关性分析.通过在DU145细胞中敲低目的基因,探究MSI1其对前列腺癌细胞DU145增殖、迁移和侵袭能力的影响,组间比较采用独立样本 t 检验.结果 MSI1在前列腺癌中表达水平明显高于正常前列腺组织,差异有统计学意义(7.75±1.01比4.56±0.54,t=4.82,P＜0.01).且生存分析结果显示,低表达MSI1组的无病生存期明显长于高表达组[风险比(HR):1.71(1.15～2.53),P＜0.01].T1+T2期MSI1表达水平和T3+T4期表达水平无统计学意义(t=0.38,P＞0.05).MSI表达水平[HR:1.47(1.02～2.10),P＜0.05]、T 分期[HR:1.93(1.02～3.60),P＜0.05]及Gleason评分[HR:3.17(1.59～6.30),P＜0.01]可作为前列腺癌的预后因素.细胞计数试剂盒(CCK-8)结果,第4天Ctrl DU145细胞在波长450 nm吸光度(A)值为0.929±0.085,而shMSI1#1和shMSI1#2 DU145实验组第4天A值分别为0.687±0.005和0.711±0.018,与对照组比较差异有统计学意义(t=42.21、44.19,P＜0.01).DU145 中 ctrl 组伤 口愈合面积显著高于 si-MSI1#1 和si-MSI1#2组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现,ctrl组及si-MSI1#1 和 si-MSI1#2 组 PC3 迁移细胞分别为 790.9±80.7、403.3±49.9 和 504.6±117.3,组间比较差异有统计学意义(t=21.80、13.55,P＜0.01).结论 MSI1在前列腺癌组织中高表达且与前列腺癌患者的不良预后明显相关.抑制MSI1可有效抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力.

目的 通过检测子宫腺肌病内膜中Musashi-1(Mus1)、COX-2、Nrf-2的表达来探寻其发病机制.方法 选取浙江省宁波市妇女儿童医院2015年1月至2015年12月因子宫腺肌病切除子宫的37例患者作为实验组,因多发子宫肌瘤切除子宫的37例患者为对照组,采用免疫组织化学的方法检测Mus1、COX-2、Nrf-2在两组患者子宫内膜组织中的表达情况.结果 Mus1、COX-2、Nrf-2在两组患者的各内膜层中都具有阳性表达,3者在异位内膜中的阳性表达比在在位内膜和正常内膜中的都要高,在基底层(正常内膜及在位内膜)中的阳性表达比在正常内膜和在位内膜中的都要高,且差异都具有统计学意义(P<0.05).结论子宫内膜基底层中存在子宫内膜干细胞,它侵入子宫肌层后增殖分化形成异位内膜病灶,而 Mus1、COX-2、Nrf-2是具有干细胞特性的标记物,彼此之间相互协同,共同促进子宫腺肌病的发生发展,有望成为特异性的子宫内膜干细胞标记物.

目的 研究沉默Musashi1对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性的影响,为放射治疗提供新的增敏靶点.方法 用慢病毒载体建立Musashil(Msi1)低表达的稳转细胞株及阴性对照细胞株,将细胞分为沉默组、空白对照组和阴性对照组,通过克隆实验、 流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期,证实其放射敏感性.结果 成功构建了沉默Musashi1的HCT116细胞.沉默组的D0、Dq、N、SF2分别为1.55、0.88、1.76 Gy和0.43,空白对照组分别为2.17、1.51、2.01 Gy和0.64,阴性对照组分别为1.99、1.45、2.07 Gy和0.62.沉默组相对于空白对照组的放射增敏比为1.40,相对于阴性对照组的放射增敏比为1.28.8 Gy照射后24、48、72 h,沉默组凋亡比例始终高于阴性对照组和空白对照组(F=65.16,P<0.05),而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).12 Gy照射后48 h,沉默组细胞周期中G2/M期比例较空白对照组和阴性对照组显著下降(F=65.398,P<0.05).结论 降低Musashi1的表达对人结肠癌HCT116细胞有放射增敏作用,可能通过促进其凋亡,解除G2/M期阻滞而发挥放射增敏作用,有望成为新的增敏靶点.

