目的:观察肝细胞生长因子(HGF)对人毛囊生长的影响，并探讨其促进毛发生长的作用机制。方法:毛囊来源于中国医学科学院整形外科医院4例除皱术后患者废弃的正常头皮组织，分离单根毛囊进行体外器官培养。以常规培养为对照组，培养液中添加浓度为10 ng/ml的HGF作为实验组，显微镜下测量不同培养天数毛囊的生长长度；通过观察培养毛囊毛球部毛基质与毛乳头的形态，评价HGF对毛囊生长周期的影响。分离培养人毛囊上皮细胞，应用流式细胞术对其表面标志进行鉴定；以常规培养的毛囊上皮细胞为对照组，以培养基添加10 ng/ml的HGF处理48 h后的毛囊上皮细胞为实验组，收集细胞提取RNA，转录组测序分析HGF对毛囊上皮细胞基因表达的影响，应用real-time PCR对测序分析结果进行验证。各项定量数据以均值±标准差表示，2组间比较应用独立样本 t检验， P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:随着体外培养时间的延长，毛囊生长趋于停止；毛囊体外培养7、10、14 d时，对照组毛囊生长长度(单位0.1 mm)分别为12.210±4.191、13.710±3.518、14.000±4.057，实验组HGF促进毛发生长，生长长度分别为16.700±5.143、18.800±4.917、23.000±7.196，差异具有统计学意义( t＝2.353， P<0.05； t＝2.962， P<0.01； t＝3.910， P<0.01)；分离培养的毛囊上皮细胞呈典型的铺路石样形态，表达上皮细胞表面标志分子CD49f；转录组测序结果显示，毛囊上皮细胞高表达上皮细胞标志基因KRT14、KRT5、KRT6A、CDH1、SOX9、CD49f，FPKM值分别为6 012±2 141、4 072±1 369、3 896±1 991、95.06±21.48、101.30±38.52、162.00±47.83；不表达或极低表达间质细胞标志基因THY1、DPP4、CDH2 (N-cadherin)、ACTA2、PDGFRA、COL1A1、COL3A1，FPKM值分别为0.740±0.825、0.632±0.765、0.000±0.034、1.674±1.235、0.000±0.014、2.526±3.531、0.000±0.015；与对照组相比，实验组经HGF处理后毛囊上皮细胞中改变的基因显著富集于细胞周期及细胞分裂相关生物学过程，相关基因的表达下调；Real-Time PCR验证显示CENPA、CDC20、UBE2C、CDK1、AURKB、NDC80分别降为对照组的0.689±0.053 ( t＝10.170, P<0.001)、0.676±0.121 ( t＝4.652, P<0.01)、0.761±0.148 ( t＝2.785, P<0.05)、0.599±0.153 ( t＝4.530, P<0.05)、0.706±0.113 ( t＝4.507, P<0.05)、0.579±0.092 ( t＝7.931, P<0.01)倍，差异具有统计学意义。 结论:HGF促进毛囊体外器官培养的生长并延长其生长时间；但在细胞水平上抑制毛囊上皮细胞增殖相关基因表达。

