目的 探讨小鼠胚胎心脏房室管分隔、重塑过程中房室管心肌与心外膜的变化规律.方法 选用抗心肌肌球蛋白轻链Ⅱa(MLC2a)抗体、抗心肌肌球蛋白轻链Ⅱ(MLC-2)抗体、抗转录因子Tbx3(Tbx3)抗体、抗淋巴增强因子1(Lef1)抗体,对25只胚龄10 ～ 15 d小鼠胚胎切片进行免疫组织化学和免疫荧光染色.结果 胚龄10～15 d,房室管心肌呈MLC2a阳性、MLC-2阴性,同时表达Tbx3.胚龄11 ～12 d,心外膜形成.胚龄12 ～ 13 d,两侧房室管心内膜垫彼此接近并融合形成房室瓣,心外膜来源间充质细胞数量增加,部分表达Lef1.胚龄13 d开始,部分心外膜来源间充质细胞穿过心肌延伸入壁侧房室瓣.胚龄15d,房室瓣膜基部直接与MLC2a阳性的房室管心肌相连.结论 小鼠胚胎房室管心肌发育为成体心脏房室环瓣膜基部的心肌;心外膜通过产生间充质细胞参与房室瓣的形成.

目的 探讨转录因子Tbx3在小鼠胚胎第二生心区(SHF)的时空表达模式,为其对SHF的调节作用提供形态学依据.方法 40只胚龄9～15d小鼠胚胎心脏连续石蜡切片,用抗胰岛素基因增强子结合蛋白l(ISL-1)抗体、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)抗体、抗心肌肌球蛋白轻链Ⅱa(MLC2a)抗体、小鼠抗增殖细胞核抗体(PCNA)、抗Tbx3抗体进行免疫组织化学和免疫荧光双标染色.结果 胚龄9d,咽腹侧内胚层增厚,且表达Tbx3与SHF标记物ISL-1.胚龄10～12 d,咽腹侧间充质出现ISL-1阳性细胞并逐渐增多,部分细胞共表达Tbx3.动脉囊壁、心包腔背侧壁以及流出道远端壁也可见ISL-1表达,Tbx3在这些部位均呈阴性.心背侧间充质突(DMP)内可见ISL-1、Tbx3散在表达.胚龄13 ～ 15 d,DMP逐渐心肌化,同时可见Tbx3阳性细胞分布.结论 Tbx3在SHF的表达集中在咽腹侧间充质,可能参与调节SHF前体细胞的存在与增殖;但在后第二生心区(pSHF)的作用与在动脉端的SHF可能不同.

目的 TBX15(T-box 15)是T-box基因家族的一员,在多种恶性肿瘤中高表达,与肿瘤的恶性进展和转移密切相关.TBX15在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)的表达及其作用尚未阐明.本研究通过检测TBX15蛋白在ccRCC组织中的表达,探讨该蛋白在ccRCC发病中的作用及临床意义.方法 收集2009-01-01-2011-12-31苏州大学附属第二医院60例手术切除的ccRCC组织及17例癌旁正常肾组织制作组织芯片,应用免疫组织化学法检测TBX15蛋白的表达,利用癌症基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库分析TBX15 mRNA在ccRCC组织和正常肾组织中的差异性表达,分析TBX15蛋白表达与ccRCC临床病理的关联性及其与预后的关系.结果组织芯片结果显示,与正常肾组织相比,TBX15蛋白在ccRCC组织中高表达,差异有统计学意义,χ2=41.191,P<0.001;ccRCC组织中TBX15的表达水平与远处转移(χ2=2.60,P=0.049)、临床分期(χ2=3.15,P=0.038)及生存时间(χ2=4.62,P=0.032)有关联.TCGA数据库分析结果表明,TBX15 mRNA在ccRCC组织中的表达(2.474±0·172)高于正常肾组织(0.093±0.028),t=-13.67,P<0.001,且TBX15基因高表达的ccRCC患者生存时间短于TBX15基因低表达的ccRCC患者(χ2=8.009,P=0.005),提示TBX15基因高表达与ccRCC患者预后差有关联.结论TBX15可能成为判断ccRCC患者预后的有用指标.

目的:探讨三物黄芩汤对白塞病(BD)模型小鼠IFN-γ、IL-17A水平的影响.方法:收集临床样本并分离单个核细胞,采用RNA-seq高通量测序并鉴别白塞病与健康受试者的差异基因.通过虾原肌球蛋白致敏构建BD小鼠模型并给予三物黄芩汤浓缩液灌胃治疗,ELISA和流式细胞术检测外周血和单个核细胞中IFN-γ、IL-17A的水平,RT-PCR法检测脾脏组织中TBX21基因的表达水平.结果:与健康受试者相比,BD患者共有31个差异基因,其中19个基因表达上调,12个基因表达下调.PPI分析结果显示差异基因中排名前5的基因分别为TBX21、STAT3、IL15、PRF1和IFNG.动物实验结果表明,与空白组相比,模型组外周血及PBMC中IFN-γ、IL-17A的水平明显增高(P<0.01),三物黄芩汤能明显降低小鼠外周血及PBMC中IFN-γ、IL-17A的水平(P<0.05).RT-PCR结果显示,与空白组相比,模型组脾脏组织中TBX21 mRNA的表达水平明显增高,(P<0.01).三物黄芩汤能降低小鼠脾脏组织中TBX21 mRNA的表达水平(P<0.05).结论:三物黄芩汤通过靶向抑制TBX21 mRNA的表达水平,进而抑制INF-γ和IL-17的水平,达到治疗BD的作用.

