目的:观察溶质转运家族35E1（SLC35E1）和SLC35E2B蛋白在分枝杆菌感染患者皮损中的表达。方法:收集2014—2018年南方医科大学皮肤病医院确诊为分枝杆菌感染患者的石蜡包埋皮损组织，其中多菌型麻风患者10例，非结核分枝杆菌感染9例，皮肤结核7例，硬红斑5例，同时收集10例健康人石蜡包埋皮损组织作为正常对照组。免疫组化染色分析SLC35E1、SLC35E2B在上述皮损及正常对照组中的表达差异。免疫荧光染色检测CD68、S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白在皮损组织中的共表达情况。结果:正常对照组不表达SLC35E1、SLC35E2B，但麻风、非结核分枝杆菌感染、皮肤结核及硬红斑患者皮损真皮中二者的表达显著增高。免疫组化染色显示多菌型麻风组、非结核分枝杆菌组、皮肤结核组、硬红斑组皮损组织SLC35E1表达水平（平均光密度）分别为0.143 ± 0.010、0.278 ± 0.015、0.171 ± 0.010、0.200 ± 0.015，SLC35E2B为0.169 ± 0.004、0.229 ± 0.088、0.103 ± 0.016、0.118 ± 0.021，均较正常对照组（均为0）显著升高（ P < 0.05）。免疫荧光染色结果显示，麻风、非结核分枝杆菌感染、皮肤结核皮损SLC35E1、SLC35E2B与CD68表达重叠。 结论:SLC35E1、SLC35E2B在分枝杆菌感染性疾病皮损中表达显著增高。

目的:明确溶质转运体家族蛋白SLC35E在多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风皮损中的差异.方法:首先收集25例确诊为麻风感染患者的石蜡包埋皮损组织,其中多菌型麻风患者12例,少菌型13例,分析SLC35E1和SLC35E2B不同SNP位点的突变情况;同时收集12名健康对照者皮肤组织作为正常对照组,采用免疫组化染色法检测SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在上述皮损及正常对照组中的表达差异,免疫荧光染色法检测CD68、S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白在皮损组织中的共表达情况.结果:对25例麻风组织样本进行生物信息学分析,SLC35E1的SNP位点rs202071873在麻风患者中的突变率为0％,SLC35E2B的3个SNP位点rs12729295、rs1 17820608、rs2072923在麻风患者中的突变率分别为100％、40％,100％.免疫组化染色显示SLC35E1、SLC35E2B、CD68、S100在麻风组织的真皮及表皮均有表达,其中CD68主要表达于麻风组织真皮,SLC35E1在真皮层的表达量与CD68基本一致,两者表达量基本呈正相关;S100在麻风患者表皮和真皮中的表达无显著差异,与SLC35E1、SLC35E2B表达量无明显相关性;与少菌型麻风相比,多菌型麻风患者SLC35E1在真皮层呈低表达(P=0.046);与健康对照组相比,多菌型麻风患者SLC35E2B在表皮层呈低表达(p=0.004);免疫荧光共染显示麻风组织皮损中CD68与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染均出现重叠结果,且与SLC35E1重叠荧光强度高于SLC35E2B;S100与SLC35E1、SLC35E2B蛋白共染未见重叠结果.结论:麻风患者皮损中可能存在SLC35E2B位点突变,SLC35E1的表达可预测多菌型(MB)与少菌型(PB)麻风在真皮层感染差异,SLC35E1、SLC35E2B可能通过影响巨噬细胞功能干扰机体对麻风分枝杆菌的清除,进而影响麻风的发病.

1 病历简介患者女性, 30岁, 主诉 "诊断 Gitelman 综合征1年, 停经3+6周", 于2017年8月1日就诊于北京协和医院产科门诊.1. 1 现病史患者2015年6月妊娠8周出现先兆流产、 手足麻木等症状, 外院就诊提示不明原因 "难治性低钾低镁血症", 因自身原因放弃进一步明确诊治. 孕期未行规律产检, 于妊娠35周出现不明原因胎死宫内.因有再次生育要求, 2016年7月在北京协和医院内分泌科就诊, 查找难治性低钾低镁血症原因, 基因检测提示 SLC12A3 ( NM-000339 ) 基因 E22/CDS22 存在可疑纯合错义突变, 最终确诊为Gitelman 综合征,予口服多种钾、 钙、 镁药物治疗. 同期在北京协和医院产科门诊检查, 存在超重、 糖耐量异常、 高尿酸血症及高脂血症, 予饮食运动指导后, 体质量指数( body mass index, BMI ) 由 24. 77 kg/m2 下降至19. 14 kg/m2 , 血糖控制良好, 血钾3. 7 mmol/L, 血镁0. 59 mmol/L. 患者近1年月经规律, 7/31 d, 末次月经2017年7月5日, 未避孕, 现已停经3+6周,人绒毛膜促性腺激素34. 66 IU/L, 无腹痛及阴道出血, 暂无恶心、 呕吐等早孕反应. 因既往有不良孕产史, 此次妊娠较为重视, 需进一步明确孕期营养饮食控制、 电解质调整方案.

