目的:初步探索ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3（RAC3）在1型糖尿病（T1DM）和树突状细胞（DC）中的作用。方法:选取来自广东省T1DM转化医学研究中2011至2016年入组后规律随访的T1DM患者作为病例组，选择2011至2016年来自中山大学附属第三医院就诊的正常糖耐量者作为健康对照组。病例组和对照组均在筛选阶段进行全外显子组测序，在验证阶段进行基因分型。使用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建C57BL/6小鼠背景的RAC3全身敲除（KO）小鼠模型。使用聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blotting法分别验证RAC3在DNA、RNA和蛋白水平是否被敲除。通过流式细胞染色检测RAC3 KO小鼠和同窝野生对照（WT）小鼠（每组3只）的DC分化比例以及主要组织相容性复合体Ⅱ类分子（MHC Ⅱ）、CD86和CD80等成熟活化指标的表达水平。采用logistic回归分析法比较病例组和对照组之间等位基因频率分布的差异。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:筛选阶段共纳入72例T1DM患者和487名健康对照，验证阶段共纳入122例T1DM患者和577名健康对照。筛选阶段结果显示，T1DM患者中RAC3 rs4969478位点的等位基因T频率高于健康对照［分别为7.64%（11/144）和1.13%（11/974），OR=9.38， P<0.001］。验证阶段基因分型结果同样显示，T1DM患者中RAC3 rs4969478位点的等位基因T频率高于健康对照［分别为4.50%（11/244）和1.13%（13/1 154），OR=4.14， P<0.01］。WT小鼠和RAC3 KO小鼠的DC分化比例差异无统计学意义（分别为85.6%±1.1%和83.3%±0.25%， P=0.08）。WT小鼠和RAC3 KO小鼠DC中MHC Ⅱ、CD86和CD80等成熟活化指标的表达水平差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:遗传学研究提示RAC3可能是人类T1DM的易感基因，但可能不通过DC参与T1DM的发生。

目的:探讨AURKAPS1在肝癌细胞中的表达、功能和分子机制，为肝癌的防治提供新思路。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对肝癌细胞系和正常肝脏上皮细胞进行检测；将肝癌细胞系随机分为空白组，AURKAPS1组、RAC1组和AURKAPS1+RAC1组，其中空白组表示肝癌细胞不进行任何干预，AURKAPS1组中的肝癌细胞仅接受AURKAPS1干预，RAC1组为转染RAC1的肝癌细胞，AURKAPS1+RAC1组表示同时转染AURKAPS1和RAC1，采用实时荧光定量PCR技术检测4组细胞中RAC1的表达；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术和Transwell转移法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移能力；蛋白质免疫印迹法测定各组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)和RAC1蛋白表达；间接免疫荧光检测细胞中ERK的表达。组间独立样本采用 t检验，多组间进行 F检验、LSD检验。 结果:肝癌组织中RAC1 mRNA的表达量(0.98±0.08)显著高于正常人肝上皮细胞组织(0.72±0.03)，差异有统计学意义( t＝30.431， P<0.05)；AURKAPS1组(1.03±0.10)、RAC1组(1.05±0.09)及AURKAPS1+RAC1组(1.16±0.07)的RAC1 mRNA的表达量均高于空白组(1.16±0.07)，AURKAPS1+RAC1组的RAC1 mRNA表达量也显著高于分别转染AURKAPS1、RAC1的肝癌细胞组，差异有统计学意义( F＝5.991， P<0.05)；CCK-8法检测肝癌细胞的增殖，随着时间的增加，除空白组，其余3组的吸光度( A) 450值均增加，96 h后AURKAPS1+RAC1组的 A450值显著高于RAC1组及AURKAPS1组( F0 h＝2.941， F24 h＝26.454， F48 h＝104.60， F72 h＝319.555， F96 h＝564.65) P<0.05；AURKAPS1组[(5.89±3.82)%]、RAC1组[(5.81±3.85)%]及AURKAPS1+RAC1组[(4.23±4.15)%]的总凋亡率均低于空白组[(6.75±3.36)%]，且AURKAPS1+RAC1组的总凋亡率显著低于RAC1、AURKAPS1组， F＝77.369， P<0.05；AURKAPS1组(131.24±9.25)、RAC1组(129.87±9.41)及AURKAPS1+RAC1组(153.62±7.48)的穿膜细胞数均高于空白组(117.64±10.53)，且AURKAPS1+RAC1组的穿膜细胞数显著高于RAC1组及AURKAPS1组( F＝91.118， P<0.05)；Western blot法检测4组肝癌细胞的ERK及RAC1蛋白表达，转染后3组的ERK及RAC1蛋白的相对表达量均高于空白组，且AURKAPS1+RAC1组的ERK及RAC1蛋白的相对表达量显著高于RAC1组及AURKAPS1组( Fβ-actin＝0.000， FERK＝68.342， FRAC1＝52.868， P<0.05)；AURKAPS1组[10(40.00)]、RAC1组[11(44.00)]及AURKAPS1+RAC1组[19(76.00)]的ERK阳性率均高于空白组[4(16.00)]，且AURKAPS1+RAC1组的ERK阳性率显著高于RAC1组及AURKAPS1组( χ2＝6.650， P<0.05)。 结论:长链非编码RNA AURKAPS1能够使RAC1蛋白的表达量增加，活化ERK信号通路，进一步影响肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移，促进肝癌细胞的生长和进展。