目的 探讨5-氮杂胞苷(5-aza)诱导心脏成纤维细胞(CFs)向心肌样细胞分化5 d、7 d、14 d、21 d和28 d相关基因的表达差异.方法 新生1～3 d SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新生大鼠CFs,采用CFs分子标记盘状结构域受体2(DDR2)并行细胞免疫荧光染色.含15 μmol/L 5-aza心肌细胞诱导液培养第3代CFs,Real-time PCR 检测心肌化诱导不同时间点相关基因vimentin、DDR2、Nanog、sox2、c-kit、sca-l、Tbx5、CD73、CD34、cMyc、klf4、Gata4、0ct4、Mef2c和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达差异,细胞免疫荧光检测心肌化诱导后5 d、7 d、14 d、21 d和28 d肌钙蛋白T(cTnT)的表达.透射电子显微镜观察心肌化诱导28 d CFs的超微结构变化.结果 5-aza诱导CFs后3d细胞生长速率减慢,部分细胞由三角形、梭形向圆形和杆状转变.诱导后7 d、14 d、21 d和28 d,与诱导前相比,DDR2表达稳定,vimentin在14 d表达下降,Nanog、c-kit、sox2和Tbx5伴随着心肌化进程呈现表达下降趋势,而CD73、Mef2c、CD34、Gata4、0ct4和cTnT表达逐步增加,sca-1在7d表达上升又下降,cMyc和klf4在14 d表达上升又下降.诱导后5d少量细胞表达cTnT,14～21 d cTnT阳性细胞数明显增高,28 d表达cTnT较多且趋于稳定.透射电子显微镜显示,CFs心肌化诱导28 d,细胞与细胞间出现端-端连接,细胞质内出现大量的肌原纤维,排列较为规律,但肌节不明显,H带、Z线和M线显示不清.结论 CFs经5-aza诱导,可向心肌样细胞分化,但不能形成成熟的心肌细胞.

目的 研究透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中微小RNA(miR)-4313及T-box转录因子15(TBX15)的表达及临床意义.方法 应用荧光定量PCR法检测2018年3月—2019年12月辽宁省本溪市中心医院诊治的93例ccRCC患者癌组织中miR-4313、TBX15的mRNA的表达,免疫组织化学法检测癌组织中TBX15蛋白表达,以癌旁正常组织为对照.分析癌组织中miR-4313、TBX15蛋白表达与临床病理参数关系.Pearson线性相关分析miR-4313与TBX15 mRNA表达的相关性.结果 与癌旁组织比较,ccRCC癌组织中miR-4313相对表达量明显较低,而TBX15 mRNA相对表达量明显较高,差异均有统计学意义(均P<0.05).癌组织中TBX15蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).癌组织中miR-4313、TBX15蛋白表达在患者不同年龄、性别、病理分级、远处转移及淋巴结转移中表达比较差异无统计学意义(P>0.05).肿瘤分期Ⅲ～Ⅵ期ccRCC癌组织中miR-4313表达明显低于Ⅰ～Ⅱ期癌组织,肿瘤分期Ⅲ～Ⅵ期ccRCC癌组织中TBX15蛋白阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期癌组织,差异均有统计学意义(均P<0.05).癌组织中miR-4313与TBX15 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.671,P=0.001).结论 ccRCC癌组织中miR-4313表达降低,而TBX15表达升高,两者表达与肿瘤分期有关,有可能成为新的ccRCC肿瘤标志物.

目的 探讨miR-4313对肾透明细胞癌(ccRCC)增殖能力的影响及其分子机制.方法 采用中国科学院细胞库的人肾癌细胞株786-O和OS-RC-2为主要研究对象,并分为阴性对照组、miR-4313模拟物组和miR-324-3p模拟物组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期时相的变化;蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin D3、p21、p27和p53的表达;运用生物信息学网站分析miR-4313的候选靶基因,并运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测转染miR-4313模拟物后786-O细胞中各候选靶基因的表达水平;运用蛋白质印迹法检测转染miR-4313模拟物后,786-O细胞中TBX15蛋白表达;运用荧光素酶双报告基因系统检测miR-4313与TBX15的3′-UTR是否能够直接结合.结果 过表达miR-4313后,肾癌细胞的增殖能力在24、36、48 h均低于阴性对照组,F=337.696,P<0.001.miR-4313过表达组G0/G1期细胞比例从(57.15±1.62)％升高至(64.45±0.05)％,F=60.860,P=0.001;G2/M期细胞比例从(24.25±2.52)％下降至(19.44±0.51)％,F=115.174,P<0.001.miR-4313过表达后Cyclin D1蛋白表达降低,F=36.478,P=0.004;Cyclin D3蛋白表达降低,F=122.697,P<0.001;而p21蛋白表达升高,F=110.501,P<0.001;p27蛋白表达升高,F=74.595,P=0.001;p53表达升高,F=185.271,P<0.001.miR-4313过表达后TBX15基因表达降低,F=39.044,P=0.003;TBX15蛋白表达降低,F=54.212,P=0.002.荧光素酶报告结果显示,miR-4313能与TBX15的3′-UTR直接结合,F=16.368,P=0.001.结论 miR-4313可通过靶向负调控TBX15的表达进而抑制ccRCC细胞的增殖能力,且TBX15可成为临床评估ccRCC预后的可靠指标.