目的:探讨细胞周期数依赖性蛋白激酶4(CDK4)和三结构域蛋白58(TRIM58)在结直肠癌组织中的表达变化，及其在结直肠癌发生发展中的作用和对患者预后的影响。方法:收集广东医科大学附属医院2020年3月至2022年11月病理确诊的117例结直肠癌组织标本和癌旁组织标本，采用免疫组织化学法检测以上组织中TRIP6和TRIM58表达，采用 χ2检验分析分析CDK4和TRIM58表达与结直肠癌临床病理因素及预后的相关性。 结果:CDK4在结直肠癌组织中阳性表达率为63.25%(74/117)，明显高于癌旁组织中阳性表达率35.04%(41/117)，差异有统计学意义( χ2＝18.621， P<0.01)。CDK4表达水平与结直肠癌患者淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期(TNM stage)、浸润深度明显相关( χ2＝4.836、5.376、6.228、6.935， P<0.05)，CDK4表达水平与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位无明显相关( χ2＝ 0.002、0.163、0.022， P>0.05)。TRIM58在结直肠癌组织中阳性表达率为33.33%(39/117)，明显低于癌旁组织中阳性表达率65.81%(77/117)，差异有统计学意义( χ2＝24.686， P<0.01)。TRIM58表达水平与结直肠癌患者淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期明显相关( χ2＝ 5.723、6.899、5.571， P<0.05)，TRIM58表达水平与结直肠癌患者性别、年龄、浸润深度、肿瘤部位无明显相关( χ2＝0.017、0.154、0.026、0.287， P>0.05)。 结论:结直肠癌组织中CDK4表达上调、TRIM58表达下调，对结直肠癌患者进行CDK4和TRIM58的检测可评估肿瘤的恶性程度并判断患者预后。

目的:组蛋白H3赖氨酸9位(H3K9)的甲基化是造血和白血病发生中关键的表观遗传学修饰,由组蛋白甲基化酶和去甲基化酶精确调控.组蛋白H3K9去甲基化酶KDM3B则是一个潜在的白血病发生抑制基因.我们旨在探讨白血病中KDM3B的潜在靶基因.方法:干涉多个急性髓系白血病细胞株中的KDM3B基因后进行微阵列芯片实验,采用基因集富集分析(GSEA)及Venn分析数据,筛选出若干KDM3B潜在的靶基因,并用实时定量PCR对CDKN1A基因的结果进行验证.结果:对比GSEA的分子标签数据库中标志基因集(H)和已建立的基因集(C2),在NB-4和PLB-985细胞中(分别影响),与KDM3B正相关的基因分别有2 375和2 007个,其中P＜0.05的基因分别有89和67个;与KDM3B负相关的基因分别有1 882和2 250个,其中P ＜0.05的基因分别有62和67个,包括FLT3、NRAS、EVI1和IL4等基因.对比GSEA的分子标签数据库中染色体位置(C1)、已建立的基因集(C2)、模序(C3)、肿瘤相关基因集(C4)、GO基因集(C5)、致瘤基因集(C6)、免疫学基因集(C7)和标志基因集(H),在NB-4和PLB-985细胞中(共同影响),与KDM3 B正相关的基因有4 815个,其中P＜0.05的基因有130个;与KDM3B负相关的基因有4 400个,其中P＜0.05的基因有97个,包括POU5F1和CDKN1A等基因.干扰NB-4和PLB-985细胞中KDM3B基因的表达,我们选取影响最强的600个探针用Venn分析,在两种细胞系中表达均下降的基因有16个,包括血液病相关基因CCDN3、TRIM24、MAPKI3、SOX6等;在NB-4细胞中表达降低但在PLB-985细胞中表达升高的基因有17个,包括RARRES3和CD58等基因.实时定量PCR结果显示干扰PLB-985细胞中KDM3B后CDKN1A的表达是对照组的1.18倍.结论:KDM3B调控急性髓系白血病相关基因,CDKN1A是一个潜在的KDM3B靶基因.

