目的:探讨肝窦内皮细胞(LSECs)的内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)对肝细胞(HC)增殖的影响及其机制。方法:培养细胞并分组为HC组，HC＋LSECs组，HC＋ N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)组，HC＋LSECs＋L-NAME组，HC＋LSECs＋肝细胞生长因子(HGF)组，HC＋LSECs＋HGF＋L-NAME组。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EDU)方法检测HC增殖率，酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测各组HC的蛋白激酶B(Akt)、细胞间充质-上皮转化因子(c-Met)表达。蛋白质印迹法(Western blot)法及即时聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测LSECs、LSECs＋L-NAME组中细胞的eNOS、血管生成素2(Ang2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。应用SPSS 19.0统计软件进行分析，多组间比较采用单因素方差分析，两组间均数比较采用 t检验。 结果:HC＋LSECs组与HC＋LSECs＋L-NAME组比较，HC增殖率高[(42.30±4.43)%比(32.80±3.18)%]；HC＋LSECs＋HGF组与HC＋LSECs＋HGF＋L-NAME组比较，HC增殖率高[(96.34±2.48)%比(59.53±2.88)%]，差异均有统计学意义( F＝246.325， P<0.01)。Akt、c-Met的表达：HC＋LSECs组与HC＋LSECs＋L-NAME组比较表达升高(4.71±0.02、9.18±0.09比2.66±0.01、6.78±0.08)；HC＋LSECs＋HGF组与HC＋LSECs＋HGF＋L-NAME组比较表达升高(10.55±0.02、17.53±0.16比5.82±0.02、10.72±0.05， F＝103 175.549、8 465.544， P<0.01)。Ang2、TGF-β1、eNOS的表达：相对于LSECs细胞组，LSECs＋L-NAME组中eNOS的表达下降(0.372 838±0.019 876比0.117 049±0.008 135， t＝20.732， P<0.01)；(0.027 93±0.000 92比0.010 57±0.000 15， t＝32.126， P<0.01)，而Ang2、TGF-β1的表达升高(0.216 319±0.018 801比0.557 341±0.034 118， t＝-84.663， P<0.01)，(0.004 99±0.000 06比0.017 00±0.000 10， t＝-181.747， P<0.01)；(0.137 316±0.012 621比0.628 727±0.045 014， t＝-75.773， P<0.01)，(0.010 930±0.000 351比0.034 670±0.000 830， t＝-45.488， P<0.01)。 结论:来源于LSECs的eNOS，可以通过抑制LSECs中Ang2/TGF-β1信号通路表达，达到促进HC增殖作用。

目的:探究银杏叶提取物(GBE)调节转化生长因子β1(TGF-β1)/肝细胞生长因子(HGF)信号通路对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管结扎术法构建UUO小鼠模型,造模成功后将小鼠随机分为模型组、厄沙贝坦组(20mg/kg)、GBE低、中、高剂量组(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg),每组10只;另取10只小鼠为假手术组(仅分离左侧输尿管但不结扎).检测肾功能指标:β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化;马森(Masson)染色观察肾脏组织纤维化情况;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1表达;Western blot检测肾脏组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、α-SMA、TGF-β1、细胞信号转导分子2(Smad2)、磷酸化Smad2(p-Smad2)、HGF蛋白表达.结果:相比于假手术组,模型组小鼠肾脏组织肾小管腔扩张或萎缩,炎症细胞浸润,胶原纤维沉积明显,NAG、Scr、BUN、TNF-α、IL-1β、IL-6、肾纤维化水平、Col-Ⅰ、α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2表达明显升高,HGF蛋白表达明显下降(P＜0.05);相较于模型组,厄沙贝坦组和GBE低、中、高剂量组小鼠肾组织病理损伤减轻,胶原沉积纤维减少,NAG、Scr、BUN、TNF-α、IL-1β、IL-6、肾纤维化水平、Col-Ⅰ、α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2表达明显降低,HGF蛋白表达明显升高(P＜0.05),其中厄沙贝坦组和EG高剂量组改善最为显著.结论:GBE能减轻肾功能损伤,抑制炎症反应,改善UUO小鼠的肾纤维化,其作用机制可能与调节TGF-β1/HGF信号通路平衡有关.

