Background::Exploring the underlying mechanism of rituximab resistance is critical to improve the outcomes of patients with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). Here, we tried to identify the effects of the axon guidance factor semaphorin-3F (SEMA3F) on rituximab resistance as well as its therapeutic value in DLBCL.Methods::The effects of SEMA3F on the treatment response to rituximab were investigated by gain- or loss-of-function experiments. The role of the Hippo pathway in SEMA3F-mediated activity was explored. A xenograft mouse model generated by SEMA3F knockdown in cells was used to evaluate rituximab sensitivity and combined therapeutic effects. The prognostic value of SEMA3F and TAZ (WW domain-containing transcription regulator protein 1) was examined in the Gene Expression Omnibus (GEO) database and human DLBCL specimens.Results::We found that loss of SEMA3F was related to a poor prognosis in patients who received rituximab-based immunochemotherapy instead of chemotherapy regimen. Knockdown of SEMA3F significantly repressed the expression of CD20 and reduced the proapoptotic activity and complement-dependent cytotoxicity (CDC) activity induced by rituximab. We further demonstrated that the Hippo pathway was involved in the SEMA3F-mediated regulation of CD20. Knockdown of SEMA3F expression induced the nuclear accumulation of TAZ and inhibited CD20 transcriptional levels via direct binding of the transcription factor TEAD2 and the CD20 promoter. Moreover, in patients with DLBCL, SEMA3F expression was negatively correlated with TAZ, and patients with SEMA3F lowTAZ high had a limited benefit from a rituximab-based strategy. Specifically, treatment of DLBCL cells with rituximab and a YAP/TAZ inhibitor showed promising therapeutic effects in vitro and in vivo. Conclusion::Our study thus defined a previously unknown mechanism of SEMA3F-mediated rituximab resistance through TAZ activation in DLBCL and identified potential therapeutic targets in patients.

信号素(Sema)家族最初被定义为轴突导向因子，在神经系统的轴突导向中发挥重要作用。随后越来越多的研究结果证明，Sema家族亦参与免疫应答、肿瘤血管生成和器官形成等过程。Sema3A是Sema家族中最早被研究的轴突导向因子。近年研究发现，Sema3A在肿瘤及自身免疫性疾病(AD)的发生、发展过程中，发挥重要的作用。然而，Sema3A在肿瘤的发生、发展过程中，是发挥抑制作用还是促进作用，目前的研究观点尚不一致。阐明Sema3A在肿瘤和自身免疫调节中的作用，有望为以Sema3A为靶点的免疫治疗，提供新的思路。因此，笔者拟就Sema3A的结构及受体，以及Sema3A在肿瘤及AD中的作用和机制的最新研究进展进行综述。

目的:探讨轴突导向因子3A（Sema3A）对脂多糖（LPS）诱导的CD4 +CD25 +调节性T细胞（Tregs）稳定性的作用及机制。 方法:采用体外免疫磁珠法分离和培养C57BL/6J小鼠脾脏CD4 +CD25 + Tregs，将分离的细胞按随机数字表法分为对照组（仅给予抗小鼠CD3e和CD28诱导细胞处于激活状态）、LPS组（在对照组的基础上给予LPS 100 μg/L）、LPS+核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L）、LPS+磷酸盐缓冲液（PBS）组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL）、LPS+PDTC+重组Sema3A（rSema3A）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L+rSema3A 300 μg/L）和LPS+PBS+rSema3A组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL+rSema3A 300 μg/L）。各组培养24 h后，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测CD4 +CD25 + Tregs特异性标志物叉头翼状转录因子-3（Foxp-3）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和膜相关转化型生长因子-β1（TGF-β1 m+）的基因及蛋白表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-10（IL-10）和分泌型转化生长因子-β1（sTGF-β1）的水平，采用免疫荧光法检测细胞凋亡，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测Foxp-3-Tregs特异性去甲基化区（Foxp-3-TSDR）的去甲基化程度，以反映CD4 +CD25 + Tregs的稳定性，采用电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB信号通路的DNA结合活性，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路活性。 结果:与对照组比较，LPS能够增加细胞稳定性，表现为Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达上调，IL-10和sTGF-β1分泌增加，细胞凋亡减少，Foxp-3-TSDR去甲基化程度增加；同时LPS可增加细胞内NF-κB信号通路的DNA结合活性，以及主要分子NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和p65的磷酸化水平，说明LPS增加细胞稳定性的机制与NF-κB信号通路有关。与LPS组比较，PBS并未对细胞稳定性和NF-κB信号通路产生影响；但添加rSema3A后能进一步增加细胞稳定性，并激活NF-κB信号通路。而PDTC能够抑制rSema3A增加细胞稳定性的功能，表现为：与LPS+PBS+rSema3A组比较，LPS+PDTC+rSema3A组Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达明显下调〔Foxp-3基因（2 -ΔΔCt）：8.092±1.117比18.509±1.068，Foxp-3蛋白（相对荧光强度）：1.224±0.033比1.826±0.181；CTLA-4基因（2 -ΔΔCt）：3.254±0.760比11.840±0.827，CTLA-4蛋白（相对荧光强度）：1.305±0.058比1.842±0.111；TGF-β1 m+基因（2 -ΔΔCt）：3.589±1.180比8.509±0.472，TGF-β1 m+蛋白（相对荧光强度）：1.319±0.033比1.822±0.063，均 P<0.01〕，IL-10和sTGF-β1分泌减少〔IL-10（ng/L）：445.33±54.08比992.67±83.10，sTGF-β1（ng/L）：1 116.67±65.25比1 494.67±94.45，均 P<0.01〕，细胞凋亡明显增加（荧光强度：0.398±0.031比0.268±0.046， P<0.01），Foxp-3-TSDR去甲基化程度明显降低（灰度值：0.467±0.048比1.780±0.119， P<0.01），NF-κB信号通路的DNA结合活性被明显抑制（灰度值：1.23±0.02比3.95±0.06， P<0.01），IKKβ和p65的磷酸化水平降低〔p-IKKβ表达（p-IKKβ/IKKβ）：0.97±0.07比1.97±0.04，p-p65（p-p65/p65）：0.95±0.08比1.93±0.06，均 P<0.01〕。 结论:LPS能通过NF-κB信号通路增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性；Sema3A能够进一步增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性，并且与NF-κB信号通路有关。