目的 探讨中药六味地黄丸干预绝经后骨质疏松患者的分子机制并分析预测其靶标和药物作用通路.方法 检索并下载GEO中与采用六味地黄丸干预绝经后骨质疏松症的微阵列基因表达数据集.通过获取的基因表达数据集,分析六味地黄丸干预前后绝经后骨质疏松症患者血液中差异表达基因变化,并将这部分差异表达基因与在绝经后骨质疏松症患者和正常绝经女性血液中差异表达的基因取交集,获得两对比组中共同差异表达的基因.通过基因本体论数据库(GO)对获得的共同差异表达基因分别从生物过程(BP)、分子功能(MF)和细胞组分(CC)三方面进行功能富集分析;利用京都基因和基因组百科全书数据库(KEGG)进行通路富集分析.利用生物通用交互数据集库(BioGRID)分析获得与共同差异表达基因产物互作的蛋白质,并构建蛋白质-蛋白质互作关系(PPI)网络,采用Cytoscape软件实现蛋白质-蛋白质互作关系网络的可视化.应用中医药数据库(BATMAN-TCM)对六味地黄丸主要中药成分的靶标基因进行预测.结果 六味地黄丸干预后,得到1350个差异表达基因,其中上调表达基因322个,下调表达基因1027个.58个共同差异表达基因与六味地黄丸干预绝经后骨质疏松的分子机制相关,六味地黄丸干预后43个基因下调,15个基因上调.六味地黄丸主要中药成分的10个共同差异表达基因靶标为ESR1,FGFR2,MED1,PGR,PRKCB,PTGS1,PTGS2,TRIM24,VDR,WNT4.与六味地黄丸干预组差异表达基因对比分析,ATF2,FBXW7以及RDX基因在干预后呈现显著差异表达.结论 ATF2,FBXW7和RDX基因为参与六味地黄丸干预绝经后骨质疏松分子调控机制的关键基因.六味地黄丸主要中药成分的10个共同靶标基因中,ESR1,FGFR2,MED1,WNT4为六味地黄丸干预治疗绝经后骨质疏松等相关内分泌疾病的潜在调控基因.

目的:探讨结直肠癌组织中三重基序蛋白58(TRIM58)蛋白表达和基因甲基化状态及临床意义.方法:选取95例初治结直肠癌患者的肿瘤组织及配对的癌旁组织标本.采用免疫组化法检测组织TRIM58蛋白表达量,甲基化特异聚合酶链式反应(MSP)检测TRIM58基因启动子区甲基化状态,并分析与患者病理特征及预后的关系.结果:结直肠癌组织中TRIM58蛋白阳性表达率低于癌旁组织[40.0％(38/95)和75.79％ (72/95),P＜0.05];且与肿瘤直径、临床TNM分期、浸润深度有关(P＜0.05).结直肠癌组织中TRIM58基因甲基化率高于癌旁组织[69.47％(66/95)和35.79％(34/95),P＜0.05];且与肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、临床TNM分期、浸润深度有关(P＜0.05).癌旁组织和肿瘤组织中TRIM58基因甲基化状态与TRIM58蛋白表达均呈负相关性(rs=-0.449,-0.765,P=0.000).随访5～ 65个月,肿瘤组织TRIM58蛋白阳性表达者5年生存率高于阴性表达者[81.08％ (30/37)和50.94％(27/53),P＜0.05];且TRIM58基因甲基化者5年生存率低于未甲基化者[53.97％ (34/63)和85.19％ (23/27),P＜0.05].结论:结直肠癌组织中TRIM58蛋白多呈低表达水平,且与TRIM58基因启动子区域高甲基化状态有关.而且肿瘤组织中TRIM58基因高甲基化状态和蛋白低表达量与患者临床病理特征及预后不良存在一定联系.