目的 研究富血小板血浆(PRP)在不同制备条件下生长因子表达谱的变化,为临床治疗选择不同类型PRP提供实验依据.方法 使用血液成分分离机单采7份PRP(30 mL/份),同一份PRP各留取10 mL并随机分成贫血小板血浆(PPP)对照组、PRP凝胶上清组和PRP裂解液组,PRP凝胶上清组采用牛凝血酶和葡萄糖酸钙制成预混剂,预混剂与PRP按照1:9的比例添加以获取PRP上清液;PRP裂解液组采用在-20℃和37℃反复冻存融化5次,获取血小板裂解液.应用Quantibody?生长因子蛋白芯片检测获取的样品中生长因子谱的变化,并采用ELISA对差异生长因子进行验证.结果 与PPP对照组比较,在PRP凝胶上清组中共有5个生长因子表达升高,分别为脑源性神经营养因子(BDNF,14.64倍),血小板衍生生长因子(PDGF-AA,4.53倍),表皮细胞生长因子(EGF,4.52倍),血管内皮生长因子(VEGF,3.45倍)和肝细胞生长因子(HGF,2.16倍),GO和KEGG分析表明这些因子主要富集于细胞迁移和Ras及PI3K-Akt信号通路激活,参与组织修复;而在PRP裂解液组中升高的生长因子分别为BDNF(20.74倍),EGF(11.12倍),转化生长因子-β1(TGF-β1,5.76倍),减少的生长因子是胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6,1.46倍),这些因子主要富集于MAPK信号通路和FoxO信号通路发挥抗炎作用.结论 PRP凝胶上清和PRP裂解液均可释放多种生长因子;PRP凝胶上清产生的生长因子主要参与创面修复和伤口愈合,而PRP裂解液产生的生长因子主要参与组织修复和抗炎,因此针对不同的临床治疗目的,应选择不同方式制备的PRP制品,以达到最佳的治疗效果.

探讨益气法制剂(黄芪、白术)对CCL4所致肝纤维化大鼠的治疗作用及作用机制.采用腹腔注射40％四氯化碳(CCL4)玉米油溶液联合高脂低蛋白饮食建立肝纤维化模型大鼠.成模后分别给予相应药物灌胃治疗12周.HE、Masson染色法观察肝组织形态学变化,生化分析法检测血清肝功能,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清胶原蛋白含量.RT-qPCR检测肝组织内TGF-β1、TβR Ⅰ、Smad3、Samd7、α-SMA、HGF mRNA表达.给药治疗后,益气法制剂和秋水仙碱均可减轻大鼠胶原沉积,并可改善大鼠肝功能,其机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关.

目的 探索应用Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的效果,筛选出所涉及的信号通路,并验证Hippo信号通路.方法 对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取、分离、传代培养及鉴定.取第3代细胞进行诱导培养,分为SD大鼠BMSCs(A组)、SD大鼠BMSCs+0.5μg/mL Gal-3(B组)、SD大鼠BMSCs+20 ng/mL HGF(C组)、SD大鼠BMSCs+0.5μg/mL Gal-3+20 ng/mL HGF(D组)和大鼠肝细胞(E组).分别在诱导后7、14、21、28 d进行细胞形态学观察、糖原染色观察,并行实时定量PCR以及Western blot检测,鉴定其分化情况.取B组细胞行基因芯片检测.将BMSCs与Gal-3、Gal-3+XMU-MP-1(Hippo信号通路抑制剂)分组进行诱导,Western Blot检测YAP、P-YAP、ALB、AFP、CK-18.结果 大鼠股骨骨髓分离出的细胞符合骨髓间充质干细胞特性.诱导后,B、C、D组BMSCs形态逐渐向肝样细胞转化,D组28 d时细胞形态与肝细胞相对比相似度最高.糖原染色28 d时A组无染色,B、C、D组染色较前增多,B、C组间无明显差异(P>0.05),D组染色率最高(P<0.05).Q-PCR检测AFP、ALB、CK-18表达逐渐升高,28 d时B组与C组各指标较接近(P<0.05).Gal-3与HGF对AFP、ALB的mRNA表达不存在交互效应(AFP:F=0.236,P=0.640;ALB:F=50.639,P=0.000),对CK-18的mRNA表达有协同效应(F=50.639,P=0.000).Western blot检测A组几乎不表达AFP、ALB及CK18,B、C、D组AFP、ALB及CK18蛋白表达随时间延长,逐渐增加.基因芯片检测发现上调基因27个,下调基因62个.涉及TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路.Gal-3及Gal-3+XMU-MP-1诱导组的YAP表达较空白对照组增加,Gal-3+XMU-MP-1较单独应用Gal-3诱导BMSCs分化的效率高.结论 Galectin-3能够单独诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,而且联合HGF诱导BMSCs分化的效率更高.诱导过程与TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信号通路相关.抑制Hippo信号通路可提高诱导效率.

肾纤维化是导致终末期肾病的基本病变,但其确切的分子基础仍未完全阐明.早前的研究已经证明转化生长因子β1(TGFβ1)是肾小管上皮细胞的上皮-间质转化(EMT)的诱导因子,进而导致细胞外基质(ECM)聚集.而肝细胞生长因子(HGF)及骨形态发生蛋白7(BMP7)抵消TGFβ1诱导的EMT并逆转慢性肾伤害,因此,干扰TGF-β/Smad信号通路或抑制ECM沉积是纤维化治疗相关研究的两个重要方向.本文综述了近年来肾纤维化发生机制及治疗方面的新进展.

