目的:对良性气道狭窄（BAS）患者肉芽组织成纤维细胞进行蛋白质组学分析，以进一步揭示BAS的发病机制。方法:取5例BAS患者的肉芽组织（BAS组）和3例肺癌患者的正常支气管组织（对照组）进行成纤维细胞原代培养，用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术分析成纤维细胞的蛋白质组表达情况，筛选差异表达蛋白，并使用基因本体（GO）数据库、京都基因和基因组（KEGG）数据库和重复出现邻近基因检索工具（STRING）数据库对差异表达蛋白的功能、代谢通路和蛋白相互关系进行富集分析。结果:共筛选出93个差异表达蛋白。其中有36个差异表达蛋白在BAS肉芽组织成纤维细胞中显著下调，57个差异表达蛋白显著上调。差异表达蛋白主要定位于细胞膜和细胞外区域，参与离子结合功能、代谢活性功能，主要参与的通路有糖酵解-糖异生代谢、细胞外基质-受体结合、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-AKT信号传导、复杂环境中的微生物代谢和次级代谢物合成。结论:BAS狭窄部位肉芽组织成纤维细胞的细胞外基质-受体结合异常、PI3K-AKT信号通路异常和代谢异常可能与BAS的发生发展有关。

目的:评价右美托咪定对烧伤大鼠肠道屏障损伤时蛋白质组学的影响。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠64只，体质量250~300 g，8~12周龄，采用随机数字表法分为4组( n＝16)：假手术组(Sham组)、假手术＋右美托咪定组(Sham-Dex组)、烧伤组(Burn组)和烧伤＋右美托咪定组(Burn-Dex组)。Burn组和Burn-Dex组制备大鼠背部(约40%全身体表面积)Ⅲ度烧伤模型，Sham组和Sham-Dex组大鼠仅背部脱毛用烫头以皮温接触。Sham-Dex组和Burn-Dex组大鼠在造模后分别静脉输注右美托咪定5 μg·kg -1·h -1 3 h，Sham组和Burn组大鼠连续输注相同剂量0.9%生理盐水。于停药后6 h时采集大鼠腹主动脉血，随后处死大鼠取肠组织，采用HE染色法观察肠组织病理学结果并行Chiu评分，测定血浆荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(FITC-Dextran)和二胺氧化酶(DAO)浓度。对肠组织蛋白质进行同位素相对和绝对定量标记、液质联用-串联质谱分析，筛选差异表达蛋白质，对差异表达蛋白进行STRING蛋白质互作网络分析、基因本体分析(GO)和KEGG通路分析。 结果:与Sham组比较，Burn组和Burn-Dex组烧伤后大鼠肠组织Chiu评分和停药后6 h时血浆FITC-Dextran和DAO浓度升高( P<0.05)；与Burn组比较，Burn-Dex组烧伤后大鼠肠组织Chiu评分和停药后6 h时血浆FITC-Dextran和DAO浓度降低( P<0.05)。通过STRING蛋白质互作网络分析、GO分析和KEGG通路分析得出满足条件的蛋白质基因为Psmb10、Psmb7、RGD1310507和LOC100909441，其中Psmb10和Psmb7存在相互作用，且在蛋白酶体等多种途径中显著富集。 结论:右美托咪定可引起烧伤大鼠肠道屏障损伤时蛋白表达的变化，Psmb10和Psmb7可能是其作用靶点。

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)/内皮祖细胞(EPC)作为种子细胞构建的基质依赖型组织工程骨(ECM-TEB)修复大鼠股骨缺损的效果。方法:分离培养骨髓来源的MSC和EPC并进行功能鉴定，种植上架于纳米晶胶原基人工骨颗粒，培养14 d后冻干，获得MSC/EPC ECM-TEB和MSC ECM-TEB。扫描电镜观察MSC和EPC在支架表面的生长形态。