目的:比较单侧双通道内镜（unilateral biportal endoscopy，UBE）与单通道内镜（uniportal endoscopy，UE）下单侧椎板切开双侧减压（unilateral laminotomy for bilateral decompression，ULBD）治疗腰椎管狭窄症的临床疗效。方法:回顾性分析大连医科大学附属大连市中心医院及温州医科大学附属第一医院2020年1月至2021年6月通过UBE或UE进行ULBD治疗的82例腰椎管狭窄症的患者资料，男36例、女46例；年龄（63.3±7.5）岁（范围47~81岁）。UBE组42例，男20例、女22例，年龄（63.2±7.6）岁（范围47~81岁）；UE组40例，男16例、女24例，年龄（63.5±7.5）岁（范围48~80岁）。比较两组手术时间、住院天数和手术并发症发生率，术前、术后第1天、7天、1个月和6个月的腰腿痛视觉模拟评分（visual analogue scale，VAS）以及术前、术后1个月和6个月的Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index，ODI）。计算手术前后的硬膜囊面积、入路侧关节突关节切除角度、盘黄间隙减压率和骨性侧隐窝减压率。结果:所有患者均顺利完成手术。UBE组手术时间为（63.1±7.0）min、住院时间（3.9±0.9）d；UE组分别为（61.2±6.2）min、（3.7±0.9）d，差异均无统计学意义（ t=1.31， P=0.195； t=1.24， P=0.217）。UBE组的腰腿VAS由术前（7.19±0.97）分降至术后第1天（3.43±0.63）分、第7天（1.71±0.60）分、1个月（1.33±0.48）分和6个月（1.36±0.48）分（ F=352.29， P<0.001）；UE组的腰腿痛VAS评分由术前（6.85±0.89）分降至术后第1天（2.45±0.75）分、第7天（1.75±0.59）分、1个月（1.33±0.47）分和6个月（1.28±0.45）分（ F=291.44， P<0.001）。术后第1天UBE组的腰腿痛VAS高于UE组（ t=6.41， P<0.001），术后第7天两组差异无统计学意义（ t=-0.27， P=0.786）。UBE组的ODI由术前66.62%±4.98%降至术后1个月21.81%±2.61%和6个月11.62%±2.31%（ F=1991.35， P<0.001）；UE组由术前64.35%±5.16%，降至术后1个月22.85%±3.26%和6个月11.15%±2.86%（ F=1931.18， P<0.001）。术后UBE组的硬膜囊面积为（135.1±10.0）mm 2大于UE组的（120.9±10.4）mm 2（ t=6.30， P<0.001）。术后UBE组的入路侧关节突关节切除角度为69.3°±4.9°小于UE组的94.3°±4.1°（ t=-25.00， P<0.001）。两组同侧的盘黄间隙减压率分别为39.0%±3.0%和38.7%±3.3%（ t=1.52， P=0.134），对侧分别为41.6%±3.3%和22.8%±3.2%（ t=26.32， P<0.001）。两组同侧的骨性侧隐窝减压率分别为70.0%±4.8%和59.3%±3.9%（ t=15.64， P<0.001），对侧分别为73.0%±3.4%和48.4%±4.3%（ t=28.86， P<0.001）。UBE组同侧盘黄间隙减压率及骨性侧隐窝减压率与对侧的差异无统计学意义（ t=-1.40， P=0.174； t=-1.72， P=0.096），而UE组同侧的盘黄间隙减压率及骨性侧隐窝减压率均大于对侧（ t=28.51， P<0.001； t=13.95， P<0.001）。 结论:通过UE和UBE行ULBD治疗腰椎管狭窄症均能取得良好的短期临床疗效。UB术后早期疼痛缓解优于UBE；而UBE能够更好地保留关节突关节，在影像学上减压效果更佳。

目的:通过生物信息学方法筛选出肝癌中的关键基因，并预测其在肝癌发生中的潜在分子机制及其对肝癌预后的影响。方法:通过基因表达综合数据库(GEO)下载3个肝癌微阵列数据集，进行差异分析并取其交集。利用DAVID数据库对187个差异表达基因(DEGs)进行功能富集分析。通过STRING数据库及Cytoscape软件构建DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络及筛选关键基因。利用GEPIA、GSCALite数据库进行关键基因通路、表达验证及预后分析。结果:获得185个3个数据集交集的DEGs，包括54个上调基因和131个下调基因，这些基因生物功能主要富集在细胞分裂和细胞凋亡，主要参与细胞周期、DNA复制、Rap1信号通路的调节。在PPI网络中筛选出10个关键基因，分别为胸苷激酶1(TK1)、细胞分裂周期相关5(CDCA5)、甲状腺激素受体相互作用体13(TRIP13)、着丝粒蛋白M(CENPM)、异常纺锤形微管组件(ASPM)、着丝粒蛋白F(CENPF)、微型染色体维护复合体组件49(MCM4)、霍利迪连接体识别蛋白(HJURP)、母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)、非染色体结构维护凝缩蛋白Ⅰ复合体G亚基(NCAPG)。关键基因在肝癌中高表达，除UBE2C外，关键基因高表达与肝癌患者总生存率低相关。结论:关键基因与肝癌的发生和预后不良有关。

