目的 研究何首乌苷(2,3,5,4′-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-O-glucoside,THSG)在脑缺血再灌注(cerebral ischemia/reperfusion,CI/R)中对大鼠皮层神经元的保护作用.方法 采用线栓法建立大鼠短暂性大脑中动脉栓塞再灌注(transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,tMCAO/R)模型.雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和THSG低、中、高剂量(10、20、40 mg/kg)组,每组 10 只.采用Longa 5 分法评估神经功能缺损情况;TTC染色检测大鼠脑梗死体积百分比;苏木素-伊红(HE)染色检测神经元结构;Nissl染色检测Nissl小体数量;Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2 基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、PTEN诱导的激酶 1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、微管相关蛋白1轻链 3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62 的蛋白表达;透射电镜观察皮层神经元线粒体自噬情况;免疫荧光检测神经元Parkin、LC3的表达.结果 THSG显著降低了MCAO/R大鼠脑梗死体积百分比和神经功能缺损评分(P＜0.05、0.001),降低了MCAO/R大鼠皮层神经元结构损伤和Nissl小体丢失的现象,下调了皮层区cleaved Caspase-3、Bax、p62 蛋白表达(P＜0.05、0.01、0.001),上调了皮层区Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达(P＜0.01),促进皮层神经元中自噬体的数量增加以及PINK1、Parkin蛋白表达(P＜0.05、0.001).结论 THSG能显著改善MCAO/R大鼠皮层神经元损伤,其神经保护机制与促进PINK1/Parkin依赖性线粒体自噬途径有关.

目的:探究何首乌中成分含量随生长年限和采收季节的变化规律.方法:建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ-MS/MS),测定德庆地区何首乌药材中 14 个成分反式-2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(trans-THSG)、顺式-THSG(cis-THSG)、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-(2"-O-阿魏酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷、虎杖苷、白藜芦醇、儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、芦丁、没食子酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、对香豆酸和决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷含量.结果:建立了准确可靠的UPLC-QQQ-MS/MS测定何首乌中 14 个成分含量的方法;随生长年限的增加,何首乌中二苯乙烯苷类、黄酮类、酚类化合物含量多降低;随采收季节的变化,二苯乙烯苷类、黄酮类、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷成分多春季含量最高、秋季含量最低,酚类化合物多夏季含量最高、春秋含量低.结论:成分的含量与何首乌药材生长年限及采收季节密切相关,其中采收季节变化较为明显;以trans-THSG、决明酮-8-O-β-D-葡萄糖苷作为潜在肝毒性物质,cis-THSG作为有效成分,秋季为何首乌的适宜采收期,与《中华人民共和国药典》2020 年版规定相符.

该文探讨何首乌主要化学成分2,3,5,4'-四羟基芪-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-Dglucopyranoside,THSG)、蒽醌类(大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚)对人孕烷X受体(human pregnant X receptor,PXR)介导的CYP3A4的转录调控作用.利用前期建立的PXR介导的CYP3A4药物诱导快速筛选技术,采用MTS细胞检测方法考察何首乌中主要化学成分对细胞活性的影响,计算IC50;利用双荧光素酶报告基因系统,将PXR表达载体和含CYP3A4转录调控区的报告基因载体共转染HepG2细胞,10 μmol·L-1利福平(RIF)为阳性对照,10 μmol·L-1酮康唑(TKZ)为阴性对照,用THSG(2.5,5,10 μmol·L-1)和蒽醌类成分(2.5,5,10 μmol·L-1)分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测.结果表明,空载质粒pcDNA3.1与pGL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素对CYPβA4的调控多为抑制效应,大黄素对CYP3 A4产生诱导作用;pcDNA3.14-PXR与pGL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素均产生诱导效应.综上,THSG和蒽醌类成分均可对CYP3A4产生抑制或激活效应,PXR参与后,上述成分对CYP3 A4均产生诱导效应,提示何首乌中主要成分对CYP3A4的诱导作用是通过PXR实现的.以上结果提示在与何首乌联合用药时应注意潜在的药物相互作用,提高中药的安全性和有效性.