SEMA3A作为神经轴突发育的一个关键信号蛋白，参与多种生理过程。SEMA3A是一种分泌性蛋白，属于3号信号素(class-3 semaphorins)家族，通过结合NRP1、NRP2和PLXN A复合物受体参与轴突排斥、树突分支、突触形成和神经元迁移过程。SEMA3A是神经元迁移信号的主要组成部分；SEMA3A在免疫反应的所有阶段被认为是一种有效的免疫调节剂；SEMA3A通过对成骨细胞和破骨细胞的作用来调节骨重塑，通过抑制骨吸收和增加骨形成发挥了骨保护作用；SEMA3A通过NRP1和Plexin D1在心血管发育中起着重要作用。

Background::Mesenchymal stem or stromal cells (MSCs) derived from the induced pluripotent stem cells (iPSCs) have uniform biological activity, which makes the clinical application of MSCs in bone repair possible. Culturing the iPSC-MSCs onto osteoconductive materials is a promising tissue engineering-based strategy in bone regeneration. The aim of this work was to evaluate the effects of semaphorin 3A (Sema3A) and hypoxia inducible factor 1 subunit alpha (HIF1α) co-overexpression on the survival and osteogenic differentiation of iPSC-MSCs.Methods::Sema3A and HIF1α were linked together with the three (GGGGS; G, glycine; S, serine) peptide fragment, and their co-expression in iPSC-MSCs was mediated by a lentiviral vector. The fusion protein retained the immune reactivity for both Sema3A and HIF1α as determined with Western blotting. iPSC-MSCs were infected with overexpression lentivirus (oeLenti) as negative control, oeLenti-Sema3A, oeLenti-HIF1α or oeLenti-Sema3A-HIF1α lentiviruses.Results::Sema3A overexpression alone promoted the osteogenic differentiation of iPSC-MSCs (the activity and/or expression of osteoblast markers, such as alkaline phosphatase, osteopontin, and osteocalcin, were upregulated), and suppressed cell survival. The Sema3A-HIF1α fusion protein showed a comparable osteoconductive effect to that of Sema3A without reducing cell survival. We further seeded iPSC-MSCs modified by SemaA-HIF1α overexpression onto hydroxyapatite (HA) scaffolds, and evaluated their growth and differentiation on this three-dimensional material. Additional data indicated that, as compared to iPSC-MSCs cultured in ordinary two-dimensional dishes, cells cultured in HA scaffolds grew (blank vs. HA scaffolds: 0.83 vs. 1.39 for survival) and differentiated better (blank vs. HA scaffolds: 11.29 vs. 16.62 for alkaline phosphatase activity). Conclusion::Modifying iPSC-MSCs with pro-osteogenic (Sema3A) and pro-survival (HIF1α) factors may represent a promising strategy to optimize tissue engineering-based strategy in bone repair.