分别提取MSC ECM-TEB蛋白浸提液(对照组)和MSC/EPC ECM-TEB蛋白浸提液(实验组)，加入EPC培养系统中进行迁移、划痕修复、管腔形成检测；另加入MSC培养系统中进行茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测，观察两组细胞募集、血管生成和成骨分化情况。选取12只SD大鼠，建立股骨缺损模型，按照随机数字表法分为：(1)假手术组：仅在缺损处进行清创处理；(2)MSC ECM-TEB组：在缺损处植入MSC ECM-TEB；(3)MSC/EPC ECM-TEB组：在缺损处植入MSC/EPC ECM-TEB，每组4只大鼠。2个月后行Micro-CT检查和缺损区Masson三色染色观察骨缺损修复情况。冻干后低温保存3个月，采取同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记蛋白质谱检测MSC ECM-TEB和MSC/EPC ECM-TEB在成血管方面的差异，并采用基因本体论/京都基因与基因组百科全书技术(GO/KEGG)功能富集方法分析其原因。结果:MSC和EPC在支架表面生长、增殖良好，形成光滑的细胞层状结构。实验组在细胞迁移数、划痕修复比例和管腔形成长度分别为(121.6±8.3)个、(61.5±5.9)%、(11.3±0.6)mm，较对照组显著增多[(85.0±6.7)个、(39.3±3.6)%、(5.9±0.4)mm]( P均<0.01)。茜素红染色和ALP染色结果显示，实验组钙结节矿化面积比例显著增加[(38.8±3.3)%∶(49.9±3.0)%、(38.8±2.4)%∶(45.3±3.3)%] ( P均<0.05)。Micro-CT和Masson染色结果表明，MSC/EPC ECM-TEB组骨缺损修复良好，MSC ECM-TEB组仅形成少量新骨，假手术组几乎没有新骨形成；骨体积分数、骨小梁数量和骨小梁厚度差异均有统计学意义( P<0.05)。蛋白质谱分析结果表明，与MSC ECM-TEB组相比，MSC/EPC ECM-TEB组中有83个血管生成相关的因子显著上调(差异倍数>2， P<0.05)；GO/KEGG功能富集分析显示，与MSC ECM-TEB相比，MSC/EPC ECM-TEB在"血管发育"等生物过程存在明显差异( P<0.01)，"血管平滑肌收缩通路"等显著增强( P<0.01)。 结论:与MSC ECM-TEB相比，MSC/EPC ECM-TEB在细胞募集、血管生成和新骨生成方面显著增强，是一种更佳的可用于创伤性骨缺损修复的组织工程骨构建策略。

目的:通过同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)鉴定和分析布加综合征(BCS)及对照组血清蛋白表达差异。方法:收集蚌埠医学院第一附属医院首次住院治疗的30例BCS患者与30例下肢静脉曲张患者血清，利用iTRAQ技术检测出具有显著差异表达蛋白质，探究差异蛋白的生物学信息及相关信号通路。应用Omics Bean数据库对差异蛋白进行基于GO的生物学过程(BP)、细胞成分(CC)及分子功能(MF)分类，应用STRING(http：//string-db.org/)数据库对蛋白质相互作用网络(PPI)分析。结果:共检测出差异蛋白143种，BCS组有76个蛋白显著升高，有67个蛋白显著降低( P值均<0.05)。参与的主要生物学过程为防御反应、囊泡介导转运、免疫效应过程、补体激活和血液凝集等重要生物学过程( P<0.05)[注：该处 P值是通过Fisher精确检验方法，富集分析的 P值只有矫正值的错误发现率(FDR)]。 结论:运用iTRAQ技术鉴定出BCS组与对照组的差异蛋白，部分蛋白可能成为诊断BCS的特异性血清生物标志物。