目的:探索ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3（ras-related C3 botulinum toxin substrate 3，RAC3）在脑胶质瘤组织的表达情况，及其对脑胶质瘤细胞迁移与侵袭能力的影响。方法:用免疫组化实验检测商丘市第一人民医院神经外科收治的57例脑胶质瘤患者组织及其癌旁组织标本中RAC3的表达情况。将脑胶质瘤细胞U87MG分为实验组和对照组，实验组U87MG细胞转染RAC3-siRNA质粒，对照组U87MG细胞转染MOCK-siRNA质粒；荧光定量PCR检测各组细胞RAC3 mRNA含量，蛋白质免疫印迹法检测各组细胞RAC3、MMP2的表达情况；Transwell检测各组细胞的迁移与侵袭能力。结果:脑胶质瘤患者组织RAC3阳性率为89.47%（51/57），癌旁组织中表达率为14.04%（8/57），RAC3在脑胶质瘤组织中的表达率显著高于癌旁组织，差异具有统计学意义（ P<0.01）。转染siRNA后，实验组和对照组U87MG细胞中RAC3 mRNA表达量分别为1.23±0.20和0.43±0.12，RAC3蛋白表达量分别为1.19±0.11和0.23±0.08，MMP2蛋白表达量分别为1.19±0.11和0.23±0.08，实验组细胞MMP2表达显著下降（ P<0.05）。实验组和对照组U87MG细胞transwell实验侵袭细胞数分别为（22±5）和（45±8）个，迁移细胞分别为（34±6）和（90±11）个，实验组U87MG细胞迁移（ P<0.05）和侵袭能力（ P<0.05）显著下降。 结论:RAC3在脑胶质瘤组织中高表达可能与其发展的恶性程度相关，且通过调控MMP2的表达影响脑胶质瘤细胞的迁移与侵袭能力。

目的:评价七氟烷麻醉诱发新生大鼠远期学习记忆能力障碍与突触后致密蛋白95(PSD-95)/Kalirin-7/Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物1(Rac1)信号通路的关系。方法:SPF级雄性Wistar大鼠60只，7日龄，体重12~18 g，采用随机数字表法为分为5组( n＝12)：对照组(C组)、1%七氟烷麻醉2 h组(S 1组)、1%七氟烷麻醉4 h组(S 2组)、2%七氟烷麻醉2 h组(S 3组)和2%七氟烷麻醉4 h组(S 4组)。麻醉后第4、8和12周行Morris水迷宫实验。末次Morris水迷宫实验完成后，处死大鼠，取海马组织，HE染色观察病理学结果，TUNEL染色计算神经元凋亡率，分别采用Western blot法和qRT-PCR法检测PSD-95、Kalirin-7和Rac1及其mRNA的表达。 结果:与C组比较，麻醉后第4、8和12周S 1组、S 2组、S 3组、S 4组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，目标象限停留时间缩短，海马神经元凋亡率升高，磷酸化Rac1/Rac1比值降低，PSD-95、Kalirin-7及其mRNA表达下调( P<0.05)；与S 4组比较，S 1组、S 2组、S 3组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增多，目标象限停留时间延长，海马神经元凋亡率降低，磷酸化Rac1/Rac1比值升高，PSD-95和Kalirin-7及其mRNA表达上调( P<0.05)，海马组织病理改变程度减轻。 结论:七氟烷麻醉诱导新生大鼠远期学习记忆能力障碍的机制可能与抑制海马PSD-95/Kalirin-7/Rac1信号通路活性有关。