目的:位于X染色体上的 OPN1LW基因变异通常导致蓝色单色视。 OPN1LW基因变异多发生在外显子区域，内含子区域的变异少见。本研究分析 OPN1LW基因内含子新的剪切变异相关的X染色体连锁遗传性视杆视锥细胞营养不良合并近视家系的临床表型及基因突变特点。 方法:采用家系调查研究方法，收集2020年1月9日于河南省人民医院临床诊断为视杆视锥细胞营养不良合并近视1家系3代7名成员。对部分家系成员进行眼科检查，采集受试者静脉血并提取DNA，用河南省眼科疾病临床研究中心自主研发的眼后段疾病靶向捕获基因检测试剂盒PS400和全外显子测序法筛选致病基因。用一代Sanger测序和家系共分离法对筛选的靶基因进行验证，参照美国医学遗传学协会(ACMG)指南和在线工具SIFT、Polyphen2、Mutation Taster对新发现的变异位点进行致病性分析。结果:先证者5岁，男，临床表现为双眼视力不佳，红绿色盲和眼球震颤。双眼眼前节检查未见明显异常。眼底可见视盘边界清、色淡，黄斑中心凹反光可见。光相干断层扫描(OCT)示双眼黄斑区部分椭圆体带反射模糊，呈颗粒样。全视野ERG显示，双眼暗视0.01 ERG波形记录不到，暗视、明视3.0 ERG a、b波振幅明显降低。先证者舅舅有相似的临床表型，但症状更严重。广角眼底照相示双眼高度近视眼底改变，周边视网膜萎缩并伴有散发黑色圆点病灶；自发荧光示周边视网膜呈弱荧光，中周部未见明显异常。2种二代测序结果均显示 OPN1LW基因内含子1个新的半合子剪切变异c.112＋2T>G和 SEMA4A基因1个新的杂合变异c.1913A>C(p.Y638S)。 OPN1LW基因c.112＋2T>G变异进一步导致1号内含子经典的剪切体供体序列改变。根据ACMG指南分析显示，c.112＋2T>G致病性评分为PVS1＋PM2＋PP1，为致病性变异。 结论:本研究首次报道了与 OPN1LW基因变异相关的X染色体连锁遗传性视杆视锥细胞营养不良合并近视家系的致病突变，且该新的致病变异位于基因内含子区域。这个结果与以往 OPN1LW基因变异主要发生于外显子的认识不同，因此本研究扩大了 OPN1LW基因致病突变谱和临床表现谱。

肥胖是一种复杂代谢性疾病，由能量摄入与消耗不平衡，脂肪过度积累导致，其发病率逐年上升，已经成为全球性的流行病。肥胖具有多病因性，遗传、表观遗传、环境因素及其之间的相互作用均能影响肥胖的病理进程。单基因非综合征肥胖(monogenic non-syndromic obesity)是一种特殊类型的肥胖，临床一般表现为严重食欲亢进和早发性肥胖，通常由瘦素-黑素皮质素通路(leptin-melanocortin pathway)的单基因突变导致。信号素3(semaphorin 3，SEMA3)通路的基因突变也被证实导致单基因非综合征肥胖。随着测序技术的发展，其他肥胖致病基因被相继鉴定。基于单基因非综合征肥胖的致病基因已经开发出一些靶向治疗药物，如重组人瘦素和黑皮质素4受体激动剂。本文就单基因非综合征肥胖的遗传学研究作一综述。

目的:通过挖掘TCGA数据库中肾透明细胞癌(ccRCC)的免疫相关基因数据，构建ccRCC预后分子标签。方法:从TCGA数据库中提取611例的RNA-Seq测序数据(正常样本72例，ccRCC样品539例)和530例ccRCC患者的临床数据，筛选出免疫相关基因(IRGS)表达数据，并计算正常肾组织与ccRCC组织表达差异的IRGS。在530例ccRCC肿瘤组织样品的IRGS表达数据中，随机抽取70%的样品应用LASSO-Cox回归构建预后分子标签(训练组)，30%的样品验证构建的IRGS预后分子标签(测试组)。结果:在ccRCC组织中筛选出差异表达的IRGS共775种。单因素Cox分析得到298种IRGS与ccRCC预后有相关性( P<0.05)。采用LASSO-Cox回归分析中筛选出12个与ccRCC预后相关的IRGS，分子标签值在训练组、测试组、所有样本数据与ccRCC患者的生存期呈显著相关，分子标签值越高患者的预后越差，其中所有样本数据中的1、3、5年受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积分别为0.797、0.763、0.780。 结论:ccRCC的IRGS预后模型可用于预测ccRCC患者的预后，有利于临床治疗。