目的:利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析寻找单纯股骨骨折和股骨骨折合并颅脑损伤患者早期差异表达基因。方法:收集2019年5月至2020年5月就诊于河北医科大学第二医院骨科诊断为颅脑损伤合并股骨骨折患者和单纯股骨骨折患者各5例，分别取其伤后第1天和第3天的血清，应用iTRAQ技术比较两组患者血清蛋白组学的差异，用 T-test检验对蛋白质定量结果进行统计分析。 结果:两组两个时间点均上调差异表达基因涉及的KEGG通路包括蛋白酶体、Wnt信号通路和HIF-1信号通路( P<0.05)。根据PPI可视化网络互作分析，各差异基因在第1天和第3天均上调且密切交互的基因依次为蛋白酶体亚单位α2型(PSMA2)第1天实验组高于对照组[(236.40±15.08) 比 (77.56±3.86)， F＝0.316， P<0.05]，第3天实验组高于对照组[(376.20±10.69) 比 (80.14±6.56)， F＝1.191， P<0.05]，差异有统计学意义、纤溶酶原激活物抑制物1型(SERPINE1)第1天实验组高于对照组[(107.14±7.47) 比 (49.50±4.53)， F＝1.566， P<0.05]，第3天实验组高于对照组[(78.74±8.67) 比 (33.40±3.85)， F＝4.605， P<0.05]、原肌球蛋白4(TPM4)第1天实验组高于对照组[(207.40±11.73) 比 (80.60±6.27)， F＝0.010， P<0.05]，差异有统计学意义，第3天实验组高于对照组[(4 230.18±182.35) 比 (1 325.66±96.43)， F＝2.057， P<0.05]，差异有统计学意义、胰岛素样生长因子(IGF-1)第1天实验组高于对照组[(4 974.81±163.97) 比 (978.82±110.92)， F＝0.343， P<0.05]，差异有统计学意义，第3天实验组高于对照组[(907.46±95.98) 比 (355.51±21.95)， F＝4.240， P<0.05]，差异有统计学意义、蛋白酶体亚单位α-4型(PSMA4)第1天实验组高于对照组[(1 276.51±128.59) 比 (586.86±72.51)， F＝2.981， P<0.05]，差异有统计学意义，第3天实验组高于对照组[(1 648.67±107.21) 比 (541.43±55.93)， F＝1.559， P<0.05]，差异有统计学意义，和肌球蛋白调节轻链10(MYL10)第1天实验组高于对照组[(118.84±12.78) 比 (51.43±5.48)， F＝4.139， P<0.05]，差异有统计学意义，第3天实验组高于对照组[(168.14±12.12) 比 (58.01±6.07)， F＝4.063， P<0.05]，差异有统计学意义。 结论:SERPINE1、TPM4、MYL10、IGF-1等基因可能与早期颅脑损伤后骨折愈合加快密切相关，Wnt信号通路和HIF-1信号通路在其中发挥重要作用。

目的:探讨急性创伤性颅脑损伤(TBI)后突触形成相关蛋白突触关联蛋白(Snap)25、神经突触素(Synapsin)1和线粒体功能异常相关蛋白单胺氧化酶B(Maob)、NADH脱氢酶(辅酶Q)Fe-S蛋白(Ndufs)2在大鼠海马组织中的表达及其意义。方法:采用大鼠可控性皮质打击伤(CCI)建立中度TBI模型，CCI后48 h(CCI组， n＝13)为急性期观察点；假手术组( n＝13)与CCI组处理步骤一致，仅不打击皮质。采用超高效液相色谱和同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)蛋白质质谱分析CCI组( n＝5)与假手术组( n＝5)海马组织之间的差异蛋白。采用生物信息学方法分析差异蛋白的细胞组分、生物进程和分子功能，并进行经典通路富集分析及疾病功能富集分析。采用透射电子显微镜观察两组海马组织神经元核和线粒体的超微结构变化。采用蛋白质免疫印迹法(WB)检测Snap25、Synapsin1、Maob以及Ndufs2蛋白的表达。 结果:蛋白质质谱数据结果显示，与假手术组相比，CCI组上调的差异蛋白共55种(差异倍数≥1.50)，下调的差异蛋白共110种(差异倍数≤0.65)。生物信息学分析结果显示，富集的经典通路包括突触形成信号通路[－ log10( P值)＝7.29]和线粒体功能障碍信号通路[－ log10( P值)＝4.06]等；突触形成信号通路中富集了Snap25和Synapsin1等蛋白；线粒体功能障碍信号通路中富集了Maob和Ndufs2等蛋白。