目的:建立高效的人肠三叶因子（ITF）重组表达及纯化策略，观察重组人ITF（rhITF）对烧伤小鼠肠黏膜损伤与修复的作用并探讨其机制。方法:采用实验研究方法。采用新型酵母表达载体pGAPZαA和酵母菌X33重组表达ITF，并通过金属螯合亲和层析与阴、阳离子交换层析法纯化蛋白，行非还原十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定rhITF。rhITF与胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液按体积比1∶1混合，分别作用0.5、1.0、1.5、2.0 h和1.0、2.0、4.0 h后行非还原SDS-PAGE，分析rhITF的稳定性。按随机数字表法将105只6~8周龄BALB/c雄性小鼠分为假伤组（30只）、单纯烧伤组（45只）、烧伤+rhITF组（30只）。将单纯烧伤组和烧伤+rhITF组小鼠背部造成30%体表总面积Ⅲ度烧伤，假伤组小鼠模拟致假伤，烧伤+rhITF组小鼠伤后灌胃1 mg/kg rhITF，其余2组小鼠伤后给予等量生理盐水。伤后24 h，取15只单纯烧伤组小鼠，制备烧伤血清，用于细胞实验。伤后3、5、7 d，每组各取10只小鼠处死后取小肠组织，苏木精-伊红染色观察肠黏膜病理变化，分光光度法和酶联免疫吸附测定法测定肠组织二胺氧化酶（DAO）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。取3批人结直肠腺癌HT-29细胞，分为阴性对照组、25 μg/mL rhITF组、50 μg/mL rhITF组（样本数为3），正常对照组、烧伤血清组、烧伤血清+rhITF组（样本数为3），CK869抑制剂组、CK666抑制剂组和溶剂对照组（样本数为2），分别进行相应处理，Transwell实验观察培养12 h后细胞移行。另取2批HT-29细胞，每批细胞均分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清+rhITF组（样本数均为6），培养24 h后，蛋白质印迹法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1（Rac1）及肌动蛋白相关蛋白2/3（Arp2/3）复合亚基1B（ARPC1B）蛋白表达，活化磁珠下拉实验检测细胞Rac1活性。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、SNK检验。结果:每升发酵液获得rhITF 82.35 mg，蛋白纯度高达98%，且具有良好的抗原特异性。rhITF在胃蛋白酶和胰蛋白酶溶液中较稳定，与胰蛋白酶溶液作用2.0 h后仍有45%残余，与胃蛋白酶溶液作用4.0 h后仍有90%残余。假伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜未见充血、水肿，单纯烧伤组小鼠伤后各时间点肠黏膜主要病理表现为充血、水肿、糜烂及出血。烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5 d肠黏膜主要以充血、水肿为主，伤后7 d肠黏膜水肿和充血减轻。与单纯烧伤组比较，假伤组、烧伤+rhITF组小鼠伤后3、5、7 d肠组织DAO和LDH活性显著升高（ P<0.05或 P<0.01）。培养12 h后，25 μg/mL rhITF组细胞移行数为（58±12）个，显著多于阴性对照组的（16±5）个（ P<0.01），显著少于50 μg/mL rhITF组的（123±9）个（ P<0.05）。培养12 h后，烧伤血清组细胞移行数为（60±13）个，显著少于正常对照组的（143±11）个和烧伤血清+rhITF组的（138±8）个（ P<0.05）。培养12 h后，溶剂对照组细胞移行数为（155±9）个，明显多于CK666抑制剂组的（33±5）个、CK869抑制剂组的（28±5）个（ P<0.01）。培养24 h后，烧伤血清组细胞AMPK、Rac1蛋白表达量与正常对照组、烧伤血清+rhITF组相近（ P>0.05），p-AMPK蛋白表达量明显高于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01），ARPC1B蛋白表达量明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05）。培养24 h后，烧伤血清组细胞Rac1活性明显低于正常对照组、烧伤血清+rhITF组（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:本研究获得的rhITF具有较高的纯度和超强的稳定性，能耐受极端pH和蛋白酶水解，减轻烧伤小鼠肠黏膜损伤。rhITF能通过抑制AMPK磷酸化维持Rac1-Arp2/3活性，促进肠上皮细胞移行，加速肠黏膜修复。

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)是Ras GTPase超家族的重要成员,在细胞的运动、增殖、黏附等方面发挥核心作用,同时还参与调节血管通透性以及细胞屏障功能.近年来,RAC1在多种肺部疾病发生、发展过程的作用逐渐受到关注,并逐渐成为肺部疾病研究的新方向.本文系统阐述了RAC1的生物学特性并总结了其在肺肿瘤、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤和动脉型肺动脉高压中的功能及分子机制,以期为肺部疾病的治疗提供新思路.