目的:探讨神经纤毛蛋白-1（NRP-1）在调节性T细胞（Treg）上的表达与其配体信号素3A（Sema3A）、转化生长因子β 1（TGF-β 1）以及1型辅助T细胞（Th 1）和2型辅助T细胞（Th 2）之间平衡的关系。 方法:纳入2014年3月至2015年5月就诊的62例ITP患者（新诊断ITP 33例、慢性ITP 29例），以同期30名健康体检者作为正常对照组。流式细胞术检测Treg细胞NRP-1表达，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆Sema3A、TGF-β 1、IFN-γ和IL-4水平，实时聚合酶链式反应（RT-PCR）检测外周血NRP-1、Sema3A、TGF-β 1 mRNA表达水平。分别采用单因素方差和独立样本 t检验进行三组间和两组间比较，用Spearman相关系数评估NRP-1、Sema3A、TGF-β 1 mRNA表达的相关性。 结果:与慢性ITP组和正常对照组比较，新诊断ITP组Treg细胞NRP-1表达降低[分别为（0.15±0.03）%、（0.33±0.15）%、（0.46±0.06）%， P<0.01]，血浆Sema3A水平升高[分别为（8.10±1.32）μg/L、（7.41±1.30）μg/L、（2.88±0.82）μg/L， P<0.01]，血浆TGF-β 1水平降低[分别为（16.50±3.36）μg/L、（35.17±10.26）μg/L、（41.00±10.02）μg/L， P<0.01]，血浆IFN-γ水平升高[分别为（17.21±2.80）ng/L、（10.23±1.59）ng/L、（8.18±3.27）ng/L， P<0.01]，Th 1/Th 2（IFN-γ/IL-4）比值升高（分别为1.29±0.30、0.72±0.16、0.61±0.27， P<0.01）。新诊断ITP、慢性ITP组NRP-1、Sema3A mRNA的表达均低于正常对照组（ P<0.01）。新诊断ITP组NRP-1 mRNA表达与Sema3A、TGF-β 1 mRNA表达均呈正相关。 结论:NRP-1可能参与ITP的发病机制。

目的:探讨信号素4C (SEMA4C)在巨噬细胞中的高表达影响早期肺腺癌发生淋巴结转移的机制及临床价值。方法:收集2019年12月至2021年12月来自郑州大学第一附属医院的16例T1期肺腺癌患者(8例有淋巴结转移，8例无淋巴结转移)的肿瘤组织和邻近正常肺组织进行转录组测序，通过癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达数据库(GEO)数据库下载数据集作为外部验证队列。采用实时定量反转录聚合酶链反应(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)等方法分析SEMA4C相对表达量，并使用CIBERSORT算法和R语言程序包进行数据处理和分析。采用 t检验比较两组间差异基因，采用Kaplan-Meier法 χ2检验比较两组间生存函数差异。 结果:M0巨噬细胞高浸润组病人的生存率低于低浸润组[TCGA：(81.92±10.50)个月比(95.98±11.80)个月， χ2＝6.778， P<0.01；GSE68465：(72.74±5.89)个月比(96.69±6.15)个月， χ2＝5.413， P<0.05]。SEMA4C在3个队列中转移组和高浸润组表达高于无转移组和低浸润组(测序队列：30.68±8.02比23.72±4.76， t＝2.912， P<0.01；TCGA：44.08±22.45比24.93±11.64， t＝2.734， P<0.01；GSE68465：908.61±363.72比822.00±312.53， t＝1.978， P<0.05)。qPCR结果示M0巨噬细胞表达高于肺腺癌细胞和M1、M2巨噬细胞(M0巨噬细胞μ＝23.880比A549细胞系μ＝3.085， t＝21.340， P<0.001、Calu-3细胞系μ＝0.462， t＝24.032， P<0.001、H1975细胞系μ＝2.930， t＝21.510， P<0.001、M1巨噬细胞μ＝5.303， t＝16.043， P<0.001、M2巨噬细胞μ＝8.120， t＝15.934， P<0.001)；Western blot结果示M0巨噬细胞表达高于单核THP-1和M1、M2巨噬细胞(M0巨噬细胞μ＝1.216比THP-1细胞系μ＝1.000， t＝32.940， P<0.001、M1巨噬细胞μ＝0.485， t＝15.992， P<0.001、M2巨噬细胞μ＝0.394， t＝42.545， P<0.001)。 结论:SEMA4C是潜在的趋化M0巨噬细胞浸润从而引起早期肺腺癌发生淋巴结转移的关键基因。