Protein ubiquitination is essential for diverse cellular functions including spermatogenesis.The tripartite motif(TRIM) family proteins,most of which have E3 ubiquitin ligase activity,are highly conserved in mammals.They are involved in important cellular processes such as embryonic development,immunity,and fertility.Our previous studies indicated that Trim69,a testis-specific expressed TRIM family gene,potentially participates in the spermatogenesis by mediating testicular cells apoptosis.In this study,we investigated the biological functions of Trim69 in male mice by established Trim69 knockout mice with CRISPR/Cas9 genomic editing technology.Here,we reported that the male Trim69 knockout mice had normal fertility.The adult knockout mice have shown that the appearance of testes,testis/body weight ratios,testicular histomorphology,and the number and quality of sperm were consistent with wild-type mice.These results indicated that the E3 ubiquitin ligase protein Trim69 was not essential for male mouse fertility,and it might be compensated by other TRIM family members such as Trim58 in Trim69-deficiency testis.This study would help to elucidate the functions of tripartite motif protein family and the regulation of spermatogenesis.

目的 探讨TRIM58在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的足细胞损伤中的作用及其分子机制.方法 将体外培养的永生化人足细胞分成4组:正常对照组(Control),LPS刺激组(LPS),TRIM58过表达+LPS组(OE-TRIM58+LPS),空载体+LPS组(OE-NC+LPS).通过ELISA检测炎性分子IL-1β、TNF-α的表达;通过real-time PCR、Western blot、免疫荧光检测足细胞Desmin、ZO-1的表达;通过Transwell检测足细胞迁移能力;通过real-time PCR、Western blot检测TRIM58的表达;通过Western blot检测调控TRIM58对β-catenin表达的影响.结果 LPS刺激后,炎性因子IL-1β、TNF-α的表达明显升高,足细胞Desmin蛋白和mRNA表达明显上调,ZO-1蛋白和mRNA表达明显下调,TRIM58的蛋白和mRNA表达下调,同时伴有β-catenin的表达升高.Transwell结果表明,LPS刺激下足细胞迁移能力明显增强.过表达TRIM58可明显减轻LPS诱导的炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的释放,抑制上皮间充质转化和足细胞迁移能力,缓解足细胞损伤.此外,TRIM58过表达可下调LPS诱导的β-catenin的表达.结论 LPS刺激可下调TRIM58的表达,而过表达TRIM58可能通过抑制WNT/β-catenin通路,减轻LPS诱导的足细胞炎性反应和EMT,从而缓解足细胞损伤.

目的 研究不同宫颈组织中HPV16/18 E6和TRIM25蛋白表达水平及意义.方法 选取宫颈癌患者105例、CINIⅠ ～Ⅲ患者62例、CINⅠ患者58例和慢性宫颈炎患者50例,免疫组织化学方法检测在各宫颈组织中HPV16/18 E6和TRIM25的表达情况.用Spearman相关分析法分析HPV16/18 E6和TRIM25表达在宫颈癌组织中的相关性.用Kaplan-Meier法分析HPV16/18 E6和TRIM25表达水平与宫颈癌患者预后的关系;COX回归分析法分析宫颈癌患者预后的危险因素.结果 HPV16/18 E6、TRIM25在不同宫颈组织中表达比较,差异有统计学意义.HPV16/18 E6和TRIM25在宫颈癌组织中表达水平呈负相关.HPV16/18 E6表达与组织分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径有关,TRIM25表达与组织分化程度、淋巴结转移有关.HPV16/18 E6阳性表达患者的总生存期短于阴性表达患者.TRIM25阴性表达患者的总生存期短于阳性表达患者.淋巴结转移、HPV16/18 E6可作为宫颈癌患者预后的独立危险因素,TRIM25可作为宫颈癌患者预后的独立保护因素.结论 HPV16/18 E6、TRIM25表达与不同宫颈病变的发生、发展及预后有关,有望成为HPV感染及宫颈癌辅助基因治疗的靶点.