目的:筛选支气管哮喘核心差异表达基因并对其进行生物信息学分析。方法:从基因表达数据库（GEO）下载哮喘患者巨噬细胞基因芯片数据GSE22528，该数据集包括了10份人肺泡灌洗液的转录组信息，其中哮喘患者和对照个体各5份。采用R 4.0.4软件筛选差异表达基因（DEGs）。利用DAVID 6.8数据库对筛选出的DEGs进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。利用STRING在线数据库对DEGs编码蛋白构建蛋白互作网络（PPI），采用Cytoscape软件构建核心模块并确定核心DEGs。结果:肺泡灌洗液标本均来自加拿大白种人，哮喘患者和对照个体年龄范围分别为20~37和18~36岁，各组男性均为3例。哮喘患者上调基因449个，下调基因47个。GO分析显示：哮喘患者上调基因主要涉及对未折叠蛋白的反应等生物过程，分子功能集中于未折叠蛋白和生长因子的绑定；下调基因主要涉及组蛋白脱乙酰作用和泛素介导的蛋白质降解等生物过程，分子功能集中于组蛋白脱乙酰酶活性。KEGG通路富集分析显示：通路主要由上调基因富集，涉及Hippo信号通路、肥厚型心肌病、雌激素信号通路、致心律失常性右心室心肌病、基底细胞癌、神经活化的受体配体相互作用、扩张型心肌病和黏附连接等信号通路。PPI分析共得到两个核心模块，筛选出14个核心DEGs，分别为促黑色素聚集激素（PMCH）、孤啡肽前体（PNOC）、鞘氨醇-1-磷酸受体2（S1PR2）、鞘氨醇-1-磷酸受体5（S1PR5）、CC型趋化因子配体21（CCL21）、Kelch样蛋白25（KLHL25）、泛素结合酶E2V2（UBE2V2）、F-box蛋白17（FBXO17）、味觉受体2型成员3（TAS2R3）、生长抑素受体2（SSTR2）、代谢型谷氨酸受体2（GRM2）、李斯特E3泛素蛋白连接酶1（LTN1）、LIM域特有蛋白7（LMO7）和环指蛋白19A基因（RNF19A），其中LTN1和UBE2V2下调，其余均上调。结论:哮喘患者与对照个体存在DEGs、PMCH、PNOC、S1PR2、S1PR5和CCL21基因等可能为哮喘发病机制中的核心基因。