透射电子显微镜观察发现，CCI组出现神经元核固缩、线粒体嵴断裂。WB检测结果显示，与假手术组( n＝5)比较，CCI组( n＝5)Snap25(分别为0.594±0.025、1.000±0.141， t＝4.92)、Synapsin1(分别为0.597±0.077、1.000±0.100， t＝5.56)、Maob(分别为0.528±0.042、1.000±0.160， t＝4.94)以及Ndufs2(分别为0.549±0.057、1.000±0.131， t＝5.45)蛋白的相对表达量均下降，差异均具有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:突触形成相关蛋白Snap25、Synapsin1和线粒体功能异常相关蛋白Maob、Ndufs2在急性TBI大鼠海马组织中的表达下降，可能参与TBI的发病机制。

目的:定量分析SD大鼠非动脉炎性前部缺血性视神经病变(NAION)模型中视神经组织蛋白表达变化，并对差异蛋白进行生物信息学分析。方法:选取10只8周龄体质量200~250 g的SPF级雄性SD大鼠，采用孟加拉玫瑰红联合激光光动力方法建立NAION模型，最终选取4只造模成功的大鼠作为NAION模型组，同时取4只体质量和周龄相匹配的健康、无眼疾SD大鼠作为正常对照组。于造模后7 d，分离各组大鼠球后视神经，采用酶切法进行样本制备，采用同位素标记相对和绝对定量标记结合液相色谱-串联质谱技术对组织蛋白进行质谱鉴定和定量检测，选取组间表达倍数大于1.5倍且差异有统计学意义( P<0.05)的蛋白为差异蛋白，并对差异蛋白进行生物信息学分析。 结果:造模后3 d，NAION模型组大鼠视盘隆起，荧光素眼底血管造影图像显示视盘区有荧光素钠渗漏，模型建立成功。共鉴定出1 291个可定量蛋白，其中差异蛋白80个。与正常对照组比较，NAION模型组中表达上调的蛋白5个，表达下调的蛋白75个。V型胶原α1链(Col5A1)和cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基β(Prkacb)、G蛋白相关支架蛋白(Dlg1)等蛋白表达升高；神经微丝蛋白(Nefm)、微管相关蛋白1b(Map1b)、Ras相关蛋白(Rala)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(Pkn2)、血小板活化因子乙酰水解酶IB亚基(Pafah1b1)等蛋白表达降低。差异蛋白主要参与细胞骨架的调节、细胞对缺氧的反应、轴突生成及延伸、突触调节、神经元凋亡调控、轴浆运输等生物学进程。京都基因与基因组通路富集分析结果显示，差异蛋白主要参与代谢通路、突触囊泡循环、血小板活化等信号通路。结论:神经生长、能量代谢、轴浆运输及凋亡等信号通路相关蛋白的表达共同参与NAION中神经细胞的凋亡。

目的:观察质量分数1%阿托品对豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)进展的防控作用及其潜在的生物学机制。方法:选取屈光状态正常的3周龄三色豚鼠69只，采用随机数字表法将其随机分为正常对照组19只、FDM模型组19只、FDM+阿托品组19只和阿托品组12只。采用半透明乳胶气球遮盖右眼的方法建立FDM模型，正常对照组不进行实验干预；FDM模型组单纯遮盖右眼4周；FDM+阿托品组遮盖右眼4周，同时每日使用1%阿托品凝胶点眼1次；阿托品组每日使用1%阿托品凝胶点眼1次，共4周。分别于实验前、实验2周和实验4周时采用带状光检影镜进行屈光度测定，采用眼科A型超声仪测量眼轴长度。实验4周时采集完整眼球制作石蜡切片，光学显微镜下观察巩膜组织形态学变化；采集后极部巩膜组织，透射电子显微镜下观察巩膜组织超微结构变化；采用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)联合液相色谱－串联质谱(LC-MS/MS)技术进行巩膜组织蛋白质质谱检测。