神经前体细胞表达发育下调蛋白-8（NEDD8）是类泛素家族的重要成员之一，通过与底物共价结合（又称neddylation修饰），在维持细胞稳态及调节细胞周期、信号转导、转录翻译、DNA修复、肿瘤生成等方面发挥重要的作用。近年研究发现NEDD8及相关酶的功能紊乱在肝脏疾病中普遍存在，广泛参与肝炎、肝纤维化以及肝癌细胞的增殖、侵袭、凋亡与自噬等生物学过程。现重点就NEDD8在肝脏疾病中的研究进展进行综述。

目的:探究NEDD8结合酶UBE2F对肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)转移的影响.方法:利用TIMER2.0、UALCAN、HPA等数据库分析UBE2F在肺腺癌中的表达情况;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析UBE2F表达与肺腺癌生存率的关系;运用CRISPR/Cas9技术构建UBE2F敲除的肺腺癌细胞系,并构建UBE2F敲除的裸鼠肺腺癌转移瘤模型,验证UBE2F敲除对肺腺癌转移的影响;通过细胞划痕实验以及Transwell迁移和侵袭实验检测UBE2F敲除对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blot法和Real time PCR法检测下调UBE2F表达对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)转录因子Snail表达的影响.结果:多个数据库分析表明,UBE2F在肺腺癌中高表达,且高表达患者比低表达患者具有更好的预后;体内实验表明,与对照组相比,UBE2F敲除后裸鼠肺表面转移的小结节数目显著增多(P<0.05);细胞划痕实验以及Transwell实验表明,UBE2F敲除增强肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot和Re-al time PCR结果显示,UBE2F敲除升高EMT转录因子Snail蛋白水平和mRNA水平.结论:敲除UBE2F诱导Snail积聚,进而导致肺腺癌细胞的侵袭和转移.

神经前体表达发育下调蛋白8(neural precursor cell-expressed developmentally downregulated 8,Nedd8)是一种类泛素蛋白,其参与蛋白质修饰的作用机制与泛素高度相似,即通过与底物的赖氨酸残基共价结合,从而对底物进行Neddylation修饰.Neddylation修饰可调控多种重要的生命活动,如细胞周期和免疫应答等.Nedd8蛋白酶1(Nedd8 protease 1,NEDP1)是隶属于小类泛素修饰物特异性蛋白酶家族(small ubiquitin-like modifier specific protease family,Ulp/Senp family)家族的半胱氨酸蛋白酶,可以特异性去除底物与Nedd8的共价结合,例如,NEDP1能够去除p53、鼠双微体蛋白(murine double minutes 2 protein,Mdm2)、smad泛素化调节因子1(smad ubiquitylation regulatory factor 1,Smurf1)等多个蛋白质的Neddylatio修饰,进而调节Neddylation修饰蛋白的生物学功能.临床研究表明,NEDP1与肿瘤的发生发展密切相关,包括肺癌、结肠癌、胶质母细胞瘤等,另外,NEDP1还参与成骨发育异常、神经退行性疾病、血管炎症等病变过程.本文对NEDP1蛋白的结构,调控Neddylation通路的作用模式和NEDP1作用底物的进展进行总结,以期为肿瘤等相关疾病的诊断和治疗提供参考.

类泛素化修饰neddylation是一种与泛素化类似的蛋白质翻译后修饰,这一过程通过一系列级联反应将标签分子NEDD8结合到靶蛋白上,从而影响被修饰蛋白质的结构功能.包括Cullin家族在内大多数的neddylation修饰底物同时也是泛素连接酶E3的底物或其组成部分,因而,neddylation修饰过程与泛素化一样广泛参与到细胞的生长代谢等生命活动中并对基因的表达调控起着重要的作用.该文着重对neddylation修饰过程与肿瘤相关信号通路和肿瘤微环境之间的联系以及靶向neddylation途径进行癌症治疗的相关研究进行综述.

迄今为止,心血管疾病被认为是威胁全世界人类健康的最常见疾病之一,不仅病死率高,而且对患者的生活质量和生存有很大影响.心血管疾病的发生和发展涉及许多环境和行为因素,而且有研究[1-2]证实许多表观遗传变异参与心血管疾病的病理生理过程.翻译后修饰是细胞内蛋白活性及表达的重要调控机制之一,是一种普遍存在于特定氨基酸残基上的化学修饰.可逆的翻译后蛋白修饰是真核细胞功能的主要调节因子,其最普遍的形式包括磷酸化、甲基化、泛素化、类泛素化和乙酰化,已被确定为涉及各种信号通路、代谢和其他生物过程的主要调控机制[3].Neddylation是一类新型蛋白翻译后修饰,可将泛素样蛋白 NEDD8 ( neural precursor cell-ex-pressed developmentally downregulated 8 )与靶蛋白结合.Neddylation通过改变底物的构象、稳定性、亚细胞定位或与DNA、蛋白质结合的亲和力来调节多种细胞过程,包括泛素蛋白-蛋白酶体系统介导的蛋白质降解、蛋白质转录、细胞信号传导等[4] ,与细胞损伤、细胞内环境的异常以及某些心血管疾病的发生和发展有关.因此, Neddylation可作为预防或治疗心血管疾病的潜在靶标.