目的:探讨三基序蛋白58(TRIM58)与OVOL1蛋白在结直肠癌组织中的表达及对临床预后的意义.方法:选取2016年11月—2017年10月经抚顺市中心医院确诊并进行治疗的62例结直肠癌患者,收集其癌组织标本及对应的癌旁组织标本.采用免疫组织化学染色法检测癌组织与癌旁组织中TRIM58与OVOL1蛋白表达水平.采用χ2检验和Cox回归分析分别探讨TRIM58与OVOL1蛋白表达与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系.结果:结直肠癌组织中TRIM58、OVOL1蛋白高表达率均明显低于癌旁组织(32.26％比61.29％;35.48％比59.68％;P<0.001).不同年龄、性别、肿瘤部位、分化程度及肿瘤直径结直肠癌患者TRIM58、OVOL1高低表达率差异无统计学意义(P>0.05);但结直肠癌不同TNM分期、是否淋巴结转移患者TRIM58、OVOL1高低表达率差异有统计学意义(P<0.05),且TNM分期越高、出现淋巴结转移的结直肠癌组织中的TRIM58、OVOL1表达明显降低(P<0.05).TRIM58蛋白高表达的结直肠癌患者中位生存期(35个月)明显高于TRIM58蛋白低表达患者(25个月),OVOL1蛋白高表达的结直肠癌患者中位生存期(36个月)明显高于OVOL1蛋白低表达患者(24个月),差异均有统计学意义(P<0.05).单因素分析得出,TNMⅢ～Ⅳ期、淋巴结转移、TRIM58低表达、OVOL1低表达结直肠癌患者的生存时间均缩短(P<0.05);Cox多因素回归分析得出:TNMⅢ～Ⅳ期、淋巴结转移、TRIM58低表达、OVOL1低表达均为结直肠癌预后的危险因素(P<0.05).结论:TRIM58、OVOL1蛋白在结直肠癌组织中均呈低表达,TRIM58、OVOL1蛋白表达水平与患者临床病理特征显著相关,TRIM58、OVOL1蛋白低表达的结直肠癌患者预后较差.

目的:基于生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮(SLE)患者与正常人的差异表达基因(DEGs),并预测潜在的治疗中药.方法:利用edgeR分析数据集GSE154851,获得DEGs,通过String构建蛋白互作(PPI)网络,使用Cytoscape的CytoHubba插件筛选关键基因,并进行GO功能及KEGG信号通路富集分析.将关键基因输入到Coremine Medical数据库筛选潜在治疗中药.结果:筛选出228个DEGs,其中有196个基因表达上调,32个基因表达下调.筛选到的关键基因有DDX58、ISG15、STAT1、TRIM25、IRF7、IFIH1、NOD2、UBE2L6、NOD1、FLT3,GO分析显示关键基因参与的主要生物过程包括调节IFN-I、TNF、IL-6的产生,对病毒的应答等;KEGG分析显示主要涉及的信号通路有RIG-I-样受体信号通路、甲型流感、EB病毒感染等.预测出治疗SLE的潜在中药有水牛角、赤芍、鳖甲、半夏、板蓝根、黄柏、独活、厚朴等.结论:本研究通过分析SLE的基因表达数据,获得DEGs,从而筛选了治疗SLE的关键基因以及潜在的治疗药物,为探索治疗SLE的药物选择提供了新思路.

目的:分析急性髓系白血病(AML)中三基序蛋白58(tripartite-motif protein 58,TRIM58)基因启动子甲基化水平与其mRNA表达的关系,探讨TRIM58基因在AML中的表达调控.方法:分别用亚硫酸氢盐修饰后PCR、实时荧光定量PCR技术检测原代CD34+和CD34-AML细胞以及白血病细胞株KG1a、K562中TRIM58基因启动子甲基化状态和TRIM58 mRNA表达情况.结果:AML患者CD34+细胞TRIM58基因mRNA表达下调10例,CD34-细胞TRIM58基因mRNA表达下调12例,TRIM58基因启动子甲基化水平与正常对照比较存在统计学差异(P＜0.05);KG1a及K562细胞株中TRIM58 mRNA表达下调,经地西他滨处理后TRIM58 mRNA表达上调.结论:AML细胞中TRIM58 mRNA表达下调,可能与其启动子甲基化状态具有相关性.