结果:正常对照组、FDM模型组、FDM+阿托品组和阿托品组实验眼不同时间点屈光度总体比较，差异均有统计学意义( F分组＝138.892， P<0.001； F时间＝167.270， P<0.001)，其中FDM模型组实验2周和4周、FDM+阿托品组实验4周较正常对照组屈光度向近视化方向发展，实验2周和4周FDM+阿托品组较FDM模型组屈光度向远视化方向发展，屈光度比较差异均有统计学意义(均 P<0.001)。正常对照组、FDM模型组、FDM+阿托品组和阿托品组实验眼不同时间点眼轴长度总体比较差异均有统计学意义( F分组＝32.346， P<0.001； F时间＝353.797， P<0.001)，其中FDM模型组实验2周和4周、FDM+阿托品组实验4周眼轴长度均长于相应时间点正常对照组，FDM+阿托品组实验2周和4周眼轴长度均短于相应时间点FDM模型组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。FDM模型组豚鼠后极部巩膜胶原纤维排列疏松且紊乱，FDM+阿托品组后极部巩膜胶原纤维排列较规则。正常对照组、FDM模型组、FDM+阿托品组和阿托品组后极部巩膜厚度值分别为(141.74±16.98)、(101.46±9.15)、(112.74±6.24)和(134.30±18.19)μm，总体比较差异有统计学意义( F＝6.709， P＝0.005)，其中FDM模型组后极部巩膜厚度明显小于正常对照组和FDM+阿托品组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。正常对照组、FDM+阿托品组和阿托品组后极部巩膜胶原纤维直径从内到外逐渐增大，FDM模型组后极部巩膜组织内、中、外层纤维直径均较正常对照组减小。巩膜组织蛋白质组学分析发现，FDM模型组与正常对照组以及FDM+阿托品组与FDM模型组间差异倍数均在1.30倍及以上的蛋白85个，其中阿托品干预上调蛋白38个，下调蛋白47个。GO富集分析发现，生物过程主要涉及生物调节、细胞过程、定位及代谢过程等，分子功能主要涉及结合、催化活性、分子功能调控、分子活性及转运活性等，细胞成分主要涉及细胞解剖实体、细胞内物质及含蛋白的复合体。 结论:阿托品可增加FDM模型豚鼠巩膜胶原纤维直径，改善胶原纤维排列，抑制巩膜变薄，其控制近视进展的机制可能与巩膜细胞间紧密连接、细胞骨架和细胞外基质重塑密切相关。

目的:分析泪腺腺样囊腺癌（LACC）高级别转化（HGT）的蛋白表达差异。方法:实验研究。收集2012年12月至2019年1月在天津医科大学眼科医院就诊的8例LACC患者的石蜡组织样本。根据组织病理学检查结果，分为LACC组和LACC-HGT组，每组4例，男性和女性各2例；平均年龄分别为53、44岁。采用同位素相对标记与绝对定量技术筛选两组石蜡组织样本的差异蛋白，对差异蛋白进行生物信息学分析。运用新鲜组织块培养法进行原代细胞培养，运用基因芯片筛选LACC与LACC-HGT原代细胞之间差异表达的mRNA。将质谱数据与mRNA芯片数据取交集，并进行实时荧光定量PCR验证。蛋白组学和基因芯片数据的比较采用独立样本 t检验；PCR数据比较采用单因素方差分析。 结果:共检测到HGT相关差异蛋白105个，包括50个上调蛋白和55个下调蛋白。显著上调的蛋白有血红蛋白、糖化血红蛋白和Ⅵ型胶原蛋白2等；显著下调的蛋白有Cereblon蛋白、S-腺苷同型半胱氨酸水解酶样蛋白2和核糖体蛋白L39等。基因本体分析结果表明，LACC-HGT差异蛋白主要定位于细胞质、囊泡腔、细胞外基质，具有有机酸结合、分子载体活性等，参与调控细胞外基质组成、免疫、炎性反应及凋亡等生物学过程。通路富集分析显示，LACC-HGT差异蛋白主要参与丝裂原活化蛋白激酶、细胞外基质-蛋白聚糖及聚糖代谢等信号通路。蛋白复合体预测分析筛选出4个上调的蛋白复合体和1个下调的蛋白复合体。LACC-HGT差异蛋白与mRNA芯片差异基因重合的共15个，其中肿瘤相关蛋白6个包括 型胶原蛋白1 （COL14A1）、棘皮微管相关蛋白4（EML4）、α-胰蛋白酶抑制因子（ITIH4）、N-myc下游调控基因2 （NDRG2）、骨诱导因子（OGN）、RAS同源基因家族C（RhoC）。