OBJECTIVE This study investigated transcriptional regulation of the main chemical con-stituents of Polygonum multiflorum Thunb. including Stilbene Glucoside (THSG) and anthraquinone constituents (Emodin, Rhein, Aloeemodin, Chrysophanol and Physcion) and six potential liver injury constituents(gallic acid,quercetin,luteolin,kaempferol,resveratrol)on mediated by PXR CYP3A4.Early establishment of pregnane X receptor mediated CYP3A4 drug induced rapid screening technique was used to determine the effects of these constituents. METHODS First,effect of constituents on the cell activity was detected by MTS cell viability assay. IC50was calculated. Second, the expression vector and reporter vector were co-transfected into Hep G2 cells,10 μmol·L-1Rifampicin as a positive control, 10 μmol·L-1Ketoconazole as a negative control. After treated with different concentrations of (the an-thraquinone constituents concentrations were 2.5,5 and 10 μmol·L-1;the concentrations of Gallic Acid, Quercetin,Luteolin,Kaempferol,Apigenin,Resveratrol concentrations were 5,10 and 20 μmol·L-1)for 24 h,the cells were tested for dual luciferase activity.RESULTS The results show that the inhibitory ef-fect of THSG,Chrysophanol,Emodin,Rhein and Aloeemodin on CYP3A4 was inhibited by co-transfec-tion of pcDNA3.1 and pGL4.17-CYP3A4. The expression of pcDNA3.14-PXR and pGL4.17-CYP3A4 was induced by the four constituents. Besides, Emodin has a directly inducing effect. Four anthraqui-none constituentscan induce the effect of CYP3A4 by PXR, but Emodin can directly induce CYP3A4. THSG can inhibit CYP3A4,but in the presence of PXR plasmid can induce CYP3A4.For the six poten-tial liver injury constituents, results show that the plasmid pcDNA3.1 was cotransfected with pGL4.17-CYP3A4 regulation of Gallic Acid and Resveratrol on CYP3A4 inhibitory effects of Quercetin,Luteolin, Kaempferol have an induce effect; after pcDNA3.14-PXR and pGL4.17-CYP3A4 cotransfected, Quercetin, Luteolin, Kaempferol, Apigenin, Resveratrol have induced effect, three constituents'induc-tion effect had significant difference.CONCLUSION 12 kinds of Polygonum multiflorum Thunb.constit-uents have inhibitory or activating effects on CYP3A4, after the participation of PXR, 9 components have induced effects on CYP3A4, and the induction effect of 6 components has significant difference. The results suggested that we should pay attention to potential drug interactions when combined with Polygonum multiflorum Thunb.,and improve safety and efficacy.

目的:研究不同炮制方法及不同提取溶剂对何首乌中主要成分含量的影响.方法:采用黑豆汁蒸法和清蒸法对生何首乌进行炮制,分别用水、50％乙醇、70％乙醇、90％乙醇对生何首乌、黑豆汁制何首乌、清蒸制何首乌和市售制何首乌4种饮片进行提取,采用高效液相色谱法同时测定各样品中4种主要成分没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量.结果:3种何首乌炮制品的4种提取液中4种主要成分的含量均较生品中更高;没食子酸以水提时含量最高,二苯乙烯苷以90％乙醇提取时含量最低,大黄素和大黄素甲醚以50％和70％乙醇提取时含量较高.结论:不同炮制方法和提取溶剂能明显影响何首乌中主要成分的含量;各炮制品中各成分的含量变化未呈现一定的规律性.

目的 研究二苯乙烯苷对人结肠癌细胞增殖及凋亡的作用,并探讨潜在的分子机制.方法 通过CCK8检测二苯乙烯苷对细胞增殖及顺铂化疗增敏的影响;流式细胞仪检测二苯乙烯苷对细胞凋亡的影响,Western blot检测二苯乙烯苷处理细胞后PI3K/AKT通路相关指标的变化.结果 CCK8结果显示,THSG可抑制HCT116和SW480细胞增殖,其对细胞的抑制呈时间和剂量依赖.THSG与顺铂联合运用可增加HCT116和SW480细胞对顺铂的敏感性.流式细胞仪检测结果显示,THSG作用于HCT116和SW480细胞后,细胞早期凋亡率呈剂量依赖递增.Western blot结果显示,THSG可上调PTEN的表达,下调P-AKT、P-IKKβ的磷酸化水平.结论 THSG可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB通路从而抑制HCT116和SW480细胞增殖并促进凋亡.