目的 研究黄芩素促进骨髓间充质干细胞归巢参与溃疡性结肠炎肠黏膜屏障重建的功能.方法 提取大鼠骨髓间充质干细胞,传代培养3代后,利用流式细胞术检测细胞表面CD59、CD45表达情况.鉴定后的细胞被随机分为空白组及黄芩素处理组,后者利用100 ng/ml黄芩素对细胞培养24 h.诱导溃疡性结肠炎大鼠模型,造模成功后分别分为模型组(10只)、MSCs组(10只)及黄芩素干预MSCs组(10只),另取10只大鼠作为空白组.空白组和模型组尾静脉注射1ml无菌PBS;MSCs组尾静脉注射2×106个骨髓间充质干细胞;黄芩素干预MSCs组尾静脉注射2×106个黄芩素共培养后的骨髓间充质干细胞悬液.尾静脉回输后第5、10天,分别处死5只大鼠,采集结肠标本并制作冰冻切片.利用免疫组化法检测肠干细胞标记物Musashi-1的表达情况;Western blot法检测Lgr5和Ephrin-B3蛋白在各组大鼠结肠中的表达水平变化.结果 细胞传代培养后呈现贴壁生长.流式细胞术结果显示,传代3代后的细胞为CD90 +/CD45-,属于骨髓间充质干细胞.免疫组化结果显示,尾静脉注射后第5天,各组Musashi-1积分值差异无统计学意义.给药后第10天,黄芩素干预MSCs组的Musashi-1积分值升高,且高于第10天MSCs组的积分值.Western blot结果表明,黄芩素干预MSCs组结肠组织的Lgr5和Ephrin-B3表达量高于空白组、模型组及MSCs组.结论 黄芩素可促进骨髓间充质干细胞归巢参与溃疡性结肠炎肠黏膜屏障功能的重建,对溃疡性结肠炎具有治疗效果.

目的:探讨结肠癌病灶内Runt相关转录因子2(RunX2)与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性.方法:90例原发性结肠癌患者作为结肠癌组、68例良性结肠息肉患者作为结肠息肉组,对比两组病灶组织中RunX2及增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的差异,进一步采用Pearson检验评估结肠癌组织中RunX2表达量与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的相关关系.结果:结肠癌组病灶中RunX2 mRNA的表达量高于结肠息肉组.结肠癌组病灶中增殖基因GTPBP4、HOXB7、ZNF331、ADAM17、HSP60 mRNA的表达量高于结肠息肉组;抑癌基因ATF3、FOXN3、OTUD1、NDRG2 mRNA的表达量低于结肠息肉组;血管新生分子Musashi 1、NF-κB、RegⅣ、STAT3mRNA的表达量高于结肠息肉组.结肠癌病灶中RunX2 mRNA表达量与上述增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量直接相关.结论:结肠癌病灶内RunX2异常高表达,且具体表达量与癌细胞的增殖活性、血管新生活性均呈正相关,是导致结肠癌发生发展的重要分子靶点.

目的:探讨结肠癌手术切除病灶中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199表达量与血管新生 、上皮间质转化的相关性.方法:选择2015年8月 ～2017年8月间在本院接受根治性手术治疗的结肠癌患者60例,留取术中结肠癌组织标本并作为结肠癌组,留取癌旁正常组织标本作为癌旁组织组.采用荧光定量PCR法检测不同性质结肠组织中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199及血管新生 、上皮间质转化相关基因的表达量.结果:结肠癌组中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199 mRNA的表达量均高于癌旁组织组;血管新生相关基因ANGPTL4、Apelin-13、DLL1、VEGF、HIF-αmRNA的表达量高于癌旁组织组,TSP-1 mRNA的表达量低于癌旁组织组;上皮间质转化相关基因E-cadherin mRNA的表达量低于癌旁组织组,Vimentin、N-cadherin、Twist、Snail mRNA的表达量高于癌旁组织组.相关性分析发现,结肠癌组织中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199表达量与血管新生基因 、上皮间质转化基因直接相关.结论:结肠癌组织中存在SphK1、FAK、Musashi 1、CA199基因异常表达,且其表达量与肿瘤血管新生 、上皮间质转化进程直接相关.