目的 探讨ras相关C3肉毒杆菌毒素底物3(RAC3)对早期滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 收集2015年5月至2016年5月在海军军医大学(第二军医大学)长征医院门诊或住院的不明原因自然流产和人工流产妊娠妇女的绒毛组织各20例,应用qPCR法检测绒毛组织中RAC3 mRNA的表达.取C57/B6小鼠孕6.5、14.5和19.5 d的胎盘组织进行mRNA芯片检测.在早期人滋养层细胞系HTR-8/SVneo中干扰和过表达RAC3后,应用CCK-8法和Transwell实验检测RAC3对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果不明原因自然流产绒毛组织中RAC3 mRNA的表达低于人工流产绒毛组织(P<0.05).小鼠孕6.5、14.5 d胎盘组织中Rac3 mRNA的表达高于孕19.5 d(P均<0.05).与对照组相比,干扰RAC3表达后HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱(P均<0.05),过表达RAC3后HTR-8/SVneo细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(P均<0.01).结论 RAC3对早期滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有重要调控作用.

营养过剩和缺乏运动将引起肥胖、2型糖尿病(T2DM)等代谢性疾病的发生,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是众多代谢性疾病的重要病理生理学基础.目前普遍认为运动通过调节机体糖代谢可明显改善IR的症状,已被广泛应用于肥胖、T2DM、高脂血症等一系列代谢性疾病的防治,但目前对运动防治代谢性疾病的确切调节机制仍不完全清楚.最新研究发现,哺乳动物组织细胞内重要信号转导因子Ras-相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)参与肌动蛋白细胞骨架重构,调节骨骼肌细胞葡萄糖转运体4(Glucose transporter 4,GLUT4)转位,在运动促进骨骼肌葡萄糖转运过程中发挥重要作用.本文对Rac1在运动促进骨骼肌组织葡萄糖摄取中的作用研究进展进行综述,以期为揭示运动防治代谢性疾病的机制提供理论依据.

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)信号通路对巨噬细胞骨架重排及吞噬功能的影响.方法 小鼠巨噬细胞系RAW264.7分为空白组、阴性对照组及TLR4-RNA干扰(RNAi)组.将携带TLR4基因短发卡RNA(shRNA)的慢病毒颗粒及携带无意义对照序列慢病毒颗粒分别转染至TLR4-RNAi组及阴性对照组,空白组不进行转染.Western印迹法检测TLR4基因沉默效率.实时荧光定量PCR检测各组细胞PI3K、Rac1 mRNA的表达,Western印迹法测各组细胞PI3K、磷酸化Rac1(p-Rac1)、Rac1蛋白表达;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化.流式细胞术检测各组细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)的能力,用平均荧光强度(MFI)和吞噬细胞百分比(吞噬％)表示.结果 TLR4-shRNA慢病毒可成功转染RAW264.7细胞,转染效率为80％ ～90％,TLR4基因沉默效率为(63±4)％.沉默TLR4后,TLR4-RNAi组TLR4 mRNA和蛋白相对表达量(0.20±0.03、0.37±0.04)、PI3K mRNA和蛋白相对表达量(0.64±0.06、0.75±0.06)以及Rac1 mRNA、蛋白和p-Rac1蛋白相对表达量(0.75±0.04、0.76±0.01、0.74±0.05)均显著低于阴性对照组和空白组(均P<0.01).细胞骨架变化:沉默TLR4后细胞伪足伸出短少、僵硬,吞噬FITC-E.coli能力较弱,空白组和阴性对照组细胞伪足伸出良好,吞噬FITC-E.coli能力强.吞噬FITC-E.coli能力:TLR4-RNAi组MFI和吞噬％[(7453±564)、(70.20±2.27)％]均显著低于空白组和阴性对照组(均P<0.01).基础状态下及沉默TLR4后,TLR4、PI3K、Rac1 mRNA、蛋白表达与MFI、吞噬％均呈正相关(均P<0.05).结论 TLR4-PI3K-Rac1通路参与巨噬细胞骨架的重排,降低巨噬细胞的吞噬能力.

目的 筛选以二仙汤干预去卵巢骨质疏松大鼠后的差异表达蛋白质,探讨二仙汤防治骨质疏松的分子作用机制.方法 雌性SD大鼠,按体质量随机分为3组,即假手术组、模型组、二仙汤组,其中假手术组和模型组灌胃生理盐水,二仙汤组按生药量12 g·kg-1灌胃,每日1次,连续给药90 d.取大鼠股骨,运用同位素相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)联合纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)高分辨质谱技术的定量蛋白质组学方法检测骨蛋白,采用ProteinDiscovery软件进行分析和鉴定差异蛋白质,通过生物信息学分析差异表达的蛋白质功能.结果 质谱分析共鉴定出862个差异蛋白,其中二仙汤组与模型组相比较,共发现82个与假手术组趋势一致的差异蛋白,上调蛋白45个,下调蛋白37个.生物信息学分析发现,差异表达的蛋白大多数属于水解酶、核酸结合类蛋白、受体类蛋白等.结论 细胞色素b-245轻链、促分裂原活化蛋白激酶-1、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物-1等相关差异蛋白质可能是二仙汤防治骨质疏松症的作用靶点.