目的 通过检测斑块型银屑病患者外周血中SLC35E2B的表达情况,并利用数据库分析基因富集的功能和参与的通路,探讨SLC35E2B在银屑病发病机制中的作用.方法 收集斑块型银屑病47例、正常对照14例的外周静脉血,提取样本基因组DNA,用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终SLC35E2B基因病理性突变位点,利用GO和KEGG pathway数据库分析基因富集的功能和参与的通路.结果 对61例样本所得数据进行生物信息学分析得到致病性突变位点1个:SLC35E2Bc.833C ＞T(p.T278M),仅见于斑块型银屑病组,正常组未见;GO富集提示SLC35E2B生物学过程主要涉及调节IL-12家族细胞因子、IL-17家族细胞因子、调节对生物刺激的细胞应答、TNF的合成、调节Th1细胞相关的免疫应答以及抵抗病原微生物等多细胞生物过程;KEGG通路分析提示SLC35E2B基因主要与结核病、1型糖尿病、弓形虫病、哮喘、类风湿性关节炎等疾病相关.结论 SLC35E2B可能参与银屑病发病的病理过程.

目的 分析TCGA数据库中肝内胆管癌(ICC)高通量测序数据,寻找其预后相关基因,构建风险模型,并研究其在ICC组织中表达及作用通路.方法 下载TCGA数据库中33例ICC组织和8例癌旁组织中的RNA-seq表达矩阵数据和患者临床资料信息,利用edgeR软件包进行基因差异表达分析,通过单因素Cox回归分析筛选出预后相关差异基因,对差异基因绘制生存曲线,筛选出具有临床意义的基因,经多因素Cox回归分析并构建风险模型,通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析了解预后相关基因的作用通路.结果 通过edgeR分析后得到6617个差异基因(筛选标准为|log2 Fold Change|>1,P<0.05),其中高表达组4094个,低表达组2523个.通过功能富集发现,这些基因主要集中在化学物致癌作用、药物代谢-细胞色素P450系统、细胞色素P450对异生物质的代谢影响以及视黄醇代谢通路.经单因素Cox回归、R软件"survival"包生存曲线分析显示,UCN2、CST1、PROS1、SLC35E4、PEMT五个基因对ICC患者预后存在显著性影响.通过多因素Cox回归分析,CST1、PEMT、PROS1构建的风险模型对ICC患者预后具有判断作用.结论 UCN2、CST1、PROS1、SLC35E4、PEMT基因可能成为ICC预后判断指标,为后续临床试验提供数据支持.

目的 探讨罕见拷贝数变异(copy number variations,CNVs)与肺静脉异位引流(anomalous pulmonary venous connection,APVC)的关联.方法 采用病例-对照研究,对2012～2017年在中国医学科学院阜外医院治疗的144名肺静脉异位引流患儿进行全外显子组测序,同时以188名无心血管系统疾病的肥胖及正常儿童的全外显子组数据为对照进行CNVs鉴定和关联研究.结果 在病例组和对照组中分别鉴定出1116个和1360个罕见CNVs.病例组所携带的CNVs平均长度为81.84 Kb,范围为1.0 kb到22.80 Mb,且鉴定出5个病例组独有的大片段CNVs(＞2 Mb),而对照组的CNVs平均长度为66.26 kb,范围为1.0 kb-1.52Mb.其次,本研究鉴定出20个在病例组重复出现至少3次且未在对照组中出现的CNVs.其中,所覆盖的POU5F1基因和SLC35E2B基因参与左-右非对称分化的决定,且与已知先心病基因存在相互作用,提示它们可能参与APVC致病过程.此外,病例组相对富集的CNVs共覆盖41个已报道的先心病基因,集中富集于心脏发育和左-右非对称分化相关通路.结论 罕见拷贝数变异及其覆盖的左-右非对称分化等心脏发育相关基因可能参与疾病的发生.