目的:探讨干扰S期激酶相关蛋白1(S-phase kinase associated protein 1，SKP1)基因对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导致帕金森病(Parkinson's disease，PD)细胞模型凋亡及泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，UPS)降解α-突触核蛋白(α-synuclein，α-syn)机制的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、SKP1干扰组、SKP1干扰+ MG132(UPS抑制剂)组，对照组细胞正常培养，后三组细胞先用MPP+(0.5 mmol/L)孵育24 h作为PD模型细胞，SKP1干扰组转染慢病毒SKP1-siRNA，SKP1干扰+MG132组转染慢病毒SKP1- siRNA后加入MG132(0.5 μmol/L)干预24 h。采用RT-PCR和Western blot检测细胞中SKP1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein l light chain 3，LC3)、溶酶体相关膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein，LAMP2)、α-syn、泛素激活酶E1(ubiquitin activating enzyme E1，UBE1)、parkin、p27的基因和蛋白表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期水平，CCK-8法检测细胞增殖水平；采用免疫共沉淀法探究SKP1与p27的相互作用。使用SPSS 23.0软件进行统计学分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果:RT-PCR和Western blot结果显示，四组细胞的自噬相关蛋白及泛素相关蛋白LC3、LAMP2、α-syn、UBE1、parkin、p27的mRNA( F＝99.155，43.028，138.464，28.200，22.009，28.147，均 P<0.05)和蛋白( F＝245.517，157.634，315.920，2 336.472，477.429，2 350.201，均 P<0.05)表达水平均差异有统计学意义。SKP1干扰组LC3、LAMP2、α-syn、p27的mRNA和蛋白表达水平均低于MPP+组(均 P<0.05)，UBE1、parkin的mRNA和蛋白表达水平均高于MPP+组(均 P<0.05)；SKP1干扰+ MG132组LC3、α-syn、p27的mRNA和蛋白表达水平均高于SKP1干扰组(均 P<0.05)，UBE1、parkin的mRNA和蛋白表达水平均低于SKP1干扰组(均 P<0.05)。流式细胞术和CCK-8法检测结果显示，四组间细胞凋亡率和细胞抑制率均差异具有统计学意义( F＝2 749.420，171.508，均 P<0.05)。SKP1干扰组细胞凋亡率低于MPP+组[(8.22±0.25)%，(15.30±0.21)%， P<0.05]，而细胞抑制率低于MPP+组[(26.31±3.73)%，(55.05±3.84)%， P<0.05]。SKP1干扰+ MG132组细胞凋亡率[(9.49±0.07)%]高于SKP1干扰组，细胞抑制率[(36.06±2.85)%]高于SKP1干扰组(均 P<0.05)。免疫共沉淀法结果显示，SKP1免疫沉淀后，p27随之减少。 结论:干扰SKP1基因后，PD细胞自噬功能降低，可能与parkin促使α-syn发生泛素化，激活UBE1/parkin介导UPS通路降解α-syn，并介导P27抑制细胞凋亡有关。

目的:探讨OA发病机制中潜在的Hub基因、关键miRNAs、生物过程及相关信号通路，为OA的发病机制及治疗提供生物信息学依据。方法:从基因表达综合数据库（GEO）下载OA滑膜组织样本的表达谱芯片，鉴定差异表达基因DEGs，并进行功能富集分析。构建蛋白-蛋白相互作用网络（PPI），STRING和Cytoscape进行模块分析，进一步鉴定Hub基因，并对Hub基因进行更深一步的miRNAs挖掘。结果:最终鉴定出与OA进展相关的9个Hub基因[细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）3、转导素重复序列包含蛋白（BTRC）、F-框蛋白32（FBXO32）、KLHL22、UBE3A、HUWE1、UBR4、ANAPC5、TRIM50]和2个关键miRNAs（hsa-miR-103a-3P、hsa-miR-107），可能是OA发病机制中的潜在生物标志物。信号转导、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控和蛋白丝氨酸/苏氨酸酶活性与OA的发病机制具有一定的相关性。此外，分析结果表明cAMP信号通路和Rap1信号通路也参与了OA的进展。结论:潜在生物学分子、生物过程及相关通路对于OA的病因研究及治疗研究具有重要的指导意义。

2024年4月3日,浙江大学医学院附属第二医院肿瘤研究所/浙江大学转化医学研究院孙毅教授团队在《发育细胞》(Developmental Cell)杂志上发表了最新研究成果论文"The UBE2F-CRL5ASB11-DIRAS2 axis is an oncogene and tumor suppressor cascade in pancreatic cancer cells"(DOI:10.1016/j.devcel.2024.03.018),该研究发现拟素化耦联酶Ube2f在KrasG12D诱导的胰腺肿瘤发生过程中起着重要的协同作用,是一个靶向胰腺癌的潜在靶点.