目的:探讨miR-18b-5p调控神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制.方法:qRT-PCR检测人正常乳腺癌上皮细胞MCF-10A与2株乳腺癌细胞株(SKBR-3和SKBR-3/PR)中miR-18b-5p的表达水平;Western blotting检测SKBR-3/PR细胞来源外泌体的表面标志物;CCK8和Transwell实验检测SKBR-3/PR细胞转染miR-18b-5p inhibitor并提取的外泌体与SKBR-3细胞共培养后对SKBR-3细胞增殖和侵袭、迁移能力.生物信息学预测软件Target Scan预测miR-18b-5p与NEDD9的靶向结合位点.双荧光素酶实验分析miR-18b-5p与NEDD9的靶向调控关系.Transwell实验检测上调NEDD9对SKBR-3细胞侵袭迁移能力的影响.结果:miR-18b-5p在乳腺癌细胞株中相对于正常乳腺癌上皮细胞中高表达(P<0.01);SKBR-3/PR细胞来源的外泌体高表达CD63和TSG101等特异性蛋白(P<0.01),SKBR-3/PR细胞转染miR-18b-5p inhibitor提取外泌体后对SKBR-3细胞的增殖、侵袭和迁移显著被抑制(P<0.01).生物信息学软件Target Scan预测结果显示,NEDD93'UTR上存在潜在与miR-18b-5p靶向结合的位点,miR-18b-5p能够负向调控NEDD9基因表达(P<0.01).过表达NEDD9能抑制SKBR-3细胞侵袭能力(P<0.01).结论:miR-18b-5p通过靶向NEDD9促进乳腺癌细胞侵袭、迁移.

目的:通过生物信息学手段筛选乳腺癌中差异表达的关键miRNA及其靶基因,干预其在乳腺癌细胞中的表达并观察对乳腺癌细胞功能的影响.方法:利用GEO数据库筛选在乳腺癌中差异表达的miRNA,ENCORI数据库验证差异miRNA的表达,以选定最显著的差异表达miRNA为研究对象;利用Starbase、miRDB和miRWalk数据库预测miR-32-5p的靶基因,利用DAVID数据库对靶基因进行GO分析和KEGG分析,利用String数据库联合Cytoscape3.6.2软件进行PPI网络分析及核心基因的筛选,从核心基因中选择相互联系紧密"度值"最显著的Dickkopf相关蛋白3(DDK3)基因进行后续实验.qPCR检测miR-32-5p在人正常乳腺细胞MCF10A和人乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、MDA-MB-453细胞中的表达.向MDA-MB-231细胞中转染miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor及各自的对照(NC)序列,分别用CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测过表达或抑制miR-32-5p对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.结果:从GEO数据库中获取的两个数据集共识别出两个差异miRNA,ENCORI数据库验证差异miRNA的表达发现miR-32-5p的表达水平与GEO数据库的结果一致,故选择其进行研究;预测得到198个miR-32-5p潜在的靶基因并鉴定出10个核心基因(DKK3、WNT2B、SFRP5、SFRP2、SFRP1、LRP6、WNT6、KREMEN1、NEDD4L、TRIP12),其中DKK3的度值最大可能在乳腺癌中较为重要,于是选择miR-32-5p/DKK3轴进行后续研究.miR-32-Sp在3种乳腺癌细胞中的表达水平显著高于正常乳腺细胞(均P＜0.01),其中以MDA-MB-231细胞中表达最高.双荧光素酶基因报告实验验证了miR-32-5p与DKK3基因的靶向结合及其对后者表达的负向调控.转染miR-32-5p mimic、miR-32-5p inhibitor后成功提高或抑制了MDA-MB-231细胞中miR-32-5p的表达.与对照组相比,过表达miR-32-5p可抑制MDA-MB-231细胞的凋亡而促进细胞增殖和侵袭(P＜0.05或P＜0.01),敲低miR-32-5p则起相反的作用(均P＜0.01).结论:miR-32-5p/DKK3轴可能是影响乳腺癌发生发展的关键通路,过表达miR-32-5p能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡而促进细胞增殖和侵袭.

蛋白质的Neddylation修饰是一种类泛素化修饰,是将类泛素蛋白NEDD8标记到底物蛋白的可逆修饰过程.Neddylation修饰对蛋白质功能具有重要调节作用,可诱导底物蛋白发生构象变化、改变其亚细胞定位、激活或抑制其酶活性,还可通过与其它泛素分子竞争结合改变其蛋白稳定性等.研究表明,Neddylation修饰的异常与包括肿瘤在内的多种疾病相关,提示Neddylation修饰是疾病治疗的新靶标.Neddylation修饰的小分子抑制剂MLN4924的发现极大地促进了 Neddylation修饰领域的发展,为多种疾病的治疗开辟了新思路.研究表明,MLN4924具有抗病毒、抗炎及广泛的抗肿瘤活性,对多种疾病具有良好潜在治疗作用,作为癌症治疗药物的多项临床试验研究正在进行中.文章就蛋白质Neddylation修饰及其抑制剂MLN4924与疾病的最新研究进展进行综述.