何首乌为常见的补益类中药,在临床中具有广泛的应用.近年来有较多与何首乌相关的文献报道,通过对国内外相关文献进行整理和分析,概述何首乌的化学成分及其药理作用的研究进展.目前,已从何首乌中分离出二苯乙烯苷类、蒽醌类、黄酮类、磷脂类、苯丙素类以及其他化合物共133种,其中二苯乙烯苷二聚体以及二蒽酮苷是近期从何首乌中分离得到的两类新化合物.何首乌的药理活性研究主要有抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化以及神经保护等作用,在治疗神经退行性疾病、防治动脉粥样硬化、降血糖等方面具有潜力,其药效成分主要包括二苯乙烯苷类、蒽醌类以及黄酮类,其中二苯乙烯苷类中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-葡萄糖苷即THSG显示出多种生物活性,但对何首乌中其他化合物药理活性的研究较少.因此,为保证何首乌的进一步开发利用,建议对其药效的物质基础进行更加深入、全面的研究.

目的 分别使用二维(two-dimension,2D)和三维(three-dimension,3D)培养的人源肝细胞模型评价何首乌醇提物(polygonum multiflorum ethanol extract,PMEE)和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)的毒性并比较其差异.方法 2D和3D HepaRG细胞模型给予不同浓度的PMEE和THSG处理24、48、144 h后,检测细胞存活率、DNA损伤程度和细胞凋亡.结果 PMEE可明显抑制2D模型中HepaRG的增殖,但对3D模型中HepaRG的抑制作用不明显;PMEE对2D模型致DNA损伤作用也强于3D模型.THSG对3D模型中HepaRG的抑制作用强于2D模型,且在3D模型的碱性彗星试验中,THSG高剂量组的凋亡细胞发生率显著升高(P＜0.01).结论 3D肝培养模型较2D肝培养模型灵敏度高,PMEE与THSG均具有一定的肝脏毒性,经3D肝培养模型代谢后,PMEE的毒性有所减弱,THSG的毒性则有所增强.

目的 研究二苯乙烯苷(THSG)对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外常规培养HepG2细胞,采用不同剂量(0、5、10、20、40、60 mmol/L)THSG处理HepG2细胞,CCK8法分析不同剂量药物处理24、48、72 h后细胞的存活率;不同浓度(0、5、10、20 mmol/L)THSG干预HepG2细胞24 h后,PI染色后流式细胞仪分析细胞周期分布情况,Annexin/PI双染后分析HepG2细胞凋亡情况,Western Blot方法检测HepG2细胞中Eag1、p21、p27、CyclinE1和CDK2蛋白表达水平的变化.结果 不同剂量THSG干预HepG2细胞24、48、72 h后,IC50值分别为58.4、39.7和21.6 mmol/L;THSG以剂量依赖方式将HepG2细胞停留在G0/G1期,并且随着THSG处理剂量的升高,HepG2细胞凋亡的指数逐渐增高(P＜0.05);HepG2细胞中Eag1、CyclinE1和CDK2表达水平逐渐降低,而p21、p27蛋白表达水平逐渐升高(P＜0.05).结论 THSG抑制HepG2细胞增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Eag1钾通道活性,上调p21、p27表达、下调CyclinE1和CDK2表达有关.

目的 研究二苯乙烯苷(THSG)对大肠癌SW116细胞凋亡的诱导作用及其可能的分子机制.方法 体外常规培养SW116细胞,采用不同剂量(0、5、10、20、40、80、120 mmol/L)THSG处理SW116细胞,CCK8法分析不同剂量药物处理24、48、72 h后细胞的存活率;不同浓度(0、10、20、40 mmol/L)THSG干预SW116细胞24 h后,Annexin/PI双染后流式细胞仪检测SW116细胞凋亡情况,Western blot方法 检测SW116细胞中凋亡相关蛋白PARP和Pro-caspase 3的表达及MAPKs信号通路p38、ERK、JNK的磷酸化水平;p38、ERK、JNK特异性抑制剂干预细胞后,Western blot方法 检测抑制剂对p38、ERK、JNK磷酸化的抑制作用.结果 TH-SG呈剂量和时间依赖性地抑制大肠癌SW116细胞的增殖,诱导细胞凋亡;THSG干预SW116细胞后,Cleaved PARP表达显著升高、Pro-caspase 3表达显著降低,胞内p38和JNK磷酸化水平显著升高(P<0.05),然而ERK磷酸化水平显著降低(P<0.05).结论 特异性抑制剂阻断ERK激活,可以增强THSG诱导SW116细胞凋亡,特异性阻断p38、JNK活化,能够部分逆转THSG对p38和JNK磷酸化和细胞凋亡的诱导作用.THSG通过激活p38和JNK信号传导,抑制ERK信号途径,诱导大肠癌SW116细胞凋亡.