目的:探究NEDD8结合酶UBE2F对肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)转移的影响.方法:利用TIMER2.0、UALCAN、HPA等数据库分析UBE2F在肺腺癌中的表达情况;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析UBE2F表达与肺腺癌生存率的关系;运用CRISPR/Cas9技术构建UBE2F敲除的肺腺癌细胞系,并构建UBE2F敲除的裸鼠肺腺癌转移瘤模型,验证UBE2F敲除对肺腺癌转移的影响;通过细胞划痕实验以及Transwell迁移和侵袭实验检测UBE2F敲除对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blot法和Real time PCR法检测下调UBE2F表达对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)转录因子Snail表达的影响.结果:多个数据库分析表明,UBE2F在肺腺癌中高表达,且高表达患者比低表达患者具有更好的预后;体内实验表明,与对照组相比,UBE2F敲除后裸鼠肺表面转移的小结节数目显著增多(P<0.05);细胞划痕实验以及Transwell实验表明,UBE2F敲除增强肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot和Re-al time PCR结果显示,UBE2F敲除升高EMT转录因子Snail蛋白水平和mRNA水平.结论:敲除UBE2F诱导Snail积聚,进而导致肺腺癌细胞的侵袭和转移.

泛素化系统调节真核细胞中几乎所有的生命活动,参与细胞内绝大多数蛋白质的降解,而疾病的发生往往伴随着相关蛋白质的异常.研究与疾病相关蛋白质的泛素化途径,通过该途径促进或抑制其活性对疾病的研究和治疗具有重大的意义.然而,细胞内的泛素传递网络错综复杂,天然条件下很难确认某一特定蛋白质的泛素化途径.我们前期工作建立的正交泛素传递途径中的泛素和泛素化酶含有特殊的突变,是鉴定某一特定E3下游蛋白质底物的有效手段.但E1与E2结合位点的突变设计仍有待完善.本研究重新审视了E1-E2的相互作用,着眼于泛素活化酶Ube1活性中心内的疏水区,突变了该区上3个关键的苯丙氨酸残基为丙氨酸,即F637A、F729A、F741A,并设置合理的实验对照来探究此突变对泛素从E1向E2传递活性的影响.结果表明,突变体mUbe1较好地阻断了与UbcH7的识别及Ub的传递,提示本研究涉及的3个关键苯丙氨酸位点对E1-E2互相识别的重要性,及其作为新的正交泛素传递途径中E1突变位点的合理性.

目的 从分子层面分析EB病毒(EBV)相关伯基特淋巴瘤(BL)的差异表达基因(DEGs),为其诊疗提供新的思路.方法 从美国国立生物技术信息中心(NCBI)获取EBV阳性与阴性BL相关基因芯片数据集GSE100458.通过morpheus筛选出DEGs,分别将上调和下调基因输入Database for Annotation Visualizationand Integrated Discovery(DAVID)数据库,进行GO分析;进一步采用cytoscape筛选出10个TOP基因,实时荧光定量PCR方法验证其在EBV阳性与阴性BL细胞系中表达情况.结果 分析EBV阳性和EBV阴性的BL细胞系的前400个DEGs,包括200个上调基因和200个下调基因,上调基因主要集中在生长因子活性通路、肝素结合通路、细胞外间隙通路;下调基因主要集中在伽马微管蛋白结合通路、内质网膜通路、逆行性小囊泡运输通路.对DEGs进行蛋白质相互作用分析后,筛选出核心基因乙酰辅酶A羧化酶β(ACACB)等10个基因.实时荧光定量PCR检测结果显示,在EBV阳性与阴性BL组间,CDH1、PRPF19、UBE2N、F2、H6PD、VEGFA、YARS共7个基因的转录表达差异有统计学意义(t=3.878～32.601,P＜0.05),ACACB、CTTN、IGF1共3个基因表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EBV感染可导致宿主细胞基因表达谱的改变,生物信息学分析法可初步筛选出DEGs和相互作用的蛋白,为进一步深入研究提供有价值的信息和思路.