主要功能涉及肿瘤细胞的运动和迁移等。PCR结果表明，COL14A1、EML4、ITIH4、NDRG2、OGN、RhoC在LACC-1、LACC-2、LACC-HGT-1和LACC-HGT-2原代细胞中的相对表达量差异有统计学意义（ F=1 675.98，38.53，27.37，16.47，13.38，25.22；均 P<0.01），如COL14A1在LACC-HGT-1和LACC-HGT-2原代细胞中的相对表达量（16.09±0.51、9.96±0.34）均显著高于LACC-1原代细胞（1.00±0.13）和LACC-2（0.67±0.08）（均 P<0.05）。 结论:LACC-HGT与LACC之间存在差异表达蛋白，其中COL14A1、EML4、ITIH4、NDRG2、OGN、RhoC可能在LACC的高级别转化过程中具有重要意义，可作为LACC-HGT的潜在靶点进行深入研究。 （中华眼科杂志，2021，57：531-539）

目的:通过多组学联合生物信息方式分析探索外泌体介导的多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）的潜在发生机制，为PM/DM提供诊断新靶标和治疗新思路。方法:收集2021年1月至2023年6月来自无锡市第二人民医院的PM/DM患者及健康体检者的血清外泌体样本，基于HiSeq高通量测序技术和同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）定量蛋白组学技术对PM/DM组与健康对照组血清外泌体中的微RNA（miRNA）和蛋白组分开展测序分析，并使用R语言进行limma差异分析，基因本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）、基因富集分析（GSEA）功能分析及免疫相关性分析，筛选核心基因并建立miRNA-靶基因-转录因子共表达分子网络。最后使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）对核心基因进行实验验证。统计学方法以 t检验进行数据分析，并绘制受试者工作特征（ROC）曲线评价核心基因的检验效能。 结果:初步筛选出42个上调差异蛋白，61个下调差异蛋白，以及22个上调差异miRNA，19个下调miRNA，最终确定7个核心基因，13个关联差异miRNA以及4个转录因子。根据功能分析认为核心基因组织蛋白酶G（CTSG）、髓过氧化物酶（MPO）、组蛋白H1-5涉及的中性粒细胞胞外诱捕网的形成、NF-κB通路等炎症相关途径在外泌体介导的PM/DM发生机制中起重要作用。肥大细胞、未成熟树突状细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞、辅助性T细胞2等免疫细胞在疾病的血清外泌体中表达程度较高。健康对照和PM/DM组MPO[（1.08 ±0.47）和（2.05 ±0.62）， t=-3.50， P=0.004]、CTSG[（1.11 ±0.51）和（2.27 ±1.10）， t=-2.72， P=0.022]、H1-5[（1.03 ±0.25）和（1.81 ±0.73）， t=-2.89， P=0.019]相对表达量比较差异具有统计学意义，ROC曲线中，MPO[AUC（95% CI）=0.92（0.78，1）]、CTSG[AUC（95% CI）=0.81（0.59，1）、H1-5[AUC（95% CI）=0.84（0.64，1）]表明3个核心基因精度良好。 结论:本研究鉴定了PM/DM血清外泌体中的关键差异分子，并构建了miRNA-靶基因-转录因子的调控网络，确定了PM/DM通过血清外泌体介导的致病机制是经由中性粒细胞胞外诱捕网的形成、NF-κB通路这两大关键通路实现的，CTSG、MPO、H1-5为其通路中的核心基因，并明确了与其相关miRNA及转录因子，这些因子或可成为PM/DM诊断和治疗的潜在靶点和生物标志物。