目的 构建稳定敲除小鼠Slc35c1基因的单克隆细胞株,为研究Slc35c1基因抗蓖麻毒素毒性效应奠定实验基础.方法 根据Slc35c1基因序列设计2对sgRNA插入载体lentiCRISPRv2中,构建lentiCRISPRv2-sgRNA质粒;慢病毒包装并感染NIH/3T3细胞,加入嘌呤霉素筛选阳性细胞;T7E1酶切鉴定sgRNA切割效率;利用有限稀释法筛选单克隆细胞并进行RT-qPCR检测及基因组PCR产物测序,确认Slc35c1敲除成功的细胞株;最后通过CCK-8试剂检测蓖麻毒素对野生型和Slc35c1敲除细胞对的抗毒效应差异.结果 测序结果显示sgRNA成功插入载体质粒中,T7E1酶切结果表明两对sgRNA均可高效切割基因组DNA.RT-qPCR及基因组PCR产物测序鉴定出Slc35c1敲除的纯合子细胞株.CCK-8实验结果显示,与野生型细胞相比,敲除Slc35c1使毒素作用NIH/3T3细胞24 h的IC50值由0.45×10-10 mol/L升至2.1×10-10 mol/L.结论 利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除了NIH/3T3细胞中的Slc35c1基因并筛选获得纯合子细胞株,该细胞株可用于抗蓖麻毒素效应的研究.

目的:探讨淫羊藿苷调节核转录E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体蛋白7家族成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的影响.方法:将小胶质细胞(BV2)分为对照组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、高糖组(35 mmol·L-1葡萄糖)、淫羊藿苷低(35 mmol·L-1葡萄糖+0.37 μmol·L-1淫羊藿苷)、高(35 mmol·L-1葡萄糖+1.48 μmol·L-1淫羊藿苷)剂量组、抑制剂组(35 mmol·L-1葡萄糖+1.48 μmol·L-1淫羊藿苷+1 μmol·L-1的Nrf2抑制剂ML385).采用CCK-8法检测细胞增殖,进行细胞形态学观察,用超氧化物阴离子荧光探针(DHE)、氟硼二吡咯(BODIPYTM)检测细胞内活性氧(ROS)、脂质过氧化(LPO)水平,特异性荧光探针检测细胞内活性铁含量,Western Blot检测细胞Nrf2、SLC7A11、GPX4、血红素加氧酶1(HO-1)、环氧合酶2(COX2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)蛋白的表达.结果:与对照组比较,高糖组的BV2细胞形态不规则,出现细胞碎片,细胞光密度(OD450)值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达明显降低(P＜0.05),ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达显著升高(P＜0.05);与高糖组比较,低、高剂量淫羊藿苷组的BV2细胞损伤减少,细胞OD450值、Nrf2、SLC7A11、GPX4、HO-1表达升高(P＜0.05),ROS和LPO水平、活性铁含量、COX2、ACSL4表达降低(P＜0.05);与高剂量淫羊藿苷组比较,抑制剂组减弱了淫羊藿苷对高糖诱导的小胶质细胞铁死亡的抑制作用.结论:淫羊藿苷通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4通路从而抑制高糖诱导的小胶质细胞铁死亡.

目的:比较分析帕金森病(Parkinson Disease,PD)和抑郁症(Major depression disease,MDD)在脑组织Brodman9(BA9)区域共同的差异基因(Differential genes,DEGs)、共同通路和关键基因,为PD和MDD共同发病机制研究提供参考.方法:下载GEO数据库中GSE20168、GSE54567、GSE54568和GSE54570芯片数据,使用R语言调取limma,clusterProfiler,ggplot2等生信分析包,以P<0.05并log-FC绝对值≥0.3作为标准,分析PD和MDD共表达差异基因,进一步通过GO和KEGG富集分析共同通路,并利用String数据库及cytoscape软件进行蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络和关键基因鉴定.结果:PD和MDD患者BA9区域存在34个共同的DEGs,上调21个,分别为:SLC35E1、ATP8B1、TSR1、ZNF721、RIOK3、FBXW12、ZNF160、POLR1B、CACNA1I、MZT2B、PGF、RP11-403P17.4、RPL23AP32、DBT、PRR11、USP34、LRRFIP1、DSERG1、DIP2A、AEBP1和DNAJB2基因,下调13个,分别为NPTX2、PCSK1、SST、PPP1CB、SEC22B、ENPP4、NME5、CAPZA2、GLRB、ITFG1、GLIPR1、TM6SF1和DUSP6基因;DEGs功能富集分析显示PD与MDD有5个共同的GO BP富集条目,分别是:GO:0007611(学习与记忆)、GO:0050890(认知)、GO:0007612(学习)、GO:0051384(对糖皮质激素的反应)、GO:0008306(联想学习)条目,提示PD和MDD均存在认知、学习、记忆及糖皮质激素反应通路功能障碍(P<0.05);PPI网络作图及关键基因分析提示NPTX2、PCSK1、DUSP6、SST、PPP1CB基因可能是PD和MDD共同的关键基因,在PD和MDD表达均显著降低(P<0.05).结论:前额叶BA9区域认知通路功能障碍及NPTX2等基因表达减少可能是P D和MDD共同的分子病理.