卵巢早衰(POF)是妇科常见的一种内分泌疾病,目前认为POF的发病与化疗药物损伤、自身免疫功能、遗传、代谢异常等有关.激素替代治疗虽可改变一些临床症状,但不能有效恢复卵巢功能和生育能力,还可能带来明显不良反应.近年来大量研究表明,各种组织来源的间充质干细胞(MSC)及其分泌的细胞因子和外泌体主要通过改善卵巢组织微环境、免疫调节、促进卵泡发育或分化为颗粒细胞,恢复POF者的卵巢功能及生育能力.其中,骨髓MSC作用机制涉及miR-21/PTEN/PI3K/Akt信号途径;羊水干细胞则通过其外泌体中富含miR-146a和miR-10a下调促凋亡蛋白表达;羊膜MSC高表达Nanog,可启动JAK/STAT信号,提高HGF等多种细胞生长因子或抗凋亡蛋白Bcl-2水平;脐带MSC作用机制主要为旁分泌多种细胞因子及外泌体,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白表达,增加DNA修复酶PARP表达;脂肪MSC旁分泌VEGF、TGF-β1、FGF2和HGF等;经血MSC主要分化为卵巢颗粒样细胞改善卵巢微环境,以减少颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁,并促进颗粒细胞增殖和卵泡发育;胎盘MSC的作用与PI3K/Akt信号通路激活及降低Th17/Tc17及Th17/Treg细胞比例,减轻免疫炎症,促进再生,并降低UCP、SOD1和活性氧等,提高线粒体功能有关.

目的:研究宫颈癌细胞培养上清液诱导并维持THP-1巨噬细胞M2表型的作用.方法:培养宫颈癌细胞系HeLa细胞至第3天,收集细胞培养上清液用以检测肿瘤相关细胞因子(IL-4?IL-6及IL-10)及生长因子(ANG-2?HGF?VEGF)分泌情况.将培养至对数生长期的巨噬细胞分为空白对照组(Mθ组)?M2细胞诱导组(M2组)以及HeLa细胞培养上清液处理组(Mθ+sHeLa组).其中M2组予以20 ng/mL IL-4?20 ng/mL IL-10处理使其向M2 细胞极化,Mθ+sHeLa组加入50% HeLa细胞培养上清液处理培养3 d.随后,利用流式细胞术检测各组细胞表面HLA-DR?CD163?CD206的变化;同时,收集细胞培养上清液并检测其中相关细胞因子?生长因子及TGF-β3的含量.最后,采用流式细胞术及Western blot检测巨噬细胞中JAK-STAT6信号通路的变化.结果:HeLa细胞培养上清液中IL-6?HGF?VEGF含量较多.经过HeLa细胞培养上清液处理后的巨噬细胞表面CD163和CD206含量升高(P <0.05).相较于Mθ组,M2 组及Mθ+sHeLa组的巨噬细胞培养上清液中的相关细胞因子(IL-4?IL-6及IL-10)?生长因子(ANG-2?HGF?VEGF)及TGF-β3 含量升高(P <0.05).去除HeLa细胞培养上清液后48 h后,相较于Mθ组,Mθ+sHeLa组分泌相关细胞因子?生长因子及TGF-β3 含量升高(P <0.05).流式细胞术及Western blot结果显示,与Mθ组比,Mθ+sHeLa组的pSTAT6水平升高(P <0.05).结论:HeLa细胞培养上清液可通过激活JAK-STAT6信号通路诱导的THP-1巨噬细胞向M2表型的极化促进肿瘤的生长和血管生成.

目的 探讨胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)对小鼠BV2小胶质细胞分泌肿瘤相关细胞因子的影响.方法 采用0、50、100、200和500μg/L GDNF分别处理BV2细胞12、24、36和48 h.实时PCR检测各组细胞中肿瘤抑制因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素β(IFN-β)和白细胞介素10(IL-10)和肿瘤促进因子IL-1β、转化生长因子β(TGF-β)、肝细胞生长因子(HGF)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA水平.ELISA法检测TNF-α、IFN-β和IL-1β的蛋白分泌水平.利用GDNF和GFR-α1的中和抗体处理BV2细胞,并采用ELISA检测IL-1β蛋白的分泌量.结果 GDNF显著抑制TNF-α和IFN-β的mRNA表达,同时显著升高IL-1β、TGF-β和MMP9的mRNA表达(P<0.05).TNF-α、IFN-β和IL-1β的蛋白分泌水平与mRNA结果一致.GDNF和GFR-α1的中和抗体均显著抑制了IL-1β蛋白的分泌,且中和GFR-α1显著抑制了GDNF诱导的IL-1β蛋白的分泌(P<0.05).结论 GDNF处理的小胶质细胞低分泌肿瘤抑制因子、高分泌肿瘤促进因子,阻断GFR-α1能够抑制GDNF诱导的IL-1β蛋白分泌,提示GDNF可能经GFR-α1介导的信号通路重塑利于胶质瘤进展的微环境.

心房颤动(AF)是心血管类疾病的常见并发症,近年来随着全球人口老龄化,AF 的发病率呈逐年上升趋势,严重影响患者的生存率及生活质量[1-2].AF的发病机制尚不十分清楚,它受血流动力学、内皮损伤、凝血系统、纤溶系统及炎性因子等多因素作用[3-5].目前研究最为广泛的是患者心房纤维化导致心房重构引发心房颤动[6-7].本文通过检测与心房纤维化密切相关的结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)及转化生长因子β1 (TGF-β1 )/Smads 信号通路,探寻诱发心房颤动的发生机制,为临床早期预防和治疗提供指导.